益生菌輔治對膽汁淤積性肝炎患兒腸道菌群、腸道屏障功能、細胞因子的影響

劉京濤，馬春英

（河南省三門峽市中心醫(yī)院兒科，河南 三門峽 472000）

膽汁淤積性肝炎為由各種原因引起的膽汁形成、分泌和(或)排泄異常，在肝內(nèi)淤積，反流入血而導致的肝臟疾病。該病在1歲以內(nèi)(包括新生兒期)嬰兒中發(fā)生率高，臨床采用常規(guī)保肝利膽方案的治療效果不佳，分析探討有效治療方案具有重要意義[1-2]。近年來越來越多學者發(fā)現(xiàn)膽汁淤積性肝炎患兒的腸道菌群失調，治療時調節(jié)腸道屏障功能，糾正菌群紊亂是當前研究熱點。益生菌制劑為含生理性活菌，可通過口服或管飼等方式進入人體，改善腸道黏膜表面菌群的微生物制劑[3]。國外學者Beath SV等[4]研究表明，益生菌制劑對胃腸外營養(yǎng)相關性膽汁淤積的預防與治療具有良好應用前景。本文主要分析益生菌輔治對肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒腸道菌群、腸道屏障功能及細胞因子等的影響，結果如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年5月—2017年5月我院收治的肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒84例，納入標準：①均符合《膽汁淤積性肝病診斷和治療共識（2015）》[5]中相關診斷標準；②治療前4周未服用抗菌藥或微生態(tài)制劑；③入院時無腹瀉癥狀，大便常規(guī)檢查正常；④年齡小于1歲；⑤本研究經(jīng)我院倫理委員會批準，且患兒家屬同意參加本研究并簽署知情同意書。排除標準：①肝外膽道閉鎖、先天性膽總管囊腫、膽管擴張、血管瘤等外科疾病或其他常見先天性異?；純?；②合并腎臟疾病或風濕性免疫系統(tǒng)等其他疾病患兒；③治療前4周內(nèi)服用過微生態(tài)制劑、抗菌藥或有腸外營養(yǎng)史患兒。采用隨機數(shù)字表法分為觀察組和對照組，各42例，觀察組男23例，女19例；日齡45～160 d，平均日齡（102.15±10.33）d，對照組男22例，女20例；日齡46～158 d，平均日齡（102.10±10.35）d，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

對照組予以常規(guī)保肝利膽藥（如熊脫氧膽酸、消膽胺、S-腺苷甲硫氨酸等）治療，同時給予低脂、低膽固醇飲食，補充維生素（K、A、D）、輔酶A、高糖及高蛋白飲食、維持熱量，黃疸嚴重者應用苯巴比妥退黃，瘙癢嚴重者應用肥皂水、2%硫酸鎂液進行洗滌止癢，連續(xù)治療14 d。觀察組在對照組基礎上加用雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊（商品名：培菲康，上海信誼藥廠有限公司，國藥準字：S10950032，規(guī)格：0.21 g/粒），0.21 g，bid，po，治療14 d。治療期間均不使用抗菌藥或其他影響腸道菌群的制劑。

1.3 觀察指標

1.3.1 取兩組患兒入院第1 d、治療結束后1 d足量糞便標本置于3個清潔糞便盒內(nèi)，在-70℃冰箱中保存，收集標本后全程冷鏈運輸至上海拜沃生物科技有限公司，以熒光定量PCR法檢測乳酸桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌的含量，并計算雙歧桿菌與大腸桿菌的數(shù)量比值（B/E值）。

1.3.2 取兩組患兒入院第1 d、治療結束后1 d空腹靜脈血3 mL，分別采用鄰聯(lián)茴香胺顯色法、鱟試劑酶反應顯色法、酶聯(lián)紫外分光光度法測定血漿內(nèi)毒素（ET）、二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸水平，試劑均購自上海凡迪生物科技有限公司，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.3 取兩組患兒入院第1 d、治療結束后1 d晨起空腹靜脈血3 mL，1000 r/min下離心5 min，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細胞介素（IL）-6水平，以Luminex 200檢測系統(tǒng)（美國Biorad公司）檢測單核細胞趨化蛋白（MCP）-1水平。

1.3.4 于入院第1 d、治療結束后1 d抽取兩組患兒空腹靜脈血3 mL，應用7107全自動生化分析儀檢測血清總膽紅素（TBIL）、總膽汁酸（TBA）、血氨（BA）水平，評估肝功能。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以“x±s”表示，采用t檢驗，計量資料以百分數(shù)（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 治療前后腸道菌群比較

治療后兩組乳酸桿菌、雙歧桿菌含量及B/E較治療前增加，大腸桿菌含量較治療前下降，且觀察組乳酸桿菌、雙歧桿菌、B/E高于對照組，大腸桿菌含量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組治療前后腸道菌群比較

2.2 治療前后腸道屏障功能比較

治療后觀察組血漿ET、DAO、D-乳酸水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 治療前后細胞因子水平比較

觀察組治療后TNF-α、IL-6、MCP-1水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 治療前后腸道屏障功能比較

