需優先發展防控手段的10種人獸共患病毒病

2015年12月8日，WHO邀請了部分病毒學、微生物學、公共衛生和臨床等領域權威專家，遵循大健康(one health)的原則，列出5至10種在診斷、藥物和疫苗等應急應對方面優先研究和研發(R&D)的傳染病，這些優先研發人獸共患病毒病不包括已成為全球公共衛生重要問題的HIV/AIDS、結核、瘧疾等傳染病。于是克里米亞剛果出血熱(Crimean-Congo haemorrhagic fever，CCHF)、埃博拉病毒病(Ebola virus disease，EVD)、馬爾堡病毒病(Marburg virus disease,MVD)、拉沙熱(Lassa fever，LF)、中東呼吸綜合征(Middle East Respiratory Syndrome，MERS)、嚴重呼吸綜合征(Severe acute respiratory syndrome，SARS)、尼帕病毒病(Nipah virus diseases，NVD)、裂谷熱(Rift valley fever，RVF)為優先研發病種[1]。 2018年2月6-7日，WHO第二次召集有關專家，采用德爾菲、問卷調查和多準則決策分析(Multi - Criteria Decision Analysis， MCDA)法等，再次評出需優先研發的傳染病，CCHF、EVD、,MVD、LF、MERS、SARS、NVD、RVF仍在列，并增添了寨卡病毒病(Zika virus diseadse，ZVD)、亨德拉病毒病(Hendra virus diseases，HVD)和未知傳染病(Disease X)。除未知傳染病用X代表無法預測外，把同為絲狀病毒病的SARS和MVD歸為一類，合并主要在南亞和澳大利亞傳播的NVD和HVD，使已流行的傳染病增為8類10種[2]。在這些病原中，CCHF在我國新疆存在，此外2016年2月、9月，分別在我國的江西、廣東和鄭州等地發現由美洲傳入的ZVD。基于我國是人口大國，這些傳染病的傳入也將危害我國人民的健康和引發社會經濟的問題。因此本綜述簡介這些病毒病的主要臨床特征、危害和疫苗研制概況，目的使相關機構和人員重視這些病，為防控做好基礎準備。

1 10種人獸共患病毒病的危害及疫苗研制的主要方向

1.1 CCHF

1.1.1CCHF及其危害 CCHF是歐、亞、非三大洲都有分布的蜱媒自然疫源性病毒性疾病。人群普遍易感，感染發病以青壯年為主，但也有2.5～3歲嬰幼兒被感染。潛伏期2～12 d。起病急驟，惡寒戰栗，體溫可上升至39～41℃。頭痛劇烈，周身肌痛，四肢關節酸痛劇烈，甚至難以行走。病程早期顏面和頸項部皮膚潮紅，眼結膜、口腔黏膜以及軟腭均見明顯充血。表面黏膜和皮膚在早期即可見到出血點或淤血斑。病程中期見有嘔血，嚴重時連續大量嘔血，同時發生血尿和血便。多有肝腫大，但脾腫大者少見。其臨床表現與其他型出血熱相似，惟腎臟的損傷較為輕微。患者入院時多呈重癥，病死率高達50%。本病因在克里米亞和剛果相繼發現而得名。該病在我國國內首先發現于新疆巴楚縣，南疆地區多，北疆地區也有檢出抗體，故在我國又稱新疆出血熱。從1956年有記載至今，全球已暴發37起疫情，主要病例發生在歐洲及中東地區[3-4]。

克里米亞-剛果出血熱病毒(Crimean-Congo haemorrhagic fever virus, CCHFV)屬于布尼亞病毒科的內羅畢病毒屬。病毒顆粒呈圓形和橢圓形，直徑約85～120 nm，外被包膜。CCHFV通過蜱蟲叮咬或在屠宰動物過程中和屠宰后與病毒感染的組織接觸而傳播[4]，其分布廣，病死率高，無有效藥物及防控手段。

CCHFV被列為一類高致病性病原體，操作須在生物安全級別最高的4級實驗室(BSL-4)進行[5]，歷史上認為該病原有可能被恐怖分子改造為生物武器。

1.1.2CCHFV基因組及疫苗研制 CCHFV基因組為單股負鏈RNA，分大(L)、中(M)、小(S)3個片段，每個片段分別有單獨的核衣殼包裹；且每個片段的3C(-AGAGUUUCU)和5C(-UCUCAAAGA)末端保守及互補，可形成環狀或柄狀結構，作為病毒復制子區。病毒基因組A+U含量〉G+C含量，L片段RNA約12 000 nts，編碼L蛋白(〉200×103 kDa)；S片段RNA約1760～2050nts，編碼N蛋白(48 000～54 000 kDa)，N蛋白是在感染細胞可以檢測到的病毒主要蛋白；M片段RNA約41400～61300 nts，分別編碼糖蛋白Gn(30 000～45 000 kDa)和Gc(72 000～84 000 kDa)，Gn和Gc是產生中和抗體的主要抗原蛋白[6]，目前主要用Gn和Gc為抗原發展各類疫苗。包括DNA疫苗、植物苗、安卡拉(Ankara)病毒載體疫苗及其修飾苗 (MVA)、腺病毒載體苗等，目前只有MVA苗2017年底受英國政府曾資助進入Ⅰ期臨床試驗。

