清熱燥濕方保留灌腸對大腸濕熱型潰瘍性結腸炎大鼠模型Th1/Th2的影響

鄭鳳萍 羅巨利 王愛華

【摘要】 目的：探究清熱燥濕方保留灌腸對大腸濕熱型潰瘍性結腸炎大鼠模型Th1/Th2的影響。方法：選取SD成年大鼠40只，SPF級，體重180～200 g，湖南中醫藥大學動物實驗中心提供，雌雄各半，適應性喂養1周后隨機分為四組：A組（正常組）、B組（空白對照組）、C組（治療組）、D組（對照組），每組10只。A組不建模，B、C、D組建立潰瘍性結腸炎模型，B組不使用藥物，C組使用清熱燥濕方保留灌腸，D組使用柳氮磺吡啶灌腸。治療2周后觀察血清TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平變化。結果：A組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統計學意義（P<0.05），A組上述指標與C組比較差異無統計學意義（P>0.05）;C組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：清熱燥濕方保留灌腸對大腸濕熱型潰瘍性結腸炎大鼠具有炎癥因子調節作用。

【關鍵詞】 清熱燥濕方; 大腸濕熱型; 潰瘍性結腸炎; 大鼠; 炎癥

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.27.078 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）27-0-02

Effect of Retention Enema with Qingre Zaoshi Prescription on Th1/Th2 in Rats with Ulcerative Colitis of Damp-heat Type of Large Intestine/ZHENG Fengping，LUO Juli，WANG Aihua.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（27）：-182

【Abstract】 Objective：To explore the effect of retention enema with Qingre Zaoshi Prescription on Th1/Th2 in rats with ulcerative colitis of damp-heat type of large intestine.Method：Forty adult SD rats，SPF grade，weighing 180-200 g，were randomly divided into four groups：group A（normal group），group B（blank control group），group C（treatment group） and group D（control group），with 10 rats in each group.Group A did not model ulcerative colitis.Group B，C and D established ulcerative colitis model.Group B did not use drugs.Group C used retention enema with Qingre Zaoshi Prescription.Group D used sulfasalazine enema with Sulfasalazine.Serum levels of TNF-α，IL-1β，IL-4 and IL-10 were observed after 2 weeks of treatment.Result：The levels of TNF-α and IL-1β in group A were significantly lower than those in groups B and D，IL-4，IL-10 and Th1/Th2 were significantly higher than those in group B and D（P<0.05）.There was no significant difference among the above indicators compared with group C（P>0.05）.TNF-αand IL-1βin group C were significantly lower than those in group B and D，and IL-4，IL-10 and Th1/Th2 were significantly higher than those in group B and D（P<0.05）.Conclusion：Retention enema with Qingre Zaoshi Prescription can regulate inflammatory factors in rats with ulcerative colitis of damp-heat type of large intestine

【Key words】 Qingre Zaoshi Prescription; Damp-heat type of large intestine; Ulcerative colitis; Rats; Inflammation

First-authors address：First Hospital Affiliated to Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410007，China

潰瘍性結腸炎作為一種炎性腸病，病變以結直腸黏膜及黏膜下層為主，常表現為腹瀉、腹痛、黏液膿血便等。潰瘍性結腸炎發病機制不明，但普遍認為免疫功能紊亂是主要致病因素，治療以調節機體紊亂機制為主[1-2]。中醫上認為潰瘍性結腸炎歸屬于“腸擗”“泄瀉”范疇，以本虛標實為主要病癥，脾胃虛弱或感受外邪，導致出現脾虛兼濕毒之邪內蘊所致[3-4]。有研究表明清熱燥濕方對潰瘍性結腸炎患者具有顯著療效。但查閱文獻發現對于清熱燥濕方對潰瘍性結腸炎患者的作用機制的報道相對較少，因此本研究通過對SD大鼠建立潰瘍性結腸炎模型，探究清熱燥濕方保留灌腸對Th1/Th2的影響，具體如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物及建模方案

