三種類型HIV抗體檢測技術的方法學評價

譚建兵

【摘 要】：目的：為了了解目前艾滋病抗體診斷試劑的敏感性、特異性等性能，我們利用不同原理的艾滋病病毒抗體診斷方法進行綜合評價。方法：使用基礎血清盤、干擾樣本血清盤、線性稀釋系列血清盤、精密度血清盤、CAP血清盤、商業陽轉血清盤這六種血清盤對艾滋病病毒快速檢測方法、酶聯免疫（ELISA方法）和化學發光免疫法（CLIA）三種方法的診斷試劑進行分析，其分析的內容主要是診斷試劑的敏感性，特異性，分析靈敏度分析，特異性以及精密度等指標。結果：我們對目前被有的六種抗體進行測試，發現ABCDEF這六種試劑在適用基礎血清盤進行評估的前提下，它們的敏感性為百分之百，特異性大于97.5%。在使用商業陽轉血清盤進行評價的前提下，A試劑的陽性率為18.2%，B試劑的陽性率為16.7%，C試劑的陽性率為33.3%，D試劑的陽性率為37.9%，E試劑的陽性率為19.7%，F試劑的陽性率為18.2%。結論：我們發現所有參與研究的診斷試劑當中，敏感性和特異性最高的兩種試劑是快速診斷試劑以及ELISA試劑，敏感性相對較高的是抗原抗體檢測試劑，但CLIA試劑法在HIV抗體中具有更好的臨床價值，準確性、特異性、靈敏度均高，CLIA靈敏度相對ELISA稍高。因此，以上三種試劑可以作為抗體篩選試劑。

【關鍵詞】：艾滋病病毒；抗體診斷試劑；抗原抗體診斷試劑；重組免疫印跡試劑；快速診斷試劑；陽轉血清盤

【中圖分類號】R512.91 【文獻標識碼】A 【文章編號】1005-0019（2019）05--02

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清盤：本次研究使用的六種血清盤都來自艾滋病國家參比實驗室，全部是使用獻血者的血樣來制作的血清盤，基礎血清盤是由40份陽性樣本和40份陰性樣本組成，本次研究使用的干擾樣本血清盤是由十五個乙肝表面抗原抗體陽性樣本，十五個梅毒抗體陽性樣本以及十個丙型肝炎病毒抗體陽性樣本組成。

1.1.2 試劑：本次研究使用的八種試劑可以分為三類，它們分別是酶聯免疫吸附試驗法使用的萬泰人類免疫缺陷病毒1+2型號的抗體免疫試劑盒，萬泰人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒，麗珠人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒，Bio-Rad人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒。一類是膠體法使用的雅培類免疫缺陷病毒1+2型號的抗體免疫試劑盒，萬泰人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒。還有一類是重組免疫印跡法使用的萬泰人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒。

1.1.3 儀器：安圖酶標儀；恒溫箱；搖床 LIAISON XL發光儀

1.2 方法 ELISA 法選用的儀器及設備為BIO-RAD 680酶標儀，MINDRAY MW-12A洗板機。CLIA 法選用LIAISON XL發光儀及其配套試劑。具體檢測方法：取6 ml肘正中靜脈血，放置于離心管內待凝固，于4 000 r/min條件下離心10 min，取上層清液等分成兩份分別放置于兩個試管采用ELISA法、CLIA 法檢測，所有操作必須嚴格按照試劑盒說明書執行。最后采用蛋白印跡檢測法確證

1.2.3 統計方法：本次研究得到的數據是使用SAS9.3軟件進行統計分析，分析結果會呈現出四格表的形式。

2 結果

2.1 能力檢驗血清盤評價人員能力結果：進行本次研究的操作人員操作水平已經能夠滿足專業評價實驗的要求，他們進行檢驗得到的結果與預期檢驗結果一致。

2.2 敏感性及特異性：本次研究檢測的兩種艾滋病病毒抗體檢驗試劑，兩種艾滋病病毒抗原抗體檢驗試劑以及兩種艾滋病病毒快速診斷試劑的共有40支，通過數據分析，我們發現這四十支試劑的一共有四十支藥劑具有敏感性，因此其敏感性達到100%；四十支藥劑有三十九支具有特異性，其特異性>97.5%在使用商業陽轉血清盤進行評價的前提下，A試劑的陽性率為18.2%，B試劑的陽性率為16.7%，C試劑的陽性率為33.3%，D試劑的陽性率為37.9%，E試劑的陽性率為19.7%，F試劑的陽性率為18.2%。A-DELISA 檢測試劑板內精密度值介于4.40%～24.98%之間。

2.3 分析靈敏度：我們可以通過對各種試劑的檢測結果相比核酸檢測結果延長天數來進行分析靈敏度的評價，其具體做法是記錄各種試劑在血清盤中檢測出來的首份陽性樣本時間與核酸檢測出來首份陽性樣本采集時間之間的差異以及兩個時間的比值。

2.4 板內精密性：各種試劑出現的變異系數都低于25%。

3 討論

目前，用來檢測艾滋病病毒的試劑有艾滋病病毒快速檢測、CLIA、ELISA等，其中最常使用的是艾滋病病毒快速檢測，因為它具有操作簡單、對技術人員要求不高、成本低、操作時間短等優勢。

ELISA檢測試劑盒的原理是將用特定酶標記的待測抗原或抗體先固定在載體表面，然后觀察酶是否與待測物發生反應。本次實驗的樣本有限，要想真正提高艾滋病病人治療與健康管理方面的效果，我們還需要對他們提出更多的關懷

本次研究表明，CLIA 法和ELISA 法的HIV抗體陽性檢出率、陽性預測值、特異度、靈敏度等對比，差異不具有統計學意義（P>0.05），但CLIA法檢測靈敏度稍高于ELISA法。

綜上所述，快速檢測、CLIA法和ELISA法在HIV抗體檢測中均具有較高的臨床價值，準確性、特異度、靈敏度均相對較高，CLIA法靈敏度相對ELISA法稍高。

參考文獻

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