由于該病危害大，因此蘇聯用乳鼠腦培養CCHFV，用58℃氯仿滅活，再用Al(OH)3吸附研制成滅活病毒疫苗。該苗1974年即被保加利亞批準用于CCHF流行嚴重地區的軍事人員(包括醫療和農業人員)的預防接種。目前使用的疫苗株為V42/81，其原始株系1981年從一病人材料中分離的病毒株。據保加利亞衛生部報告，在使用了該疫苗后的22年間，CCHF 的病例有4倍減少(1953-1974: 1 105例; 1975-1996, 279例)[7]。這種簡單分析引來很多批評意見，包括是否帶毒蜱減少、病例減少原因等未與鄰國進行比較。

1.2 EVD和MVD

1.2.1EVD及其危害 EVD病原埃博拉病毒(Ebola virus, EBV)于1976年在扎伊爾(現剛果民主共和國，DRC)分離發現。EVD主要臨床表現為高熱、體虛、全身關節疼痛和頭痛等癥狀。到目前為止，EBV一共發現有扎伊爾(EBV-Z)、蘇丹(EBV-S)、雷斯頓(EBV-R)、塔伊森林(EBV-T)及本迪布焦(EBV-B)5種亞型，除雷斯頓型在菲律賓發現，并只對非人靈長類(non-human primate，NHP)有致病性外[8]；其他亞型均對人有毒力，以EBV-Z型感染性最強，病死率也最高。EVD從1976年發現至今一共流行27起(含2018在DRC 發生的兩起，最后一起仍未結束流行。EVD在2014及2015年流行最為廣泛、嚴重，涉及了6個非洲國家，疫情遷延至2016年才結束，確認病例28 646人，死亡11 323，其流行亞型為EBV-Z[9]。

EBV的傳播途徑主要是經密切接觸，病毒濃度含量高的氣溶膠亦可引起傳播[10]。首先以家庭照護病例的密切接觸者；其次是嚴重流行地區臨床醫生及護士的大批死亡，使患者躲避醫療機構的救治；再次是不安全的宗教信仰和死者的喪葬行為也造成致死性感染。其天然儲存宿主及在自然界的循環方式尚未被確認，但目前偏向于蝙蝠、某些嚙齒類動物或鳥類作為該病的自然宿主。

2018年4月初，在DRC西部靠近剛果共和國的疆界Equateur省的Bikoro區發生了EVD疫情，包括疑似病例在內的54例EVD病例，有33例死亡，病死率約為61.1%。雖然rVSVΔG-ZEBOV-GP疫苗[13]曾經過NHP臨床前研究并曾在2015年在幾內亞EVD流行末期使用過，但仍未獲批，在疫情暴發時，鑒于該疫苗使用的良好記錄，無國界醫生組織和WHO仍然使用rVSVΔG-ZEBOV-GP疫苗[15]，使得本次疫情得到控制。但在7月底，DRC距Bikoro區2 500 km的北Kiru省及周邊地區又發現EVD可疑病列，經DRC衛生部授權的金莎薩國家研究所(the Institut National de Recherche Biomédicale ，INRB)正式報告確認了4例EVD病例，并從時間及間隔距離兩個方面判斷否認該疫情是Bikoro區EVD疫情的繼續。為此DRC再次使用rVSVΔG-ZEBOV-GP疫苗并建立了191個疫苗接種環，為25 298名合格及知情同意者接種了疫苗；截至12月15日止，本次疫情已報告確認病例483例，可疑48例，已死亡313例。 在10月23-25日WHO召開的免疫接種專家組(SAGE)工作會上， 雖然這種環接種方式受到與會專家的肯定，但由于人口眾多，疫苗未被批準而無法大量生產等因素，目前在DRC Kiru省的EVD疫情仍未結束。因該區與烏干達、盧旺達、南非等國交界，WHO已發出旅游及跨境貿易禁令。

EBV被列為一類高致病性病原體，病毒分離、鑒定等操作須在BSL-4實驗室進行[5]。

1.2.2EBV基因組與疫苗研制 EBV是一種非分節段的RNA病毒，基因組長度約為18 900 nts。病毒屬絲狀病毒科(Filoviridae)，大小平均為長約1000 nm，直徑70-90 nm；有脂質包膜，包膜上有呈刷狀排列的突起，主要有病毒糖蛋白(Glycoprotein,Gp) 組成，在病毒粒子中心結構的核殼蛋白由螺旋狀纏繞的基因體RNA核殼蛋白質以及病毒蛋白VP35、VP30、L組成，其基因排列順序為：3′-NP-VP35-VP40-GP-VP30-VP24-L-5′[10]。

EBV疫苗研制的種類繁多，到2014年止，有8種抗EBV疫苗研制出來[11]，比較看好的疫苗主要有兩種，一是黑猩猩3型腺病毒復制缺陷型為載體(ChAd3)的疫苗[12],二是復制型水泡性口炎病毒(VSV)為載體的疫苗[13],二者都插入EBV-Z或EBV-S的Gp，在NHP中都能產生100%抗EBV感染高滴度的中和抗體；但ChAd3疫苗產生的抗EBV中和抗體未能持久，接種數月后下降嚴重，需要增強接種才能恢復保護性免疫，誘導T細胞反應也被認為是保護性免疫的關鍵。在利比里亞進行了ChAd3-EBO-Z和rVSVΔG-ZEBOV-GP疫苗的Ⅱ期臨床試驗(NCT 02344407)，證實這兩種疫苗安全且具有免疫原性，在接種后1年內，79.5%的rVSVΔG-ZEBOV-GP和63.5%的ChAd3-EBOZ免疫對象保持了抗體應答[14]。rVSVΔG-ZEBOV-GP在利比里亞、幾內亞和美國等地進行了約17000人的臨床試驗，并在2015年幾內亞的EBV-Z流行中用環型接種(ring vaccination)策略獲得成功，雖然在流行后期EVD感染病例大為減少，無法進行完整的臨床研究，但該疫苗仍被美國FDA和Priority Medcines授于“突破性療法”這一譽名(默克新聞稿，2016年7月25日)[15]。該苗由加拿大公共衛生局(BPSC 1001)開發，隨后獲得NewLink Genetics和默克夏普公司(Merck Sharp)的贊助。

