九制黃精炮制工藝研究

陳志敏，胡昌江*，胡麟

黃精始載于《名醫(yī)別錄》[1]，為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.etHemsl.、黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根莖[2]。生黃精有麻舌感，且刺激咽喉，通過炮制不僅增強(qiáng)了黃精的補(bǔ)脾潤肺益腎的功能，還可以去除麻舌感，避免刺激咽喉。自古以來有關(guān)黃精炮制方法較多，但均以九蒸九曬為主流。九制黃精作為川幫重要的炮制品，具有巨大的藥用及保健價(jià)值，但由于其操作工藝復(fù)雜且缺乏明確的工藝參數(shù)，限制了工業(yè)大生產(chǎn)，導(dǎo)致市場九制黃精幾近失傳。現(xiàn)四川省中藥飲片炮制規(guī)范所載制黃精為蒸制5～8小時(shí)，缺乏完整工藝參數(shù)。因此，有必要對九制黃精的炮制工藝進(jìn)行研究，使九制黃精適用于工業(yè)化生產(chǎn)工藝，更好地傳承炮制技藝。

1 材料

1.1 儀器

UV-1100紫外可見分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；BP211D電子天平（感量0.01 mg），BS200S電子天平（感量0.001 g），德國Sartorius公司；正德牌遠(yuǎn)紅外可控溫電爐（功率45～2000W）；不銹鋼手提式高壓滅菌鍋（型號(hào)：YX-280B，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：YZB-皖0037-2005）。

1.2 試劑與試藥

黃精藥材購于荷花池藥材市場，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)胡昌江教授鑒定為滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.的干燥根莖，各檢查項(xiàng)均符合藥典規(guī)定，藥材質(zhì)量合格，可用于炮制工藝和藥效學(xué)的研究。黑豆購于溫江菜市場，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)胡昌江教授鑒定為豆科植物大豆Glycine max（L.）Merr.的干燥成熟種子。D-無水葡萄糖（批號(hào)：110833-201506）、黃精對照藥材（批號(hào)：121341-201404）、滇黃精對照藥材（批號(hào)：120998-201004）和黃精（制）對照藥材（批號(hào)：121553-201202），中國食品藥品檢定研究院。95%乙醇、正丁醇、甲醇、石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、甲酸、香草醛、硫酸、蒽酮，均購于成都科龍化工試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 浸出物的測定

按《中國藥典》2015年版通則2201熱浸法對水溶性和醇溶性（以稀乙醇作溶劑）浸出物進(jìn)行測定。

2.2 多糖含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備…取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品0.03291 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含無水葡萄糖0.3291 mg）。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備…精密量取對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2 %蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即置冰水浴中冷卻10分鐘，取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法（通則0401），在582 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度（mg．mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為：Y=24.899X+0.0479，r=0.9992。結(jié)果表明葡萄糖在0.003291～0.019746 mg．mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 供試液制備及測定…取60 ℃干燥至恒重的樣品細(xì)粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量（mg），計(jì)算，即得。

2.3 總糖含量測定[3]

2.3.1 對照品溶液的制備…取干燥至恒重的葡萄糖對照品50.05 mg，置50 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解定容至刻度，搖勻即得（每1 mL中含無水葡萄糖1.001 mg）。精密量取對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1 mL用蒸餾水定容至10 mL，即得每l mL含葡萄糖為0.01001，0.02002，0.04004，0.06006，0.08008，0.1001 mg的對照液，備用。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備…精密量取對照品溶液各2 mL置具塞刻度試管中，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液5 mL，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，再置冰水浴中冷卻5 min，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法，在620 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度（ug．mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程為：Y=23.204X+0.0070，r=0.9991。結(jié)果表明葡萄糖在0.00286～0.0286 mg．mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 供試液制備及測定…取樣品粉末約各1 g，精密稱定，加入蒸餾水50 mL，超聲提取兩次，每次30 min，靜置10 min，濾過，合并濾液，濃縮并定容至50 mL，精密吸取供試液1 mL，用蒸餾水定容至10 mL得供試液。精密吸取2.3.3項(xiàng)下供試液2 mL，置具塞干燥試管中，照2.3.2項(xiàng)下的方法，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg)，計(jì)算，即得。

2.4 九制黃精的傳統(tǒng)工藝還原

參考九制黃精的傳統(tǒng)制備方法：黃精用量20%的黑豆熬汁，分為九份，第一次取一份黑豆汁用水稀釋后與黃精藥材拌勻，潤至透心，圓氣后蒸至數(shù)小時(shí)（蒸制過程注意收集黃精汁），取出曬至微干，第二份黑豆汁再以收集的黃精汁液稀釋后拌入（十分重要，此步關(guān)系黃精內(nèi)在成分含量），混勻，再蒸再曬，如此反復(fù)九次蒸至內(nèi)外呈滋潤黑色，切制干燥即得。在每蒸曬一次的過程中都留下一份樣品，分別定名為一制黃精、二制黃精、……、九制黃精。九制黃精由于工藝繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，生產(chǎn)周期長，消耗燃料多，并且在蒸制過程中藥汁易流失，不適于大生產(chǎn)，因此生產(chǎn)該炮制品的廠家日益減少，處于瀕臨滅絕的境地，故市場上該炮制品種嚴(yán)重匱乏。

