多種常見鮮中草藥抑菌效果測定

為了研究新鮮中草藥對細(xì)菌的抑制作用，選取了常見的8種鮮中草藥獲取藥汁并且運(yùn)用煮沸和低溫超速離心進(jìn)行處理，采用體外抑菌的打孔法和牛津杯法對大腸桿菌和葡萄球菌的敏感性進(jìn)行測定。結(jié)果顯示：新鮮酢漿草對大腸桿菌和葡萄球菌都具有抑制作用，新鮮金銀花等7種中草藥對大腸桿菌和葡萄球菌的生長沒有抑制作用。

一、材料與方法

1.主要藥品。苦賣菜、酢漿草、車前草、金銀花、蒲公英、板藍(lán)根、魚腥草、蒼耳子

2.主要儀器。BCD-555WKM華凌電冰箱、GNP-9160型隔水式恒溫培養(yǎng)箱、GZX-9140 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器。

3.試驗(yàn)菌株。大腸桿菌和葡萄球菌

4.試驗(yàn)方法。（1）干品中藥提取物的制備。每種中藥均采用水煎法制備水提物?？噘u菜、車前草、金銀花、板藍(lán)根、蒼耳子、酢漿草、魚腥草、蒲公英各稱取50 g，分別置于 500 mL 燒杯中，加蒸餾水 300 mL 浸泡30 min，加熱至沸騰，然后改用文火繼續(xù)煎煮，30 min后趁熱過濾(4層紗布)，收集濾液。藥渣中再加蒸餾水200 mL，同法煎煮、過濾。將兩次濾液相混，水浴濃縮后涼至室溫，用100 mL容量瓶定容后進(jìn)行高壓滅菌，制得各濃度為0.5 g/mL的水煎液，4℃保存，備用，并測定其pH值。

（2）鮮中草藥原液的稀釋。制備的干品水煎液的濃度為0.5 g/mL，根據(jù)每種鮮中草的折干率（酢漿草、金銀花和蒲公英的折干率約為5∶1，魚腥草和車前草的折干率約為4∶1，苦荬菜和板藍(lán)根的折干率約為3∶1，蒼耳子的折干率約為2∶1）將鮮中草藥物原液用滅菌蒸餾水進(jìn)行稀釋，使終濃度與干品水煎液濃度一致，4℃?zhèn)溆谩?/p>

（3）試驗(yàn)菌液的制備。將大腸桿菌和葡萄球菌的純培養(yǎng)物接種于含5.0 mL的血清肉湯培養(yǎng)基的試管中，37℃培養(yǎng)24 h，用滅菌生理鹽水稀釋至其濁度0.5麥?zhǔn)蠁挝唬藭r(shí)肉湯中細(xì)菌數(shù)約1.5×l08CFU/mL。并且將兩種細(xì)菌接種于pH為1.7和4.5的普通營養(yǎng)肉湯中，培養(yǎng) 24 h。

（4） 鮮中草藥藥敏試驗(yàn)。打孔法：以無菌操作用無菌棉簽蘸取稀釋好的菌液，在普通瓊脂平扳表面涂布均勻。在已涂布細(xì)菌的普通瓊脂平板培養(yǎng)基表面用打孔，打孔后用酒精燈封底，在孔中加入各藥液80μL勿使其外溢，每種藥汁做3個(gè)平行，置恒溫箱37℃培養(yǎng)24 h，取出觀察，使用游標(biāo)卡尺用十字交叉法量取抑菌圈的直徑。重復(fù)測量三次取平均值。根據(jù)藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑(mm)標(biāo)準(zhǔn)判斷其對藥物的敏感性。抑菌圈小于10 mm的為不敏感，11～15 mm之間的為中度敏感，大于15 mm的為高度敏感。

二、試驗(yàn)結(jié)果

1.中藥藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。

（1）鮮中草打孔法藥敏試驗(yàn)結(jié)果。平皿恒溫37℃培養(yǎng)24h后，通過測量抑菌圈直徑可判定，試驗(yàn)所用的葡萄球菌對酢漿草高度敏感，對苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英不敏感；大腸桿菌對酢漿草中度敏感，對苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英均不敏感(如圖1和圖2)。表1顯示酢漿草對大腸桿菌抑菌圈直徑約為14.16 mm，判定為中度敏感；表2顯示酢漿草對葡萄球菌抑菌圈直徑約為20.16 mm，判定為高度敏感。

圖1 鮮中藥大腸桿菌（L）和葡萄球菌（R）藥敏試驗(yàn)

圖2 鮮中藥大腸桿菌（L）和葡萄球菌（R）藥敏試驗(yàn)

表1 大腸桿菌的鮮中草藥藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表2 葡萄球菌的鮮中草藥藥敏試驗(yàn)結(jié)果

（2）干中草打孔法藥敏試驗(yàn)結(jié)果。平皿恒溫37℃培養(yǎng)24h后，觀察發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)用葡萄球菌對干品酢漿草、金銀花和蒲公英高度敏感，對苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、蒼耳子和魚腥草不敏感(如圖3，并且表3顯示，酢漿草對葡萄球菌抑菌圈直徑約為18.41 mm，判定為高度敏感；金銀花對葡萄球菌抑菌圈直徑約為17.12 mm，判定為高度敏感；蒲公英對葡萄球菌抑菌圈直徑約為17.50 mm，判定為高度敏感)；大腸桿菌對干品酢漿草、苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英不敏感。

圖3 干中藥葡萄球菌藥敏試驗(yàn)

表3 葡萄球菌的干品中草藥藥敏試驗(yàn)結(jié)果

三、結(jié)論

鮮中草藥藥敏試驗(yàn)：新鮮酢漿草藥物原液對大腸桿菌和葡萄球菌均有較強(qiáng)的抑制作用，但對葡萄球菌的抑制作用更為顯著；新鮮苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英的藥物原液對葡萄球菌和大腸桿菌均沒有抑制作用。

參考文獻(xiàn)（略）