1.3 MAD

1.3.1MAD及其危害 MAD病原為馬爾堡病毒(Marburg virus，MAV)，其命名源自1967年歐洲實驗室的感染事故。當時在前聯邦德國馬爾堡、法蘭克福和前南斯拉夫首都貝爾格萊德的幾所醫學實驗室的工作人員出現一種類似出血熱的疫情，先后有31人感染，死亡25例，流行病學調查證實患者都曾接觸過從非洲輸入、用于實驗研究的長尾綠猴，從死者組織和急性期病人中分離出病毒，因馬爾堡病例最多，因此稱為MAD。MAD的潛伏期一般為3～9天，病人突然發熱、畏寒、頭痛、全身疲乏、大量出汗、肌肉酸痛、咽痛、咳嗽、胸痛；最初的癥狀很像流感，但隨后病人會出現惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、全身皮疹，最后出現口鼻出血、尿血、陰道出血和消化道出血，嚴重者可發生休克，約有1/4的患者死亡。到目前為止，大小疫情一共報告14起，除馬爾堡外，10人以上病例的疫情主要發生在DRC、安哥拉和烏干達，病死率21%～88%不等[16-17]。

感染病毒的NPH和病人是主要傳染源。通常先由被感染的NHP (如綠猴) 將病毒傳染給人，然后再由病人傳染給其他健康人。馬爾堡病毒的傳染性極強，癥狀越重的患者傳染性越強，潛伏期患者的傳染性弱。MAV在自然界中的儲存宿主尚不清楚，主要經密切接觸傳播，即接觸病死動物和病人的尸體，以及感染動物和病人的血液、分泌物、排泄物、嘔吐物、飛沫等，經粘膜和破損的皮膚傳播。在非洲疫區，因葬禮時接觸病人尸體，曾多次發生本病暴發流行；此外，通過使用被污染的注射器等可造成醫源性傳播。有報道，病人在臨床康復3月內，仍可在精液中檢出馬爾堡病毒，因此，存在性傳播的可能性。通過含本病毒的氣溶膠感染實驗動物也有報道[16]，因此，其生物安全級別和EBV 一樣，其病原必須在BSL-4實驗室里操作[5]。

1.3.2MAD基因組與疫苗研制 MAV與EBV一樣均屬于絲狀病毒科?；蚪M為單股負鏈RNA，長約19 000nts，編碼7種病毒蛋白，包括核蛋白 (nucleoprotein，NP)、病毒蛋白35 (VP35)、VP30、VP24、VP40、糖蛋白4(GP4)、RNA依賴的RNA聚合酶主要成分GP7[16]。

由于MAD的死亡率很高，因此疫苗研制的多種平臺都曾有人試過。如DNA疫苗、腺病毒載體、病毒樣疫苗顆粒平臺等[18-19]；但因MAV與EBV-Z同類，且EBV-Z用VSV為載體的疫苗效果較好，因此MAV在研發中也更多偏向使用VSV 作為病毒載體。與構建EBV疫苗一樣，Mire等[20]用MAV的GPs代替VSV GPs 構建重組VSV(rVSV)為載體的候選苗rVSV-Marv-GP。用rVSV-Marv-GP單次接種6只食蟹猴后約14個月，所有實驗組猴均產生了抗MAV-GP IgG中和抗體；用MAV攻擊后，實驗組動物中沒有一只出現任何臨床疾病或病毒血癥的跡象，證實所有實驗組動物都受到保護；而兩只未接種候選疫苗的對照猴表現出與MAV感染相一致的跡象，并均死于MAV的攻擊。該研究不僅證實rVSV Marv-GP單苗100%的免疫效果，并證實該效果具有持久性。

1.4 LF

1.4.1LF及其危害LF是由拉沙病毒(Lassa virus， LV)引起的，主要經嚙齒動物(多乳鼠屬)傳播的急性病毒性出血熱。臨床主要表現為發熱、化膿性咽炎、胸骨后疼痛和蛋白尿，重癥患者經常發生眼底血壓高、出血。該病在上世紀50年代首次發現，1969年從尼日利亞拉沙鎮2位病死的美國教會醫院護士體內分離出病毒，由此得名[21]。流行地區主要為中非共和國、幾內亞、利比里亞、塞拉利昂和尼日利亞等國家，發病率較高，病死率可達15%～22%。自1969年以來，德國、荷蘭、英國、日本和美國等國家都出現過輸入性LF病例。