表1 生黃精～一至九制黃精的含量測定（n=3）

結(jié)果表明：黃精蒸制后，水、醇浸出物含量均有增加，說明黃精經(jīng)炮制后，藥物的成分溶出增多，利于其藥效的發(fā)揮，且其浸出物隨蒸制時(shí)間延長而遞增。一至九制黃精的多糖含量隨著蒸曬次數(shù)的增多而減少，總糖的含量隨著蒸曬次數(shù)的先增多后降低，這可能是因?yàn)檎糁剖苟嗵谴罅克猓黾恿巳芙饴剩S后的降低可能是多糖水解產(chǎn)生了大量的單糖和游離氨基酸，游離氨基與還原糖生成糖胺，經(jīng)Amadori重排形成Amadori中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物繼續(xù)反應(yīng)最終形成呋喃和5-HMF[4]。

2.5 九制黃精改高壓工藝研究

在單因素和文獻(xiàn)查閱的基礎(chǔ)上，以外觀性狀、浸出物、多糖、總糖等為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，按L9(34)正交實(shí)驗(yàn)考察壓制溫度、時(shí)間和次數(shù)，優(yōu)選高壓蒸制黃精的工藝，因素水平見表2。

表2 正交實(shí)驗(yàn)因素及水平設(shè)計(jì)

根據(jù)所測成分在黃精中的重要性對試驗(yàn)進(jìn)行綜合評(píng)分，糖類成分是黃精的主要成分，且多糖為《中國藥典》規(guī)定的黃精的指標(biāo)成分；而浸出物可以判斷黃精的煎出率，又因外觀性狀是對黃精炮制鑒別的傳統(tǒng)方法。因此，考慮多糖30%、總糖25%、水溶性浸出物 20%、醇溶性浸出物 20%、外觀性狀5%的權(quán)重，于是每號(hào)試驗(yàn)的綜合評(píng)分=多糖隸屬度×30%+單糖及低聚糖隸屬度×25%+水浸出物隸屬度×20%+醇浸出物隸屬度×20%+外觀形狀及×5%，滿分為 1.00。結(jié)果見表3、表4。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

6 69.33 71.89 7.28 57.66 8 0.43 7 75.77 78.86 7.68 64.24 9 0.99 8 72.11 76.54 7.57 61.57 8 0.76 9 69.98 71.01 7.23 54.57 8 0.35 K1 0.21 0.46 0.55 K2 0.76 0.54 0.42 K3 0.33 0.30 0.34 R 0.55 0.24 0.21

表4 方差分析表

由表4中極差R值可知，各因素的作用為：A＞B＞C，方差分析可知因素A、B和C均對試驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響。根據(jù)A因素水平的均數(shù)估計(jì)，因綜合評(píng)分指標(biāo)越大越好，水平2的均數(shù)值0.76最大，故A因素取水平2好。類似分析B因素取水平2均可，C因素取水平1好，為A2B2C1，即九制黃精的最佳工藝為120 ℃高壓，2 h，壓制一次即可。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照上述黃精的最佳炮制工藝，取另外購買批次黃精200 g，加入20%的黑豆熬汁，潤透，120 ℃高壓壓制2 h，取出切成小丁狀，烘箱干燥，制成高壓黃精飲片。所獲飲片表面黑色，有光澤。中心深褐色，質(zhì)柔韌，味甜，嚼之黏性足的成品。實(shí)驗(yàn)室泡服，口感好，無生品的副作用，并與生品和傳統(tǒng)方法相比較，高壓黃精與九制黃精差異不大，且糖類含量較高，表明工藝操作簡便，合理可控。結(jié)果見表5。

表 5 高壓黃精和傳統(tǒng)九制黃精質(zhì)量對比

3 討論

黃精藥食同源，具有極高的食療和藥療價(jià)值，并被諸家養(yǎng)生所推崇[5]。黑豆享有“豆中之王”[6]的美稱，其諸多作用與黃精現(xiàn)代藥理作用相似，利用黑豆九制黃精，可使有效成分富集，增強(qiáng)療效。九制黃精，是黃精以黑豆汁為輔料，經(jīng)九蒸九曬后，不僅可以破壞粘液質(zhì)以消除“戟人咽喉”的副作用，而且可以轉(zhuǎn)變藥性，利于有效成分積累，使其滋而不膩，增強(qiáng)補(bǔ)肝腎作用。

傳統(tǒng)九制黃精炮制方法費(fèi)工耗時(shí)，同時(shí)化學(xué)成分損失嚴(yán)重，雖消除刺激性也帶走很多有效成分。本文對其進(jìn)行高壓工藝改革，優(yōu)選出新的炮制工藝，其操作簡便省時(shí)，有利于工業(yè)化大生產(chǎn)。但還未進(jìn)行系統(tǒng)全面的藥效學(xué)驗(yàn)證，尚需進(jìn)一步深入分析。