表3 治療前后細胞因子水平比較

2.4 治療前后肝功能比較

治療后兩組TBIL、TBA、BA水平均較同組治療前下降，且觀察組低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 治療前后肝功能比較

3 討論

肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎是由病毒感染、藥物、膽道系統(tǒng)發(fā)育異常、遺傳代謝缺陷等多種因素所致的非獨立性肝臟疾病，患兒以黃疸長期不退、皮膚瘙癢、糞便顏色變化為主要表現(xiàn)，目前采用熊去氧膽酸及S-腺苷蛋氨酸等藥物治療，但療效不甚滿意[6]。膽汁為一種重要的腸道菌群調節(jié)劑，肝內(nèi)過多的膽紅素及膽鹽會持續(xù)刺激肝臟枯否細胞，激活炎癥通路分泌炎性因子，使肝功能受損同時破壞腸黏膜屏障，造成腸道菌群失調，而腸道菌群的失調又可進一步加劇膽汁淤積，二者形成惡性循環(huán)，因此在常規(guī)保肝利膽基礎上糾正膽汁淤積性肝炎患兒腸道菌群紊亂有助于提高療效[7-8]。

益生菌是具備一定數(shù)量、對宿主健康產(chǎn)生有益作用的活的微生物，可利用“腸道-肝臟”相互影響而對肝臟發(fā)揮保護作用[9]。有研究顯示，益生菌類制劑能明顯改善非酒精性脂肪肝患者的肝功能，調節(jié)血脂，促進疾病恢復[10]。也有學者報道，早期應用益生菌干預可有效改善早產(chǎn)兒胃腸功能紊亂，降低喂養(yǎng)不耐受率，增加營養(yǎng)物質攝取與吸收，促進胃腸功能發(fā)育[11]。但目前關于益生菌對肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒的療效研究較少。

定居在腸道中的益生菌如雙歧桿菌、乳酸桿菌等在維持腸道內(nèi)微環(huán)境穩(wěn)定同時，可幫助宿主吸收營養(yǎng)物質，并維持免疫系統(tǒng)發(fā)育及免疫平衡。大腸桿菌、葡萄球菌等是腸道內(nèi)致病菌。B/E值可反映腸道菌群比例，其值降低說明腸道菌群比例失衡。本研究結果顯示，治療后兩組乳酸桿菌、雙歧桿菌含量及B/E較治療前增加，大腸桿菌含量較治療前下降，且觀察組治療后乳酸桿菌、雙歧桿菌、B/E高于對照組，大腸桿菌含量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，這與江玲等的研究結果一致[12]?？梢娨嫔o治可明顯改善肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒的腸道菌群?？紤]是因為益生菌通過競爭結合底物與腸上皮微絨毛上脂質及蛋白質多糖受體以排除病原菌，同時拮抗致病菌的黏附定植，減少大腸桿菌等有害菌，并增加腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌，促進失調的腸道菌群比例恢復正常。

腸道維持正常菌群結構有助于構建腸道生物屏障，不易導致菌群移位，且正常的菌群結構代謝產(chǎn)物能保護黏膜功能，維持腸道的機械屏障。本研究結果顯示，觀察組采用益生菌輔助治療后，血漿ET、DAO、D-乳酸水平顯著下降，低于對照組，證實輔助應用益生菌可調節(jié)腸道菌群，避免小腸細菌過度生長，降低腸源性ET及DAO、D-乳酸水平，從而改善患兒腸道微生態(tài)，促進腸道屏障功能恢復，這與王偉芳研究結論相符[13]。

腸道菌群失調時，腸道內(nèi)增加的ET等通過Toll樣受體-4激活細胞內(nèi)信號通路，誘導炎性細胞因子TNF-α、IL-6等大量釋放，同時MCP-1也參與肝組織炎性反應及纖維化等慢性損傷，誘導TNF-α釋放，增加肝臟損傷[14]。本研究結果顯示，觀察組治療后TNF-α、IL-6、MCP-1水平明顯低于對照組，與何周桃等的研究結果相近[15]。益生菌在進入腸道后，菌體成分刺激腸道免疫系統(tǒng)，抑制一系列炎性細胞因子（如TNF-α、IL-6）及MCP-1釋放，改善機體炎癥狀態(tài)。

國外學者Sohn W等[16]研究表明益生菌可通過抑制革蘭陰性菌生長及阻止致病菌吸附，以防止或減少細菌移位，繼而降低ET及來源于細菌的其他毒性物質，如TNF-α、MCP-1等，減輕肝細胞損傷。肝臟作為門靜脈血流的首過器官，與腸道菌群、腸源性物質在解剖及功能上有著密切聯(lián)系。本研究結果顯示，治療后觀察組TBIL、TBA、BA水平低于對照組，可見輔助應用益生菌治療能較好改善膽汁淤積性肝炎患兒肝功能，可能與益生菌可糾正腸道菌群紊亂、減輕全身炎癥反應等有關。

綜上所述，益生菌輔助治療小兒膽汁淤積性肝炎的療效較好，可通過糾正腸道菌群改善腸道屏障功能，降低細胞因子水平，促進肝功能恢復，值得臨床推廣應用。