4種藥品包裝材料的生物安全性評價

李曉春* 王莉芳 徐長根

（陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，陜西 西安 710065）

藥品包裝的材料與結(jié)構(gòu)形式，尤其是直接接觸藥品的包裝材料，ā對保證藥品穩(wěn)定性起決定性作用。由于藥包材與藥品的接觸時間可長達整個藥品的有效期，因此對藥包材生物安全性的重視應(yīng)等同于對藥品本身安全性的重視[1]。

聚丙烯是一種優(yōu)質(zhì)的輸液包裝材料，具有無毒、無臭、無味、力學(xué)性能優(yōu)良、耐腐蝕、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點。三層共擠輸液用膜（即聚丙烯/聚丙烯/聚丙烯三層共擠膜）是以聚丙烯為主體，采用共擠出工藝，不使用黏合劑所形成的三層輸液用膜。袋是指由前者通過熱合方法制成的輸液袋。五層共擠輸液用膜（即酯類共聚物/乙烯甲基丙烯酸酯聚合物/聚乙烯/聚乙烯/改性乙烯-丙烯聚合物五層共擠膜）是采用共擠出工藝，不使用黏合劑所形成的五層輸液用膜。袋是指由上述膜通過熱合方法制成的輸液袋[2]。其中不含增塑劑，對熱穩(wěn)定，可121 ℃高溫蒸汽滅菌而不影響透明度，惰性好，不與藥物產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，柔韌性強，機械強度高，可抗低溫，不易破裂，易于運輸和儲存，是我國臨床使用十分廣泛的輸液包裝材料[3]。我們收集了12個廠家的4個品種的藥品包裝材料，并對它們進行了生物安全性評價，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試品：聚丙烯輸液袋，3個廠家生產(chǎn)（記為A、B、C廠），共3批；塑料輸液容器用聚丙烯組合蓋（拉環(huán)式），3個廠家生產(chǎn)（記為D、E、F廠），共3批；三層共擠輸液用膜（Ⅰ）、袋，3個廠家生產(chǎn)（記為G、H、I廠），共3批；五層共擠輸液用膜（Ⅰ）、袋，3個廠家生產(chǎn)（記為J、K、L廠），共3批。

1.1.2 材料、藥品、試劑。高密度聚乙烯：批號：K0M357，美國藥典委員會；氯化鈉注射液，批號：6L88G3，中國大冢制藥有限公司；草酸鉀，批號：20151014，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；優(yōu)級胎牛血清，貨號：TBD21HY，天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司；RPMI培養(yǎng)基，批號：AB10125297，HyClone；青鏈霉素混合液（100×），批號：20170503，Solarbio；胰蛋白酶，批號：SLBP8607V，Sigma；苯酚，批號：20160317，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；無菌PBS，批號：05E16B21，武漢博士德生物工程有限公司；直徑35mm平皿，批號：10516006，Corning；濾器，0.22 μm，批號：R6EA47847，Millipore；鱟試劑，0.25 EU/mL，批號：1703012，湛江博康海洋生物有限公司；細菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水），批號：160006-201401，中國食品藥品檢定研究院；細菌內(nèi)毒素工作標準品，80 EU/支，批號：150601-201580，中國食品藥品檢定研究院；甲醛溶液，批號：20170921，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；弗氏完全佐劑（CFA），批號：1002237101，Sigma；十二烷基硫酸鈉，批號：20050926，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；液體石蠟，批號：890528，廣州市化學(xué)試劑公司。

1.1.3 細胞及動物：細胞株，L929細胞，武漢博士德生物工程有限公司。昆明種小鼠，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（陜）2012-003；新西蘭家兔、白化豚鼠，由西安市迪樂普生物資源開發(fā)有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（陜）2014-001。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度22～26 ℃，相對濕度40%～70%，實驗動物使用許可證號： SYXK（陜）2013-00。

表1 細菌內(nèi)毒素、細胞毒性、皮膚致敏、皮內(nèi)刺激、急性全身毒性、溶血、熱原檢查結(jié)果

1.1.4 儀器：電子天平，BS2202S，賽多利斯儀器有限公司；生化培養(yǎng)箱，BSP-250，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；低速臺式離心機，KA-1000，上海安亭科學(xué)儀器廠；雙光束紫外分光光度計，UV-2550，日本島津公司；電子恒溫水箱，HH.W21，北京中興偉業(yè)儀器有限公司；醫(yī)用凈化工作臺，SW-CJ-2F，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；CO2培養(yǎng)箱，HF151，上海力康醫(yī)療設(shè)備有限公司；倒置相差顯微鏡，XSZ-D2，重慶光學(xué)儀器廠；立式壓力蒸汽滅菌鍋，LDZF-50KB-Ⅱ，上海申安醫(yī)療器械廠；智能熱原儀，ZRY-3/E，天津天大天發(fā)科技有限公司；電子稱，DS-788，上海寺岡電子有限公司。

