乳腺癌細胞中缺氧誘導因子-1α與Survivin表達的相關性及其臨床價值探討

張穎 雷潔 許靜

乳腺癌是女性發生率較高的惡性腫瘤之一，近年其發生率呈直線上升趨勢，給女性的身心健康帶來了很大影響[1]。臨床上近年研究的熱點問題為乳腺癌的轉移、侵襲分子調控機制。缺氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）是近年臨床上新發現的缺氧應答調控因子，它在人體以及哺乳動物體內廣泛存在，在維持全身氧穩態、細胞穩定性方面發揮了非常重要的作用，是促使腫瘤發生的中間站，具有耐藥、抗凋亡、細胞增殖、無氧糖酵解、促使腫瘤血管生成的作用，在缺氧誘導基因中有一定的調控作用，HIF-1α含量升高是癌癥的不良預后因素[2]。生存素（inhibitor of apoptosis protein，Survivin）是凋亡抑制蛋白（IAPs）的一種，是近幾年臨床上新發現的凋亡因子，它具有抑制細胞凋亡、細胞分裂分化作用，在促進乳腺癌的發生、腫瘤內部血管生成方面發揮關鍵性作用[3]。在很多惡性腫瘤中HIF-1α、Survivin都存在過表達的情況，它們與腫瘤的發生緊密相關[4]。我院在乳腺癌細胞中HIF-1α與Survivin表達的相關性研究期間，發現HIF-1α與Survivin在乳腺癌的發生過程中存在很大聯系，通過檢測HIF-1α與Survivin的表達水平可以判斷患者的病情發展程度，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2017年5月～2018年8月收治的乳腺導管內增生病變及乳腺癌患者130例，對所有患者的HIF-1α、Survivin含量進行檢測。納入標準：①所有患者均符合乳腺導管內增生病變及乳腺癌相關診斷標準[5，6]，且通過檢查確診為乳腺導管內增生病變、乳腺癌；②臨床資料完整者；③隨訪資料完整者；④所有患者均知曉同意此次研究。排除標準：①合并有其他腫瘤者；②臨床資料不完整者；③隨訪資料不完整者；④精神異常者。130例患者，年齡 23～78 歲，平均（50.3±3.1）歲；其中腫瘤直徑≤2.0cm者49例，2.0～5.0cm者56例，＞5.0cm者25例；組織學：Ⅰ級24例，Ⅱ級67例，Ⅲ級39例；其中遠處轉移18例，＞3個淋巴結轉移35例，1～3個淋巴結轉移27例，腋窩淋巴結無轉移50例；分期：Ⅰ期25例，Ⅱ期41例，Ⅲ期23例，Ⅳ期41例；其中乳腺普通導管增生（UDH）27例，乳腺非典型導管增生（ADH）29例，乳腺導管原位癌（DCIS）35例，浸潤性乳腺癌（IDC）39例。所有患者一般資料存在可比性（P＞0.05），研究獲得了我院倫理委員會審核與批準。

1.2 方法HIF-1α、Survivin含量檢測：所應用的試劑由福州邁新生物公司提供，應用免疫組織化學（Ultra Sensitive TMS-P）法對 DAB 進行顯色，試劑盒為S-P，對常規的3～4μm切片進行脫蠟、水化，應用3%的雙氧水對其進行處理，修復EDTA[7]。設置陽性、陰性對照組，陽性對照：已知的陽性切片，陰性對照：PBS代替一抗。后應用高倍鏡觀察，對結果進行判定，0分：陽性細胞數不超過5%；1分：陽性細胞數在6%～25%；2分：陽性細胞數在26%～50%；3分：陽性細胞數在51%～75%；4分：陽性細胞數超過75%。陽性強度判斷，1分：黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色；根據上述陽性細胞數分數以及陽性強度判定分數之和來判定陽性，兩者相加總分≥4分為陽性[8]。

1.3 觀察指標①分析HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌不同組織中的表達情況。②分析HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中的表達情況與臨床病理之間的關系。③分析HIF-1α與Survivin的表達相關性。

1.4 統計學方法數據應用SPSS 18.0進行分析，其中計數資料行χ2檢驗，計量資料行t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌不同組織中的表達情況HIF-1α、Survivin在乳腺浸潤性癌中的陽性表達率高于其他組織（P＜0.05），見表1。

2.2 HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中的表達情況與臨床病理之間的關系HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中的表達情況與患者的年齡、腫瘤大小無明顯關系（P＞0.05），腫瘤發生遠處轉移、淋巴結轉移、組織學級別越高、腫瘤分期越高者HIF-1α、Survivin陽性率越高（P＜0.05），見表2。

2.3 HIF-1α與Survivin表達相關性分析在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中，HIF-1α與Survivin的表達呈正相關（P＜0.05），見表3。

表1 HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌不同組織中的表達情況[n（%）]

表2 HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中的表達情況與臨床病理之間的關系（例）

表3 HIF-1α與Survivin表達相關性

3 討論

乳腺癌是臨床上常見的女性惡性腫瘤之一，與其他國家相比，我國的乳腺癌發生率近年呈直線上升趨勢，且偏向于年輕化[9，10]。實體腫瘤中最常見的為缺氧，HIF-1α主要是腫瘤在缺氧條件下分泌而來，其表達情況可以反映腫瘤瞬間缺氧狀況[11]。腫瘤細胞發生缺氧后會刺激HIF-1α的表達，另外，腫瘤細胞中的某些抑癌基因、癌基因會被激活而促使HIF-1α的分泌，提高HIF-1α的水平[12]。HIF-1α被激活后可以對多種下游基因進行調節，進而會促使血管生成因子的增長繁殖，加快腫瘤發展。HIF-1α在乳腺癌發生、發展過程中也是過表達，過度表達對預后不利。生長素（Survivin）是臨床上近幾年發現的具有較強凋亡抑制作用的因子，在多種惡性腫瘤中它的表達水平比較異常，其作用是促進細胞分裂、生長、抑制細胞凋亡等[13]。