LV屬于沙粒病毒科(Arenaviridae)，該科只有一個屬，在西非大部分地區流行。主要宿主為多乳頭鼠屬，該鼠屬攜帶病源率高；LV在該鼠內多呈慢性持續無癥狀感染。傳染源包括其他嚙齒動物，也可以是病人和隱性感染者。主要有三種傳播途徑：氣溶膠傳播、密切接觸傳播、垂直傳播。其潛伏期約6～21 d，妊娠3個月的孕婦和胎兒病死率較高。

LV也屬一類病原體，感染LV可引起高致死率，因此病毒也需在BSL-4級實驗室操作[5]。

1.4.2基因組與疫苗研制 LV基因組由兩個單股負鏈RNA片段組成，一個小片段(S)和一個大片段(L)。S片段編碼糖蛋白前體(GPC)，GPC在病毒的包膜上以三聚體的形式表達，S片段還編碼反方向的核蛋白(NP)，從而包裹病毒基因組；L 片段編碼病毒基質蛋白(Z)和病毒RNA依賴的RNA聚合酶。

LF因宿主的地域性原因，主要在非洲流行。近期病例達數千例，尤以尼日利亞為多。候選疫苗的研究也是多方面的，1987年起有用LV 的NP或GP1、GP2連接疫苗病毒載體對豚鼠及NHP進行試驗；還有用ML29或YFV17D為載體的候選疫苗。雖然2004年就啟用VSV為載體的候選疫苗株對小鼠、2005年對NHP(食蟹猴)進行了試驗，但因為所選的毒株有地域性差別 無法覆蓋所有型別分離株的攻擊；2013年Safronetz等[22]用塞拉利昂分離株(Josiah) GPC構建的VSV-LASV-GPC候選疫苗株可抗利比里亞、馬里和尼日利亞等國家的分離株，所用NHP(恒河猴)實驗動物組抗LV的感染為100%。

1.5 MERS

1.5.1MERS及其危害 2012年在沙特阿拉伯發生一種類似SARS 冠狀病毒病，稱之為新冠狀病毒病，后來發現該病多發生在中東地區，因此改稱為中東呼吸綜合征(Middle east respiratory syndrome，MERS)，其病原為MERS-CoV[23]。截至2018年10月份，WHO接到27個國家的2256例該病例確認報告，病死803例， 病死率35.5%。 約90%報告的病例發生在6個阿拉伯國家(巴林、科威特、卡塔爾、沙特阿拉伯、阿曼和阿拉伯聯合酋長國)。2015年3月，一韓國人到阿拉伯半島旅游感染了MERS-CoV，回國后發病，致使韓國首爾出現了3代病例，本次疫情總計16 000密切接觸者被隔離，186人發病，38人死亡[24]；2018年9月初，又一韓國人在科威特旅游時感染了，但所幸診斷、報告和隔離及時，未造成進一步的感染擴散。

MERS-CoV是致人疾病的第6種冠狀病毒，根據種系發生學區分，MERS-CoV與兩株蝙蝠分離來的冠狀病毒聚類[23]，因此推測MERS-CoV的自然宿主是蝙蝠，中間宿主是單峰駱駝，但目前為止均無實據證明這種傳播模式，WHO也只建議在中東旅行時，不喝生駝奶，不吃未煮熟的駝肉。

根據[5]的規定，參照SARS的安全級別，2012年經我國專家組確定MERS-CoV為二類病原體，其分離、培養等病毒操作應在BSL-3進行，滅活材料可在BSL-2操作。

1.5.2基因組與疫苗研制 MERS-Cov病毒基因組為單股正鏈RNA，大小約為31 000nts，其中5′末端3/4處編碼大復制酶，其開放閱讀框為ORF1a和ORF1b，這些基因被基因組中mRNA翻譯成多聚蛋白及附屬15～16個非結構蛋白(NSPs)；ORF1b編碼S蛋白、E蛋白、M蛋白和 NP蛋白。這些結構蛋白的基因，由病毒亞基因組(Sg)mRNAs翻譯而成，形成5′和3′共同末端，并與病毒基因組嵌套在一起，sg mRNAs由基因組其他1/4的可變部分組成，不同種的冠狀病毒主要區別在基因組3′端[25]。

MERS是一種高致死性傳染病，疫苗靶點為可進入細胞且可產生中和反應的S蛋白。但目前研制的疫苗除了小鼠試驗有效外，還沒有一種商業化人用疫苗研制出來；有的認為單峰駱駝是直接或間接的傳染源，只要簡單的研制獸用疫苗阻斷MERS-CoV的傳播就行。 至2016年止，只有DNA疫苗已進行Ⅰ期臨床試驗，其他4類(減毒、亞單位及重組載體疫苗)約12種候選疫苗均處于臨床前研究階段；目前則認為用改造的MVA病毒載體及黑猩猩腺病毒載體用于MERS疫苗的研制較為合適。

1.6 尼帕和亨德拉病毒病(Nipah and henipaviral diseases，NHVD)

1.6.1尼帕病毒病(Nipah virus disease,NVD)

1.6.1.1NVD及其危害 1998年9月至次年的5月，馬來西亞和新加坡在豬中暴發病毒病，繼后引發豬養殖場和屠宰工作人員的死亡。約有116萬頭豬被捕殺，276人發生嚴重的呼吸及或腦炎綜合癥，107人病死，病死率高達38.8%。從患者體內分離到尼帕病毒(Nipah virus ，NiV)。其后在孟加拉、印度和菲律賓等國也發生疫情，特別是在孟加拉國農村某些地區，每年均有定期疫情，而且傳播方式大多為人傳人，最高病死率可達88%。到2016年為止，已發生過12次NVD疫情，但多在南亞[26-27]。

