ECRG4在口腔鱗癌中的表達及其臨床意義

尹國相，徐文品，鄒俊東，焦 琨，劉冬蕊，邢如霄，葉佳朋，張 偉*

(吉林大學口腔醫院 1.口腔頜面外三科·吉林省牙發育及頜骨重塑與再生實驗室；2.修復科,吉林 長春130021)

口腔鱗狀細胞癌(OSCC)是口腔頜面部最常見惡性腫瘤，約占頭頸部惡性腫瘤80%以上[1]，本研究通過免疫組織化學技術檢測食道癌相關基因4(ECRG4)在口腔鱗癌中的表達情況，分析其與口腔鱗癌病理分型的關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2017-2018年經吉林大學口腔醫院確診的30例OSCC患者，其中男性18例，女性12例，年齡47-76歲；其中高分化鱗癌12例，中分化鱗癌12例，低分化鱗癌6例，對應的癌旁組織30例，收集10例正?；颊哐例l組織。納入標準：患者均系成年人，病例資料完整，無其他系統性疾病，術前無放療、化療或激素治療史，術后均經病理組織學確診。病理標本均連續切片，每例標本選取不同部位切片5張。

1.2 方法

ECRG4多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，工作濃度1∶500；兔源性超敏二步法免疫組織化學檢測試劑盒、濃縮型DAB試劑盒購自北京中杉金橋公司；山羊血清、枸櫞酸鹽抗體修復液購自武漢博士德生物工程有限公司。免疫組化染色按試劑盒說明書操作。采用OlympusBX51T顯微鏡進行觀察、拍照。

1.3 結果判定標準

采用半定量分析，顯微鏡下隨機選取5個視野觀察，按陽性著色范圍和陽性染色強度分別計分。陽性細胞數量積分：陽性細胞數≤5%記0分，5%<陽性細胞數≤25%記1分，25%<陽性細胞數≤50%記2分，50%<陽性細胞數≤75%記3分，陽性細胞數>75%記4分；染色強度積分：無色記0分，淡黃色記1分，黃色或深黃色記2分，棕褐色記3分。染色強度積分與陽性細胞數量積分相加，≥6分為強陽性(+ + +)，4、5分為陽性(+ +)，2、3分為弱陽性(+)，0分為陰性(-)，弱陽性(+)和陰性(-)記陰性表達，強陽性(+ + +)和陽性(+ +)記陽性表達。

1.4 統計學分析

使用EXCEL和SPSS 24.0統計軟件進行分析。采用χ2檢驗、t檢驗對本實驗的結果進行相應統計分析，所有統計數據以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 鱗癌組織、癌旁組織及正常組織中ECRG4表達情況

30例口腔鱗癌組織中，ECRG4陽性表達14例，陽性表達率46.7%(14/30)；相對應30例癌旁組織中,ECRG4陽性表達20例，陽性表達率66.7%(20/30)；10例對照組中ECRG4全部陽性表達，陽性表達率100%(10/10)。三組間差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 鱗癌組織、癌旁組織及正常組織中ECRG4表達情況

2.2 不同分化程度鱗癌組織中ECRG4表達情況

高分化鱗癌組織12例，ECRG4陽性表達9例，陽性表達率75%；中分化鱗癌組織12例，ECRG4陽性表達4例，陽性表達率33.3%；低分化鱗癌組織6例，ECRG4陽性表達1例，陽性表達率16.7%，可見分化程度越低，ECRG4表達下調越明顯，三組間差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 OSCC患者癌組織中ECRG4陽性表達率

3 討論

口腔鱗狀細胞癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，常規治療手段包括手術治療、放療和化療，但以上三種方法均會對患者造成不同程度的副損傷，因此，尋找腫瘤特異性治療的靶點，成為近年來學者關注的熱點。

ECRG4是使用mRNA差異顯示技術從高癌癥家族和正常食管組織分離的差異表達序列[2]。ECRG4的基因位于染色體2 q14.1-14.3，是一段約12500個堿基組成的序列，其cDNA全長為772 bp，開放閱讀框由444個堿基組成，編碼148個氨基酸殘基的多肽[3]。在大量正常組織中均有表達，包括食管、眼、乳房、心臟、腎臟、腸道、淋巴細胞等。體外實驗也表明，在多種腫瘤細胞中，如結腸癌細胞，人頭頸部腫瘤細胞，人喉癌細胞中過表達ECRG4可以促進腫瘤細胞的凋亡，抑制腫瘤細胞的增殖[4，5]，因此，ECRG4被認為是一種候選抑癌基因。Wen等發現食管癌患者中ECRG4的表達水平與食管癌患者的TNM分期，腫瘤的浸潤程度，淋巴結轉移程度及手術后復發率密切相關[6]，而類似的現象在乳腺癌、結腸癌和鼻咽癌中也得到證實[7-9]。

本研究結果顯示：ECRG4在口腔組織中有表達。30例口腔鱗癌組織中ECRG4陽性表達率明顯低于口腔正常組織，而腫瘤分化程度越低，其表達下調越明顯，說明ECRG4與口腔鱗癌的發生、發展密切相關，而與患者年齡、性別無關，說明ECRG4可以作為一種口腔鱗癌候選抑癌基因，其發揮抑癌作用的機制可能是通過下調 NF-κ 以及該通路的靶基因—Cox-2 的表達來實現的[15]。本研究初步探討ECRG4在口腔鱗癌中的表達及其臨床意義，旨在為口腔鱗癌的基因治療及分子靶向治療提供新的研究方向。