選取湖南中醫藥大學動物實驗中心提供成年SD大鼠40只，均為SPF級，體重180～200 g，雌雄各半，適應性喂養1周后隨機分為四組：A組（正常組）、B組（空白對照組）、C組（治療組）、D組（對照組），每組10只。A組不建模，B、C、D組建立潰瘍性結腸炎模型，具體如下：采取高脂、高糖飼料喂養，平均溫度（30±2）℃，濕度80%～95%，持續時間10 d造成濕熱型。第11天采用3%葡聚糖硫酸鈉自由食用7 d建立潰瘍性結腸炎模型，總歷時17 d。在B、C、D組中隨機挑選2只SD大鼠，采用7%水合氯醛麻醉后，取結腸組織病理學分析，證實造模成功。

1.2 方法

A組和造模成功后B組常規喂養同時采用生理鹽水灌腸;

C組采用清熱燥濕方灌腸，清熱燥濕方（苦參15 g，黃芩15 g，白頭翁20 g，地榆20 g，白及12 g，石榴皮15 g，五倍子15 g）取400 ml清水浸泡20 min后煎煮30 min后過濾2次，按照實驗動物與成人劑量體型系數換算法計算大鼠每日灌腸用量約為20 ml;D組采用柳氮磺胺吡啶（上海福達制藥有限公司，0.25 g，批號201310001）0.5 g/（kg·d），計算方法同上，進行灌腸。

1.3 觀察指標

四組均連續灌腸2周后采用7%水合氯醛麻醉后取腹主動脈血，在3 000 r/min離心機下離心15 min，去上層清液采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10表達水平。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0統計軟件包對數據進行統計分析，計量資料以（x±s）表示，組間兩兩比較若方差齊時選擇LSD法，方差不齊時選擇Tamhane法進行方差分析;計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

A組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統計學意義（P<0.05），A組上述指標與C組比較差異無統計學意義（P>0.05）;C組TNF-α、IL-1β均低于B、D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于B、D組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

有研究表明，在促炎癥因子與抗炎癥因子的共同作用下，機體可維持正常的免疫動態平衡，一旦出現應激或者外界因素的影響，動態平衡破壞會導致出現炎性腸病[5-6]。清熱燥濕方在臨床上已廣泛得到應用，并在炎性腸病的治療中臨床效果顯著，因此理論上清熱燥濕方對潰瘍性結腸炎大鼠免疫紊亂具有一定改善作用[7-8]。Th細胞作為T細胞的輔助細胞，Th1以細胞免疫為主，Th2以體液免疫為主，Th1/Th2在體內處于動態平衡，當出現炎癥時會出現偏離，出現免疫反應，當機體炎癥消失后會分泌抑制因子，防止免疫擴大損傷正常機體[9]。清熱燥濕方中以白頭翁為君藥，苦能清熱、溫能燥濕為主;苦參、地榆為臣藥，配合君藥共奏清熱利濕功效;白及、石榴皮、五倍子、黃芩共為佐藥，增強收斂止瀉、清熱利濕之功，諸藥合用，對潰瘍性結腸炎具有一定臨床意義[10]。本研究結果發現，建模后炎癥因子TNF-α、IL-1β均顯著升高，抗炎癥因子IL-4、IL-10顯著降低，因此出現C組Th1/Th2水平顯著低于A組。有研究表明柳氮磺胺吡啶對炎性腸病，灌腸時在腸道微生物作用下分解為5-氨基水楊酸，該物質具有一定抗菌消炎和免疫抑制作用，但該藥起效時間較短，多以短期用藥為主[11-12]。本研究發現C組TNF-α、IL-1β均低于D組，IL-4、IL-10、Th1/Th2均高于D組，表明清熱燥濕方對潰瘍性結腸炎大鼠抗炎機制強于柳氮磺胺吡啶，分析原因在于柳氮磺胺吡啶起效時間較短，綜合療效不如清熱燥濕方，有利于穩定Th1/Th2動態平衡。

綜上所述，清熱燥濕方對潰瘍性結腸炎大鼠抗炎機制可能與促進Th1/Th2平衡相關。

參考文獻

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（收稿日期：2019-05-05） （本文編輯：馬竹君）