NiV屬于副粘病毒科(Paramyxoviridae)亨德拉尼帕病毒屬(Henipavirus)的一個種。檢測多種動物，發現中和抗體只在狐蝠屬Pteropus的兩種果蝠(飛狐)P. vampyrus 和 P. hypomelanus和大多數豬、少數馬血液中存在；在多種家畜和野生動物如狗、貓、山羊、野豬和嚙齒動物血液中則未見NiV中和抗體。研究認為是果蝠尿液或吃剩的野果感染了豬，果蝠是NiV的天然宿主，豬只是作為NiV傳染源的放大器，養豬人和屠宰者是由感染豬的呼吸道的氣溶膠和密切接觸引起感染，人與人的傳播方式類似動物傳至人[26-27]。

1.6.1.2基因組與疫苗研制 NiV為單股負鏈不分節段RNA病毒，與亨德拉病毒密切相關?；蚪M長18 246nts，其轉錄和終止信號高度保守，5′和3′末端也高度保守，分別為3′UCCUUGGUUCU5′和3′AAUUCUUUUU5′?；蚪M共編碼6個結構蛋白，從基因組3′始依次為NP蛋白、磷酸化蛋白(P)、基質蛋白(M)、融合蛋白(F)、GP蛋白和大蛋白(L)，L蛋白在NV中含量雖少，但其具有RNA聚合酶活性，在病毒的復制和轉錄過程中發揮重要作用[28]。

NVD疫苗的研制也使用多種平臺。但以副粘病毒科的麻疹疫苗載體用于表達NiV糖蛋白亞單位疫苗預期較好。該候選疫苗采用了基礎-增強的免疫策略，以Allhydrogel 和 CpG寡核苷酸為佐劑，在單苗接種NHPs 2個星期后，腹腔再接種該苗一次，其后用致死量的NiV攻擊，試驗證明實驗組動物用該苗免疫有效，具有不被NiV感染的能力。Prescott等[28]研制NiV s蛋白+ VSV的候選苗，用單苗接種策略對非洲綠猴抗尼帕病毒的效果進行觀察。發現每只用107PFU候選苗接種3只非洲綠猴29 d后，均能產生CD4/CD8細胞免疫和體液免疫應答，經105(TCID50) 馬來西亞NiV株氣管插管感染，試驗組3只綠猴均能經受這種感染攻擊；而未接種該候選苗的另3只綠猴中1只死亡，另2只發生嚴重的疾病過程。試驗證實該候選苗單苗接種策略有效，但還未進行臨床研究。

NiV生物安全級別高，需在BSL-4級實驗室中操作[5]。

1.6.2 亨德拉病毒病(Hendra virus diseas, HVD)

1.6.2.1HVD及其危害 1994年9月，在澳大利亞東岸昆士蘭省首府布里斯班近郊的亨德拉鎮，一個賽馬場發生了一種導致賽馬急性呼吸道綜合癥的疾病。這種疾病的典型特征是嚴重的呼吸困難和高死亡率，還表現為人接觸性感染，當時有14匹賽馬和1人死亡[29]。病原體被分離鑒定，證明是副粘病毒科家族中的一員，最初被命名為馬麻疹病毒，后被命名為亨德拉病毒(Hendra virus，HeV)。到2016年止，已報告14起疫情，70多匹馬死亡，7人發病，其中4人病死[30]。

在發現HeV后，澳大利亞對當地5000多只家養動物進行了抗體檢測，未發現有抗HeV的抗體。后來，調查的目標轉到了能在發病地區之間活動的野生動物，發現黑狐蝠、灰頭狐蝠、小紅狐蝠、眼圈狐蝠等四種狐蝠體內具有抗HeV的抗體。此后，又在一只懷孕的灰頭狐蝠生殖道內分離到亨德拉病毒。此外，對昆士蘭的1043個狐蝠樣本進行血清學檢測，發現47%的樣本呈HeV抗體陽性反應?？贵w監測發現狐蝠體內的抗體水平與疾病的地方流行性相一致，預示狐蝠處于感染的亞臨床狀態。除澳大利亞外，在非洲的Eidolon果蝠中，也發現抗HeV抗體，這證明HeV也曾在非洲流行[31]。雖然沒有發現病毒從狐蝠直接傳播給馬的證據，但實驗室模擬感染證實這種方式是可能的，最可能的傳播途徑就是馬食用了被攜帶病毒的狐蝠胎兒組織或胎水污染的牧草所致；其次，馬由于食用狐蝠吃剩的果實而感染也是發病的原因之一；另外病毒在馬群中的傳播也可能是通過感染狐蝠的尿液或鼻腔分泌物，人由于與病馬接觸而感染，死亡率約為30%～60%[29]。

HeV生物安全級別與NiV一致，也須在BSL-4實驗室操作病毒[5]。

1.6.2.2基因組及疫苗研制 HeV與NiV類似，基因組為單股負鏈不分節段RNA，長18 234 nts，比NiD小12 nts。基因組表達6個結構蛋白，即NP蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、GP蛋白和L蛋白。L蛋白在HeV中含量雖少，但其具有RNA聚合酶活性，在病毒的復制和轉錄過程中發揮重要作用；對GP 和F而言，不同感染對象(人或馬)的功能略有區別，但其他4個結構蛋白功能變化不大。

