原發性高血壓并發2型糖尿病患者與MTHFR C677T基因的相關性研究

隋小芳,徐 男,費秀斌,黃佳濱,范巧菊,王鳳玲*

(1.佳木斯大學附屬第一醫院 老年病科,黑龍江 佳木斯154002；2.佳木斯大學老年醫學研究生)

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)催化5，10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-甲基四氫葉酸，這一過程為同型半胱氨酸到甲硫氨酸的甲基化提供了碳源[1]。MTHFR C>T的轉換導致酶活性的降低，進而同型半胱氨酸水平增高[2]。本研究旨在通過檢測高血壓并發糖尿病患者中MTHFR C>T的突變頻率，探討高同型半胱氨酸水平與糖尿病的發生和發展的關系，為臨床更好的治療和預防高血壓和糖尿病的發生和發展奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究總計納入了從2017年11月到2018年3月就診于佳木斯大學附屬第一醫院的患者，嚴格按照實驗納入標準排除后有317人符合，同時，選取同期體檢中心73人作為對照組共同納入本研究。最終，本研究共納入113名高血壓患者(HTN組)、101名2型糖尿病患者(T2D組)、103名高血壓并發2型糖尿病組(HTN+T2D組)和73名健康人(control組)。

所有以上研究對象是長期居住在佳木斯地區且沒有血緣關系的漢族人，本研究已經通過佳木斯大學附屬第一醫院倫理委員會的認可，且已經獲得研究對象的知情同意書，同意提供外周靜脈血做基因型檢測分析。

1.2 納入標準

(1)年齡≥18歲；(2)沒有重大疾病(肝腎衰竭、癌癥等)或傳染性疾病史；(3)原發性高血壓組納入標準參照2017年《高血壓防治指南》；(4)2型糖尿病診斷標準符合1999年WHO糖尿病專家委員會報告。

1.3 實驗方法

采集所有受試者靜脈血2 ml于紫色抗凝真空采血管中，放置-20℃冰箱中冷藏保存。DNA提取使用傳統的實驗方法(酚氯仿方法)。采用聚合酶鏈式反應-限制片段長度多態性對SNP進行基因型分析，并用高分辨溶解曲線進行基因型分析。為了保證基因分型的質量，我們隨機選擇了三個基因型樣品進行直接測序,未見差異。

1.4 統計學處理

運用SPSS 19.0版本做數據處理和分析。哈迪溫伯格平衡分析檢驗群體的代表性，t檢驗用于樣本均值間的比較，分類變量用頻率表示；χ2檢驗分析MTHFR等位基因頻率與基因型頻率比較。本研究所有的統計檢驗結果均為雙尾，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 各實驗組臨床資料的比較

HTN組、T2D組、HTN+T2D組分別與control組的比較，結果見表1。四組在年齡、性別無明顯差異(P>0.05)。其中HTN組、T2D組、HTN+T2D組中同型半胱氨酸水平分別高于control組，且差異有統計學意義(P<0.05)。T2D組、HTN+T2D組中甘油三酯水平高于control組，HTN組、HTN+T2D組中血壓高于control組，差異均有統計學意義(P<0.05)，其余未見有明顯差異(P>0.05)。

表1 各實驗組臨床基線數據的比較

注：M:男,F:女,Hcy:同型半胱氨酸TG:甘油三酯,TC:總膽固醇,LDL:低密度脂蛋白,HDL:高密度脂蛋白,FBG:血糖,SBP:收縮壓,DBP:舒張壓,PP:脈壓差。*表示P<0.05。

2.2 各實驗組患者哈迪溫伯格平衡分析

HTN組、T2D組、HTN+T2D組和control組的哈迪溫伯格平衡分析檢驗結果見表2，結果顯示各組P>0.05，說明樣本具有群體代表性。

表2 各實驗組患者MTHFRC677T的哈迪溫伯格平衡分析

2.2 各實驗組患者MTHFR C677T基因型和等位基因頻率的比較

HTN組、T2D組、HTN+T2D組和control組MTHFR C677T基因型和等位基因頻率的組間比較，結果見表3。HTN組、T2D組、HTN+T2D組T等位基因頻率顯著高于control組，且差異有統計學意義(61.06% vs.41.78%,61.39% vs.41.78%,53.88% vs.41.78%,Prangge=0.0003-0.03)；HTN組、T2D組TT基因型頻率明顯高于control組，差異有統計學意義(38.94% vs.13.70%,34.65% vs.13.70%,P=0.0007)，HTN+T2D組TT基因型頻率高于control組，但無統計學差異(25.24% vs.13.70%,P=0.06)，其余組未見明顯差異(P>0.05)。

表3 各實驗組患者MTHFRC677T的基因型頻率和等位基因頻率

注：P<0.05為有統計學意義。

3 討論

高血壓并發糖尿病患者的心血管疾病發生率會明顯上升，基于這兩種疾病基礎罹患心血管疾病風險增加2-4倍[3]。近來有研究表明同型半胱氨酸水平與2型糖尿病及心血管疾病相關，MTHFR C>T降低了酶的活性，引起同型半胱氨酸水平增高，機體活性氧的破壞性產生導致胰島素抵抗，進而引起糖尿病的發生[4，5]。國外有研究表明MTHFR C>T與糖尿病無明顯關聯，與本實驗研究結果不同，可能是由于地區、種族差異，使基因變異的頻率不同，如C677T的TT基因型的頻率在印度的拉其普特地區人群中發現為7.8%，而在印度的科姆、梅泰、帕特等地區人群中未發現這種基因型[6，7]。此外，本研究結果顯示高血壓并發2型糖尿病患者的MTHFR 677T基因型頻率均低于單純高血壓和糖尿病患者，CC、CT基因型頻率高于單一病種的患者，但未有統計學意義，未來需進一步研究。

綜上，本研究結果表明：MTHFR 677T基因型與高血壓和2型糖尿病的發病風險相關；與高血壓并發2型糖尿病可能無關，尚需未來進一步探討。