兩種不同細菌鑒定法在臨床血液檢驗中的應用分析

陳華偉 張文軍 李德新(通訊作者)

101200北京市平谷區醫院檢驗科

細菌為原核微生物，形態微小，結構簡單，但無法在肉眼下對其進行觀察，細菌檢測在臨床診斷和治療中具有重要的地位。近年來隨著臨床細菌檢測技術的不斷發展，臨床對細菌鑒定和藥敏分析的要求也不斷提高，目前臨床細菌鑒定方法及技術較多，由于操作過程不同，且受主觀等因素影響，因此影響鑒定結果[1]。本文將比較常規藥敏試驗檢測和直接藥敏試驗檢測在臨床血液檢驗中的應用價值，旨在為臨床診斷和治療提供依據。

資料與方法

2013年9月-2016年9月收治發熱伴全身感染患者426 例，所有患者在入院前48 h 內均未接受過藥物及相關治療，排除凝血功能障礙及血液系統疾病所致的發熱伴全身感染患者。其中男221例，女205例，平均年齡(57.2±2.5)歲。

檢測方法：留取所有患者的血液樣本20 mL，分別接種于含樹脂需氧培養瓶、含溶血素厭氧菌培養瓶中，并載入至Bact/ALERT 3D 全自動血培養儀和BD BACTEC 9050 全自動血培養儀中。對于培養陽性的血標本分別采用常規藥敏試驗檢測法和直接藥敏試驗檢測法進行細菌鑒定。常規藥敏試驗檢測方法：將確定了的陽性樣本分別接種至血平板、巧克力平板和麥康凱平板上進行培養，在溫度35 ℃、濃度5%的二氧化碳條件下持續培養20 h，然后取菌落涂片，常規進行革蘭染色，根據檢測結果選擇適合的酶進行氧化酶或觸酶試驗。借助微生物鑒定儀：梅里埃VITEK 2 Compact全自動細菌鑒定/藥敏系統進行細菌鑒定及藥敏試驗。操作步驟：無菌棉簽挑取菌落至鑒定管，混勻5 s，等待10 s 使氣泡消失，用VITEK 2 DensiCHEKTM Plus 比濁儀調整菌液濃度0.5麥氏單位，菌液配置后必須在60 s 內加完。然后鑒定管菌懸液145 μL轉入藥敏管中，混勻。把鑒定/藥敏板卡分別插入鑒定管和AST 藥敏管。最后將患者以及鑒定/藥敏信息輸入儀器，并將鑒定/藥敏板放入儀器空位上，關好艙門即可。直接藥敏試驗檢測法：使用無菌注射器將檢驗結果為陽性的血液樣本抽取10 mL 至無菌試管中，使用密度梯度離心法以1 500轉/min的離心速率分離細菌，5～10 min的離心操作后，收集上清液，轉移至新的離心管中，再進行3 000轉/min的離心，離心時間15 min，祛除上清液后用PBS 洗滌沉淀。另取20 μL 懸液涂片對樣本進行革蘭染色操作，倒置顯微鏡下進行觀察，鑒定細菌為革蘭染色陽性或陰性菌。試用無菌棉簽挑取沉淀物，并使用VITEK 2 Compact全自動細菌鑒定/藥敏系統進行細菌的鑒定和藥敏。

統計學處理：采用SPSS 17.0 軟件對搜集到的數據進行統計學處理，涉及的計數資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

細菌鑒定結果：426份血液標本中檢出陽性結果，檢出陽性率92.5%，其中檢出革蘭陰性桿菌337 份(79.1%)，檢出革蘭陽性球菌89份(20.9%)。直接檢測法對革蘭陰性桿菌檢驗符合率和革蘭陽性球菌檢驗符合率分別為94.7%和96.7%，與常規法比較差異無統計學意義(χ2=0.015，P=0.904，P＞0.05)，見表1。

藥敏試驗結果：直接法藥敏試驗對革蘭陰性桿菌檢驗耐藥率和敏感率分別為97.9%和97.4%，對革蘭陽性球菌檢驗耐藥率和敏感率分別為97.8%和98.7%，與常規法比較差異均無統計學意義(χ2=0.003， P=0.959， χ2=0.006， P=0.938，P＞0.05)，見表2。

討 論

感染患者機體內會攜帶一定的耐藥性的細菌，若進一步增強這些細菌的耐藥性，就會加重患者的病情，給臨床治療帶來一定的難度。因此對感染患者進行及時有效的血液細菌學檢測及耐藥性檢測對于臨床診斷及指導臨床合理用藥具有重要意義，近年來抗生素濫用問題嚴重，細菌的耐藥性和對抗生素的敏感性發生了巨大變化，使得細菌檢測的難度有所增加[2]，因此臨床工作者一直在探求一種方便、快捷、有效的鑒定方法，以提高臨床檢驗質量，從而為臨床診療提供依據。

目前臨床細菌鑒定的方法主要分為表型鑒定法和基因型鑒定法兩大類，前者主要是從細菌的形態、生理生化、細胞組分、蛋白質等對細菌進行鑒定，目前多數醫院由于條件的限制難以廣泛開展基因型鑒定[3，4]。針對藥敏試驗的方法也較多，包括紙片擴散法、稀釋法、抗生素濃度梯度法等，但每種檢驗方法均存在利弊[5]。

常規方法檢測陽性血液標本較為準確，但藥敏試驗及細菌鑒定速度均較慢，難以滿足臨床診療的需求[6]。本研究結果表明：直接藥敏試驗細菌鑒定準確率、抗生素耐藥率和敏感率檢測準確率與常規檢測方法相近，這與國內相關文獻報道一致[7，8]。直接藥敏試驗在合適的溫度下對抑菌環大小進行藥敏試驗鑒定，無須進行分離培養操作，操作更加方便快捷，能夠及時給臨床診斷和治療提供依據[9]。因此，當患者病情復雜，但短時間不會威脅生命時可先行直接檢驗，再行常規檢驗，一般情況下采取直接藥敏試驗即可達到檢驗要求，臨床可廣泛開展。

表1 兩種細菌鑒定法檢驗符合率比較

表2 兩種細菌鑒定法藥敏試驗結果分析