基于狐幅為HeV的天然宿主、馬為中間宿主這樣一個傳播模式，提出只給馬進行免疫接種的理論。目前用Hela細胞培養液提取的可溶性HeV G蛋白為抗原,輔以CpG佐劑作為亞單位疫苗HeVsG，在犬和雪貂中進行了試驗[33-34]；此后，用4只馬(因試驗必須在生物安全4級實驗室進行)進行了試驗(3只接種后攻擊，1只為對照)，證實經免疫接種的馬可抗HeV致死性感染，認為用HeVsG亞單位疫苗接種有效[35]。

1.7 SARS

1.7.1SARS及其危害 SARS又稱非典型肺炎(atypical pneumonia)，是由新的SARS冠狀病毒(SARS-CoV)引起的新發傳染病，具有傳播快、病情發展迅速、病死率高等特點。從2002年底至2003年7月11日止，從中國大陸傳至全球31個國家和地區，總計發病8 462例，死亡829例，病死率為9.8%。SARS臨床表現較為復雜，多以急性發熱為首發癥狀，大多伴有頭疼、全身酸痛、食欲不振、腹瀉和嘔吐等癥狀，并多無流涕、鼻塞等上呼吸道卡他癥狀；嚴重者可出現呼吸急促、困難、胸悶，少數患者可發展為急性呼吸窘迫綜合征，繼而發生心動過緩、血壓下降，甚至休克死亡[36-37]。

SARS傳播途徑主要以呼吸道傳播為主。目前自然界確定的病原物種多，但偏向于蝙蝠為自然宿主，中間宿主為果子貍，終末傳至人這樣一種可能的傳播模式[38-39]。

SARS-CoV屬二類高致病性病原體，須在BSL-3級實驗室中操作[5]。

1.7.2基因組和疫苗研制 SARS-CoV為球形、有包膜，大小約為80～140 nm。其基因組為單股正鏈RNA，全長約為29 700nts。基因組兩側分別為5′甲基化帽子和3′poly(A)+尾巴結構，有14個ORFs，但主要為5個，分別為編碼復制酶蛋白(relicatase, R)、S蛋白、E蛋白、M蛋白及NP蛋白，部分病毒株還可見血凝素脂酶蛋白(haemagglutinin-esterase，HE)。在這些蛋白中，因S蛋白直接與病毒進入細胞及產生中和抗體有關，所以特別重要。其他病毒蛋白與冠狀病毒的順序、大小沒有太大區別。

早在發現SARS-CoV 的上世紀60 年代，人們就已發現了HCoV-229E 和 HCoV-OC43這兩種冠狀病毒，除了嬰幼兒、老年人和免疫缺陷者外，它們只引起輕微的感冒樣癥狀。2003年發生SARS-CoV大流行，2012年的6和9月又分別發現兩例MERS死亡病例，這就引起人們對冠狀病毒的嚴重關注。種系發生學分析證實SARS-CoV屬于β冠狀病毒的C系株，而MERS-CoV則屬于β冠狀病毒的B系株。其種系發生學不同，進入細胞所用的受體也不一樣，MERS-CoV用二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4 ，DPP4)，而 SARS-CoV則是用血管緊張素轉換酶(angiotensin-converting enzyme 2，ACE2)為受體[40-41]。

感染SARS-CoV引起高發病率和致死率，已有多個團隊對疫苗進行研制，目前已有6類候選苗：一是用滅活疫苗，用化學方法如甲醛、β-丙內脂或輻射滅活SARS-CoV病毒；二是用減毒活疫苗，如將SARS-CoV MA15株編碼外核苷酸酶去除而成為細胞內可復制的減毒株SARS-CoV MAΔExoN；三是用病毒疫苗載體，如委內瑞拉馬腦炎病毒(VEE)、痘病毒(poxvirus)、副流感病毒(parainfluenzavirus)、狂犬病毒(rabies virus)和水泡性口膜炎病毒(vesicular stomatitis virus)等疫苗株為載體，主要以 SARS-CoV S蛋白為抗原，也有個別苗用NP為抗原；四是只以SARS-CoV S或NP為抗原的亞單位疫苗；五是以SARS-CoV S的DNA疫苗；六是混合疫苗，即是用滅活疫苗與SARS-CoV S為抗原的DNA疫苗混合。上述這些疫苗，除了VEE制備的以SARS-CoV NP蛋白為抗原病毒顆粒疫苗無保護作用外，其他各類苗均可產生保護性中和抗體和細胞免疫，遺憾的是，決大多數動物保護試驗使用的是小鼠，只有個別報道使用不盡規范的NHP進行臨床前試驗，而該疫情亦未再發生，所以也沒有任何疫苗被批準使用[42]。

1.8 RVF

1.8.1RVF及其危害 RVF 是由裂谷熱病毒(Rift valley feverv virus，RVFV)引起的一種蟲媒傳播的人獸共患病，主要危及反芻類家畜(牛、羊、駱駝等)，造成巨大的經濟損失.臨床表現為被感染的懷孕母畜大規模流產、新生幼畜約100%、成年家畜10～20%死亡。人感染者主要為家畜養殖人員、屠宰者、近家畜居住者和疫區布署的軍人等，一般表現為自限性流感樣癥狀，但部分病例會發展成嚴重疾病，包括急性肝炎或肝壞死、腦膜炎、出血熱或視網膜炎等[43-45]。