抑癌基因失去活性、癌基因被激活等都會使HIF-1α的水平顯著增高，使活性顯著增強。HIF-1α在缺氧誘導基因發揮作用的過程中起著非常重要的作用，HIF-1α可以對多種下游靶基因的轉錄活性進行調控。近幾年臨床上對HIF-1α與乳腺癌之間的關系進行了研究，發現在乳腺癌、腎癌、胰腺癌、結腸癌、前列腺癌、肺癌中HIF-1α陽性表達率較高，在很多癌前病變中也有一定的表達，但是在良性腫瘤中沒有HIF-1α的表達[14]。通過對乳腺癌患者的組織進行免疫組織化學實驗，可以觀察患者不同組織處HIF-1α、Survivin的表達情況。研究顯示，HIF-1α、Survivin在乳腺浸潤性癌中的陽性表達率高于其他組織（P＜0.05），隨著乳腺癌組織的惡化程度，HIF-1α、Survivin的表達情況也發生著變化，惡化程度越高，HIF-1α、Survivin含量就越高。因此，可以通過檢測患者體內的HIF-1α、Survivin含量來判斷患者的病情變化。

乳腺癌對廣大女性的身心健康造成了很大影響，因此，盡早進行診斷、實施治療對于改善患者預后非常重要。HIF-1主要是機體為了適應缺氧應激而分泌的因子，有α和β兩種形式，都是通過核轉位進入細胞核，活性主要由HIF-1α因子的穩定性與表達水平決定[15，16]。腫瘤在進行生長、發展期間，HIF-1α因子會與其他的缺氧因子比如促紅細胞生成素（EPO）、血管內皮生長因子（VEGF）等結合來促使腫瘤血管的生成，HIF-1α因子會與其他的缺氧因子結合，加快腫瘤的生長與發展進程。HIF-1α含量與乳腺癌患者的雌激素水平之間存在一定的聯系，患者的雌激素水平越高，說明分子分型較好，治療后的效果也更好[17]。因此檢測乳腺癌患者的HIF-1α含量，有利于判斷患者預后、腫瘤轉移、侵襲情況、腫瘤生長發展狀況等。另外，HIF-1α還可以激活乳腺癌耐藥蛋白（BRCP）基因的活性，使它在乳腺癌耐藥過程中發揮一定的作用。Survivin是一種IAPs家族的因子，它的作用是調節細胞分裂、抑制細胞凋亡，其抑制細胞凋亡的作用非常強。另外，Survivin可以使腫瘤細胞失去凋亡監測點的束縛，會使細胞發生異常生長與分裂，進而使癌細胞加快生長繁殖進程；同時，Survivin可以促進淋巴管、腫瘤血管的生產，降低放化療對腫瘤細胞的促凋亡作用。Survivin主要在胎兒生長發育過程中表達，在健康人體中的非增殖細胞內不會表達。研究顯示，HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中的表達情況與患者的年齡、腫瘤大小無明顯關系（P＞0.05），腫瘤發生遠處轉移、淋巴結轉移、組織學分級高其表達陽性率較高（P＜0.05），這就說明，HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中的高表達可能與乳腺癌發生遠處轉移密切相關，因此，HIF-1α、Survivin在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中過度表達會促進腫瘤細胞的生長繁殖，它們在促進腫瘤發展進程中起到了關鍵性作用。另外，細胞核中Survivin的表達水平可以反映乳腺導管內增生病變及乳腺癌患者的總生存期，當細胞核中Survivin的表達水平與胞質中Survivin的表達水平比例超過5時，乳腺導管內增生病變及乳腺癌患者的總生存期較高，細胞核中Survivin的表達水平與胞質中Survivin的表達水平比例與患者的原癌基因人類表皮生長因子受體2（HER-2）陰性率、雌激素受體陽性率呈正相關[18]，這就說明，細胞核中Survivin的表達水平與胞質中Survivin的表達水平比例越高，患者的原癌基因人類表皮生長因子受體2的陰性率就越高，雌激素受體陽性率就越高，這對患者的預后有積極的改善作用。

研究顯示，在乳腺導管內增生病變及乳腺癌中，HIF-1α與Survivin的表達呈正相關（P＜0.05），這說明，降低乳腺導管內增生病變及乳腺癌患者的HIF-1α表達水平，有利于降低Survivin表達水平，這利于改善患者預后。同時，在乳腺癌發生發展期間，HIF-1α與Survivin會相互協同發生作用，因此，盡早對患者進行檢查、診斷、治療，更有利于提高患者的生存質量。在惡性腫瘤發生、發展過程中，最少會有2個基因被異常激活，從而才可以有效地促進腫瘤生長、誘導腫瘤轉移和侵襲等。

此次研究的不足：樣本量較小，所得到的結果可能存在一定的局限性，在今后的工作中，會不斷進行深入的研究與分析，以便對本次結果進行證實。

綜上所述，乳腺癌細胞中缺氧誘導因子-1α與Survivin表達呈正相關，可以通過HIF-1α、Survivin在乳腺癌中的表達情況來判斷患者的病情進展，進而有利于為臨床治療提供一定的依據，有較高的臨床價值。