1.2 方法：按國家藥包材標準進行試驗[4]。

1.2.1 細菌內(nèi)毒素：聚丙烯輸液瓶供試液的制備：取供試品60 cm2，剪成0.5 cm×3 cm的小條，加入10 mL BET水，經(jīng)（121±2）℃ 60 min滅菌，放冷，作為試驗液，并用同批水作為空白液。塑料輸液容器用聚丙烯組合蓋（拉環(huán)式）供試液的制備：按每個組合蓋加50 mL BET水的比例混合，振搖1 min，濕熱滅菌（121±2）℃保持30 min，冷卻至室溫，即得。三層、五層共擠輸液用膜（Ⅰ）、袋供試液的制備：取空袋，加入標示容量的滅菌注射用水，封袋后，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，（121±2）℃保持30 min，放冷，即得。依法檢查（《中國藥典2015年版》四部通則1143[6]），每1 mL供試液中含內(nèi)毒素不得過0.25 EU。

1.2.2 細胞毒性：取供試品60 cm2，用適宜的清潔劑清洗除去油污，再用純化水沖洗干凈，濾紙吸干后切成0.5 cm×2 cm條狀，濕熱滅菌后，置玻璃容器內(nèi)。加入10 mL含血清培養(yǎng)基，（37±1）℃浸提（24±2）h。照細胞毒性檢查法（YBB00012003-2015）測定，（聚丙烯輸液瓶按第四法測定，其余按第一法測定）應(yīng)符合規(guī)定。

1.2.3 皮膚致敏：取供試品60 cm2，用肥皂水清洗除去油污，再用純化水沖洗干凈，濾紙吸干后切成0.5 cm×2 cm條狀，置玻璃容器內(nèi)，加入氯化鈉注射液20 mL，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，121 ℃保持60 min。照皮膚致敏檢查法（YBB00052003-2015）測定，致敏反應(yīng)不得過Ⅰ度。

1.2.4 皮內(nèi)刺激：取供試品120 cm2，用肥皂水清洗除去油污，再用純化水沖洗干凈，濾紙吸干后切成0.5 cm×2 cm條狀，置玻璃容器內(nèi)，加入氯化鈉注射液20 mL，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，121 ℃保持60 min。照皮內(nèi)刺激檢查法（YBB00062003-2015）測定，應(yīng)無刺激反應(yīng)。

1.2.5 急性全身毒性檢查：取供試品60 cm2，用純化水沖洗干凈，濾紙吸干后切成0.5 cm×3 cm條狀，濕熱滅菌后，置玻璃容器內(nèi)。加入10 mL氯化鈉注射液，（37±1）℃浸提（24±2）h。照急性全身毒性檢查法（YBB00042003-2015）測定，應(yīng)無急性全身毒性反應(yīng)。

1.2.6 溶血檢查：稱取3份供試品，每份5 g，切成0.5 cm×2 cm條狀。照溶血檢查法（YBB00032003-2015）測定，溶血率應(yīng)小于5%。

1.2.7 熱原檢查：取供試品600 cm2，用純化水沖洗干凈，濾紙吸干后切成0.5 cm×3 cm條狀，置浸提容器內(nèi)，高壓蒸汽滅菌，115 ℃保持30 min。加入100 mL氯化鈉注射液，（37±1）℃浸提（24±2）h。照熱原檢查法（YBB00022003-2015）測定，應(yīng)無熱原反應(yīng)。供試用家兔及試驗前準備應(yīng)符合《中國藥典2015年版》四部通則1142的要求[4]，供試液的制備應(yīng)按無菌操作法進行。

2 結(jié) 果

細菌內(nèi)毒素檢查、細胞毒性檢查、皮膚致敏檢查、皮內(nèi)刺激檢查、急性全身毒性檢查、溶血檢查、熱原檢查結(jié)果見表1。

結(jié)果顯示，4個品種12個廠家的藥包材，按照國家藥包材標準規(guī)定，進行7項生物安全性項目檢查，結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討 論

國家藥包材標準中細胞毒性檢查法（YBB00012003-2015）中的第一法（相對增殖度法）對陽性對照液做出了規(guī)定，為6.3%苯酚的細胞培養(yǎng)液。我們在試驗中發(fā)現(xiàn)，在加入6.3%苯酚培養(yǎng)液的時候和培養(yǎng)48 h后，均無法在鏡下觀察到細胞形態(tài)。《中華人民共和國國家標準醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法第2部分：生物學(xué)試驗方法》GB/T 14233.2-2005中規(guī)定陽性對照液為0.5%苯酚的細胞培養(yǎng)液[5]。我們發(fā)現(xiàn)，在加入陽性對照液時，可在鏡下觀察到細胞形態(tài)，未見明顯異常，培養(yǎng)48 h后，鏡下未見細胞內(nèi)顆粒，溶解的細胞超過70%，毒性分級為4級（重度毒），同時陰性對照的毒性分級為0級，認為試驗系統(tǒng)有效。故采用后者結(jié)果進行毒性分級。

本文綜合了《中國藥典2015年版》中的細菌內(nèi)毒素檢查法及國家藥包材標準中相應(yīng)的試驗方法，對12個廠家的4個品種的藥包材進行了生物安全性評價，結(jié)果均符合規(guī)定。可以認為聚丙烯輸液袋、塑料輸液容器用聚丙烯組合蓋（拉環(huán)式）、三層共擠輸液用膜（Ⅰ）、袋、五層共擠輸液用膜（Ⅰ）、袋作為藥包材用于臨床是安全的。