RVFV主要由蚊子傳播，首先由伊蚊、其后由庫蚊作次級放大傳播；疫區分為低流行區和高流行區兩類，1915年，肯尼亞就報告了動物中可能的RVF疫情，1931年，在肯尼亞的大裂谷地區首次分離到病毒，因此稱為裂谷熱病毒。由于病毒可經蚊卵傳遞傳播，因此一旦暴發疫情，該地就永為疫區。RVF過去只發生在非洲國家，2000年后該病跨越紅海流行至亞洲阿拉伯半島，目前有34個國家有疫情報告。

RVFV雖經蚊媒傳播流行，但其屬于二類病原體，實驗操作須在BSL-3級實驗室進行[5]。

1.8.2基因組和疫苗研制 RVFV屬于布尼亞病毒科白嶺病毒屬，RVFV只有一個種一個血清型，但至少有7個基因型。RVFV是有包膜的RNA病毒，大小約90～110 nm，包膜由脂質雙層構成，表面由糖蛋白Gn和Gc組成異源二聚體覆蓋，形成約122個顆粒組成的規則二十面體網絡狀病毒結構。基因組由3個單股負鏈部分雙義的RNA節段(L、M和S)組成(見圖1)，每個RNA節段具有相同的3′和5′端可互補的序列，可形成共價閉合環狀的RNA病毒粒子[46]。

左側圖示模擬的含有S、M和L 3個RNA片段的病毒粒子，并示Gn和GC結合到膜脂雙層中；右圖示RNA片段和編碼策略。L=L蛋白；NSm=非結構蛋白；Gn和GC=糖蛋白；N=核蛋白；NSs=非結構蛋白。

RVFV主要在家畜中傳播，再傳給人類。因此很早以來人們就把該病對家畜的防控擺在首位，疫苗的研發和使用也主要針對家畜?，F已使用或在研的疫苗：第一類是常規使用的疫苗，包括滅活疫苗和活減毒疫苗；第二類是新研發的疫苗，主要有3個類型：1.用重組核酸生產的抗原(重組蛋白等4種疫苗)；2.通過缺失編碼的毒力因子及病毒復制不必要的基因的遺傳減毒苗(基因減毒活疫苗)；3. 病毒載體苗(含黑猩猩腺病毒等5種疫苗載體)。特別應指出的是，在第一類常規使用的疫苗中，MP12活減毒疫苗的效果最好。其研制主要在含5-氟尿嘧啶培養液中培養的MRC-5細胞中傳了12代，造成在3個節段的RNA中發生不同程度的基因重復突變；用恒何猴經鼻腔或用氣溶膠經粘膜接種均產生了可保護強毒株攻擊、效價為1：40的中和抗體，其后有100多名志愿者參與的臨床研究證實該苗具有很好的免疫耐受性和免疫原性[47-50]。

1.9 ZVD

1.9.1ZVD及其危害 ZIKV是ZVD的病原，一種由埃及伊蚊(Aedes aegypti)攜帶的非洲黃病毒，于1947年從烏干達寨卡森林的一只發熱的恒河猴身上發現。過去人類一直認為ZVD是一種以皮疹、發燒、結膜炎、關節痛和關節炎為特征的自限性輕度疾病，因此ZVD的疫情很少有記錄、報告，但血清學檢測表明人類曾廣泛暴露給ZIKV[51]。

2007年在西太平洋的密克羅尼西亞南部邦聯州Yap島上暴發第一次ZVD 的流行，受影響人口約為該島的3/4；2013年在法屬波利尼西亞群島發生第二次暴發；這兩次暴發期間，在東南亞的菲律賓、柬埔寨等地也發生了ZVD的流行傳播[52-58]。波利尼西亞群島暴發的發病率很高，而且證明ZIKV感染與格林巴利(Guillain-Barré)綜合征的發展有關[59]。此后，ZIKV一直在太平洋多個島嶼上傳播，并傳入南美洲[60]。2016年夏天，西半球40多個國家報告了ZIKV的當地感染。引起人們注意的是，除了格利巴利綜合征外，美洲的ZVD流行還與孕婦感染的嬰兒的神經發育缺陷有關，包括小頭畸形癥[61]。流行病學證據和從胎兒腦中分離出病毒證實了ZIKV感染與小頭畸形之間的因果關系，這種病理生物學的一些重要特征在小鼠模型中被揭示[62-64]。性傳播和在眼睛、睪丸等特殊部位上復制的能力也是ZIKV的特有性質，這也使得該感染控制和治療趨于復雜化[65-67]。

該病原按國家衛計委的標準，定為三類病原微生物，可在BSL-2操作，但在運輸上應類同于二類病原[68]。

1.9.2基因組和疫苗研制 ZIKV基因組由單股正鏈的RNA構成(如圖2所示)，大小約為10 749nts。有一單一多聚蛋白ORF，這個多聚蛋白可裂解為C蛋白、膜蛋白前體(prM)、E蛋白和7個非結構蛋白。E蛋白位于病毒表面，可使病毒附著在細胞上，是產生中和抗體主要的靶抗原；prME可形成亞病毒顆粒(subviral particles，SVPs)，這種SVP與野生型病毒一樣具有膜融合和產生中和抗體等特征。NS3是非常重要的非結構蛋白，具有蛋白酶作用，可從C末端裂解prM并和NS2B結合形成NS2B3，NS2B3可形成一個抗原性很強的亞單位蛋白苗；此外，NS3可與干擾素一樣產生抗病毒分子[69]。

