消痤膠囊提取工藝優(yōu)選

楊振萍，薛 紅 ，呼延杰，白 妮，劉喜強(qiáng)

（陜西省延安市中醫(yī)醫(yī)院，陜西 延安 716000）

消痤飲為我院皮膚科協(xié)定處方，具有清熱、解毒、涼 血、宣肺化痰及散結(jié)功效，臨床用于治療青年痤瘡及脂溢性皮炎、糠秕孢子性毛囊炎等癥。為方便攜帶和服用，本院制劑室擬將此協(xié)定處方制備為膠囊劑。本試驗(yàn)中采用正交試驗(yàn)法，考察水提工藝中的加水量、煎煮次數(shù)及煎煮時(shí)間對(duì)消痤膠囊水提物指標(biāo)性成分綠原酸含量及干浸膏得率的影響，以確定最佳提取工藝。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；液體真空濃縮煎藥機(jī)、十功能自動(dòng)兩煎煎藥機(jī)（北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限責(zé)任公司）。

試藥：綠原酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110753-200413，供含量測(cè)定用）；消痤飲（延安市中醫(yī)醫(yī)院協(xié)定處方）；甲醇、乙腈均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

將消痤膠囊制劑處方水提物室溫靜置過夜（12 h以上），濾過，取上清液，減壓濃縮，壓力0.7 kPa，溫度45℃。觀察分離筒，待分離筒液面無變化時(shí)取出濃縮膽，稱定質(zhì)量，連續(xù)多次，直到質(zhì)量恒定，浸膏粉即為樣品。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-Pack VP-ODS柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈 -5% 醋酸溶液（10 ∶90，V／V）；流速：0.8 mL ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：328 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

取綠原酸對(duì)照品5 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至50 mL，搖勻，即得對(duì)照品溶液(100 μg ／mL)。取樣品約 1 g，精密稱定，置 30 mL錐形瓶中，加入50%甲醇 30 mL，超聲處理 10 min，濾過，用50%甲醇補(bǔ)足30 mL，搖勻，即得供試品溶液。取按上述工藝條件制備不含金銀花的干浸膏粉，取約1 g，精密稱定，置30 mL錐形瓶中，加50%甲醇30 mL，超聲處理10 min，濾過，用50%甲醇補(bǔ)足30 mL，搖勻，即得空白樣品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)及空白干擾試驗(yàn)：精密吸取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液、對(duì)照品+供試品溶液、空白樣品溶液各10 μL，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，詳見圖1。結(jié)果表明，樣品中的其他組分對(duì)綠原酸的測(cè)定無干擾。

線性關(guān)系考察：取對(duì)照品溶液，制成質(zhì)量濃度為140.00，70.00，35.00，17.50，8.75 μg ／mL 的系列對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X，μg）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝10.911X-7.5417，R2＝0.999 9（n ＝5）。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在8.75～140.00 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取高、中、低質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣，記錄峰面積，同一樣品1 d內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣6次，同樣3個(gè)質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液連續(xù)測(cè)定6 d，計(jì)算含量。結(jié)果日內(nèi)、日間精密度的 RSD分別為1.17%，0.14%，0.70% 和 1.15% ，0.48% ，1.25% （n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：室溫下取同一供試品溶液，24 h內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0.15%（n＝6），表明供試品溶液室溫下在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品適量，依法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為0.12%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品 0.6 mL，加35 μg／mL 的綠原酸對(duì)照品 0.3 mL，依法制備供試品溶液混合進(jìn)樣10 μL，進(jìn)樣6次。結(jié)果見表1。

表1 綠原酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.3 正交試驗(yàn)

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)、結(jié)果及分析見表2至表4。通過分析，水提工藝最佳組合為A2B1C2或A1B3C3，即加8倍量水，煎煮2次，每次1 h；或加10倍量水，煎煮1次，每次2 h。3種因素的影響強(qiáng)度雖無顯著差異，但煎煮次數(shù)影響明顯大于其他2種因素。以總浸膏得率為考察指標(biāo)的最佳組合為A3B1C3，考慮到水提物組方質(zhì)地較輕，且組方中指標(biāo)性成分綠原酸受熱時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)被破壞，故采用A2B1C2方案作為消痤膠囊處方的水提工藝。

表2 因素水平表

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 綠原酸得率方差分析結(jié)果

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

按制劑處方比例放大100倍，稱取3份藥材，按照試驗(yàn)篩選的最佳工藝，即加8倍水量，提取2次，每次1 h，進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果3批中試樣品中綠原酸含量分別為 1.64，1.68，1.63 mg ／g(生藥)，干浸膏粉得率分別為12.99% ，13.34% ，12.41% 。可見，優(yōu)選的最佳提取工藝合理，具有較好的穩(wěn)定性。

3 討論

消痤膠囊制備處方來源于醫(yī)院皮膚科使用近20年的協(xié)定處方，由犀角地黃湯合枇杷清肺飲加減，通過解毒散結(jié)清宣肺熱，清熱涼血清胃熱而起到治療作用，方中君藥金銀花有清熱解毒、散結(jié)消癰功效[1-4]。金銀花具有抑菌和抗炎作用，對(duì)金黃色葡萄球菌有一定抑制作用，若和連翹合用，抗菌范圍還可互補(bǔ)[5]。本試驗(yàn)中以金銀花有效成分綠原酸含量和干浸膏粉得率為考察指標(biāo)[6-11]，確定消痤膠囊水提物最佳工藝，方法簡(jiǎn)單，經(jīng)試驗(yàn)及小批量生產(chǎn)，產(chǎn)品穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控，可為制劑生產(chǎn)提供一定參考。