高效液相色譜-串聯質譜法同時測定果蔬汁中9種農藥殘留

朱光艷，孫豐收，崔 凱，鄭尊濤，龔 勇，樸秀英，李富根*

(1.農業農村部農藥檢定所，北京 100125；2.山東農業大學環境毒理研究中心，山東 泰安 271001；3.江蘇省農業科學院農產品質量安全與營養研究所，江蘇 南京 2100140)

果蔬汁通常是以新鮮或冷藏的蔬菜、水果為原料，經過物理方法如壓榨、離心、萃取等加工而成的汁液產品，因其兼有天然、營養、保健、口感好等特點，消費量日益增長[1]。目前，全球消費的果蔬汁飲料已超過800億L，預計到2020年，全球果蔬汁飲料消費總量將達到1 050億L[2]。但是，果蔬汁飲料中農藥殘留問題值得關注，在果蔬原料的生產過程中，為保證其產量及質量，各類農藥被廣泛使用，加工后的果蔬汁中就會不可避免的產生農藥殘留[3]。因此，為適應食品安全監管的需要，維護消費者的合法利益，建立果蔬汁中快速、準確、高效的農藥殘留檢測方法至關重要。

目前，應用于果蔬汁中農藥殘留檢測的方法主要有氣相色譜法(GC)[4～5]、液相色譜法(HPLC)[6～7]、氣相色譜-質譜法(GC-MS)[8～10]、液相色譜-質譜/質譜法(HPLC-MS/MS)[11～13]等，其中HPLC-MS/MS具有高靈敏度、高準確度、高通量等特點，被廣泛應用于農藥多殘留分析之中。李巖等[11]建立了濃縮果蔬汁中156種農藥多殘留的快速篩查測定方法，樣品采用1%醋酸乙腈溶液萃取，Waters Sep-Pak Vac固相萃取柱凈化，以HPLC-MS/MS在正離子多反應監測(MRM)模式下進行測定，156種農藥在5種濃縮果蔬汁中平均回收率范圍為57.2%～122.7%，相對標準偏差為0.9%～19.8%，定量限(LOQ)為0.33～189.23μg/kg。本研究針對市場上常見的一些農藥品種，采用固相分散凈化結合HPLC-MS/MS檢測技術，建立了果蔬汁中9種農藥多殘留同時檢測分析的方法，為果蔬汁中農藥殘留快速檢測提供了技術支持。

1 實驗部分

1.1 主要儀器 Thermo Finnigan-TSQ Quantum液相色譜-質譜聯用儀：配電噴霧離子源(ESI)；IKA SIGAM 4-15離心機；METTLER AE240、PC4000分析天平；IKA VORTEX GENIUS 3渦旋混合儀；0.22μm有機濾膜等其他實驗室設備。

1.2 主要試劑 乙腈為色譜純，氯化鈉、無水硫酸鎂、檸檬酸為分析純，乙酸為優級純，水為GB/T 6682中規定的一級水；標準品由農業農村部農藥檢定所提供。

1.3 樣品前處理 量取20mL果蔬汁樣品于100mL塑料離心管中，加入20mL乙腈劇烈震蕩1min，再加入1.5g檸檬酸、1g氯化鈉，4g無水硫酸鎂，劇烈震蕩1min，4 000r/min轉速下離心5min，取上清液10mL于15mL塑料離心管中，加入0.4gPSA、1.2g無水硫酸鎂，劇烈震蕩至混合均勻后，渦旋混合3min，4 000r/min轉速下離心5min，取上清液過0.22μm有機濾膜，上機待測。

1.4 檢測條件 色譜柱C18，100mm×2.1mm，粒徑5μm；進樣體積10μL;流動相為0.05%乙酸水溶液-乙腈，梯度洗脫程序(表1)。

表1 梯度洗脫程序

質譜條件：電噴霧離子源ESI，正離子模式；噴霧電壓：3 500V；脫溶劑氣溫度350℃；鞘氣(N2)壓力20psi；輔助氣(N2)壓力10psi；碰撞氣(Ar)壓力1.5mTorr；多反應監測模式(MRM)，多反應監測條件(表2)。

表2 多反應監測條件

9種農藥的標樣譜圖(圖1)。

2 結果與討論

2.1 標準曲線 準確稱取一定量的標準品(精確至0.1mg)，以乙腈溶解并稀釋，配制成一系列標準溶液，其中敵敵畏、毒死蜱濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.5和1mg/L，其他濃度分別為0.01、0.05、0.1、0.2、0.5和1mg/L，按1.4條件測定，得到9種農藥的標準曲線。線性回歸方程及相關系數R2(表3)。

2.2 添加回收 將空白果蔬汁加入標樣，充分混勻后靜置2h，做3個水平的添加回收，每個添加濃度重復5次，按1.3方法進行前處理，1.4條件測定。在3個添加水平下，9種農藥的回收率在70.3%～105.9%之間，相對標準偏差在1.0%～11.5%之間。添加回收濃度、回收率及相對標準偏差(表4)。

2.3 定量限 根據添加回收試驗，敵敵畏、毒死蜱定量限為0.05mg/kg，其他定量限為0.01mg/kg(表4)。

圖1 9種農藥的標樣譜圖(敵敵畏、毒死蜱為0.1mg/L，其他為0.05mg/L)

序號農藥名稱線性回歸方程相關系數R21苯醚甲環唑y=1 245 293x+7390.999 82敵敵畏y=48 912x+12 8670.995 03毒死蜱y=17 765x-3950.998 24多效唑y=7 064 578x+149 2420.996 55甲胺磷y=72 213x+35 5540.998 96嘧霉胺y=2 944 943x+70 2120.996 37噻蟲嗪y=95 260x+9130.999 78乙草胺y=6 384 180x+148 0260.995 69莠滅凈y=40 374 928x+916 0760.994 8

表4 回收率(n=5)及相對標準偏差

3 結論

本文采用乙腈提取，固相分散凈化，液質檢測，建立了果蔬汁中9種農藥的檢測方法，并對方法的回收率和精密度進行了探究。在3個添加水平下，回收率及相對標準偏差均滿足檢測要求。本方法簡便快捷、靈敏可靠，為果蔬汁中農藥殘留量的測定提供了一種簡單高效的檢測方法。