基因組的N端編碼病毒形成所必需的結構蛋白(C-prM-E)，非結構蛋白NS1-NS5在病毒復制、多蛋白處理、細胞介導的免疫應答以及免疫逃避等方面起著重要作用。

由于2018年ZVD疫情的回落，WHO不再把ZVD視為國際關注的公共衛生事件(PHEIC)[70]，但因為該病引起格林巴利綜合征及嬰兒神經發育缺陷的小頭畸形癥，因此預防該病疫情的再起仍為各國所關注，研制疫苗自然也就成為防控的重要目標。目前已有多種在研的疫苗，已進行臨床試驗的疫苗有4類15種，主要是DNA和純化滅活兩類疫苗，占受試苗的80%。 前者為5種，以prME為抗原，主要研制單位為美國變態和傳染病研究所(NIAID)和美國Inovio Pharmaceuticals and GeneOne Life Sciences公司，其中有一研究已進入Ⅱ期臨床試驗，最快在2020年出結果；后者7種均為美國Walter Reed Army Institute of Research and NIAID聯合研制的滅活苗產品，抗原均為純化的病毒顆粒，目前有的已完成Ⅰ期臨床試驗，有的正在進行Ⅰ期臨床試驗。Larocca等(2016)[71]用波多黎各株經Vero細胞制備的滅活病毒顆粒輔以鋁佐劑形成的疫苗接種恒河猴，兩劑次(0～4周)接種后可抗巴西及波多黎各株的攻擊，一年后測定其在恒河猴中產生的中和抗體效價高于用DNA苗所免疫的動物；其他減毒活疫苗及mRNA等苗也可產生中和抗體，但都未進入Ⅱ期臨床試驗。

2 對優先研發10種傳染病防控的探討

2.1應對這些病進行監測 前已述及，WHO要求優先研究和發展的這10種病毒病對人類的總疫情要比艾滋病、結核病、瘧疾等重要傳染病疫情少很多，但這些疾病有其特點：第一，它們都是人獸共患病，有特定流行年份、季節，其流行方式將給人類生命健康造成重大威脅；其次，作為人獸共患病，其病原在自然界某些動物中無癥狀或亞臨床癥狀循環，在適當的時候，它們仍會從動物傳至人，如SARS和目前仍在民主剛果流行的EVD，因此人類往往難以預測其發生大流行的時間、地點；第三，這10種病一般呈地域性流行，由于其對人有傳染性，容易引起地域內人類大規模的流行；第四，這些病的病原大多為高致病性病原微生物，對其分離、鑒定等操作均需在BSL-4或 BSL-3實驗室進行， 只有嗜神經性的ZIKV，才可能在較低生物安全的BSL-2實驗室操作，這些特點也阻礙了對它們的研究和發展。因此，需要從地域性方面，對這些疾病進行監測。

2.2從大健康角度出發，控制人獸共患病 目前國際上提倡并推行大健康的策略，這10種病毒病均可引起動物死亡或者人的神經性損傷發生，如 NiV和 RVF等。動物傳染病的流行不僅造成嚴重的社會經濟損失，影響社會的發展，同時也影響了人類的健康。因此，實行動物健康，嚴格按照我國和各地制定的管理條例對染病動物進行處理、限制流通、加強對動物的監測、疫苗接種預防等綜合措施防控家畜傳染病，強化環境衛生和人類健康這三位一體的行動，不僅關乎社會的進步發展，而且也預防傳染病在人類的發生，這種大健康的理念，也是促成優先研發這10種病毒病的原因。

2.3要加強和重視國境檢疫 這10種病雖然存在著敏感動物的地域性因素，也就是除SARS流行過、新疆存在CCHF外，其它8種還未在我國流行過。但社會的進步發展，交通的便利、快速，這些因素很容易造成傳染病的大范圍傳播；SARS的流行傳播已明顯提示了這一點。已有報道ZIKV曾輸入我國境內，該病今年也曾在鄰國印度暴發流行。我國沿海地區的生態環境、蚊蟲種類及人口密度完全適合ZIKV的流行，因此，這種可引起人類發生格林巴利綜合征及小頭畸形癥的蚊媒傳染病侵入我國是遲早的事，應引起我們的警惕，除要進行經常性的滅蚊降低伊蚊密度外，要加強和重視國境檢疫的把關作用。

2.4疫苗是預防疫情發生的重要環節 對于疾病的防控，除保護動物健康做好環境衛生和個人衛生外，還必須從其流行環節和因素嚴格防控。首先要加強應急培訓和檢測技術的掌握，對疑似病例的隔離和醫療機構的隔離防護治療要到位，此即傳染源的控制；其次要切斷人-人的傳播的途徑；第三，就是對敏感人群的保護。不論是直接或是間接的傳播，從流行病學干預考慮，其最有效最直接最經濟的防護就是使用安全有效的疫苗，而疫苗是要進入人體的物質，因此研制安全有效的疫苗是保護敏感人群的關鍵；多種疫苗的研制并非使用一種平臺就能解決，這要視病原和傳播途徑而定。對于現代疫苗的研制，還必須了解病原體的基因組結構，這是疫苗研制的準則；也是對WHO優先研究和發展的10種傳染病防控的最好準備。