細(xì)胞凋亡調(diào)控基因p53、bax和 bcl-2在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者胎盤組織中的表達(dá)

(鄭州市第一人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000)

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)屬于孕期特有的肝臟疾病，易引發(fā)胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)及新生兒窒息等,已被列為高危妊娠之一[1]。臨床積極探究一種可評(píng)估ICP疾病嚴(yán)重程度的基因標(biāo)志物尤為重要。長期臨床實(shí)踐表明細(xì)胞凋亡在妊娠期胎盤組織中發(fā)揮重要作用，妊娠晚期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡增多，其在一定程度上利于母兒間營養(yǎng)物質(zhì)交換，但當(dāng)細(xì)胞凋亡增加所致胎盤損傷超過其代償能力時(shí)，將出現(xiàn)胎盤功能減退，其中p53、bax和 bcl-2均為細(xì)胞凋亡中重要的調(diào)控基因[2]。目前，臨床有關(guān)ICP患者胎盤細(xì)胞凋亡調(diào)控基因p53、bax和 bcl-2在胎盤中的表達(dá)意義的研究尚在進(jìn)一步探索中，本文進(jìn)一步對(duì)此展開臨床對(duì)照性研究，結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2015年10月～2017年12月鄭州市第一人民醫(yī)院收治的50例妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦為觀察組，同期36例正常妊娠者為對(duì)照組。病例患者納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中華婦產(chǎn)科學(xué)》有關(guān)ICP診斷標(biāo)準(zhǔn)；既往無肝膽疾病史、皮膚病史及其他妊娠期相關(guān)并發(fā)癥；患者及其家屬對(duì)本研究內(nèi)容目的知曉，自愿簽署書面知情同意書；均為單胎孕產(chǎn)婦。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期高血壓疾病及妊娠期糖尿病、膽石癥和急性肝炎等疾病者；合并其他產(chǎn)科并發(fā)癥或合并癥；合并嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具可比性。

1.2 方法

標(biāo)本采集：兩組孕婦均在胎盤娩出5min內(nèi)，取胎盤母體面中央組織4 cm3，應(yīng)避免梗死及鈣化區(qū)，采用10%中性緩沖甲醛固定，采用石蠟包埋。實(shí)驗(yàn)方法：胎盤病理切片采用蘇木素伊紅染色，在光鏡下對(duì)細(xì)胞形態(tài)變化進(jìn)行觀察，p53鼠抗人單克隆抗體、bax鼠抗人單克隆抗體和 bcl-2兔抗人單克隆抗體(均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司)，免疫組織化學(xué)檢測試劑盒為即用型(購自DAKO公司)，采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測胎盤細(xì)胞凋亡調(diào)控基因p53、bax和 bcl-2的蛋白表達(dá)情況，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行；采用放射免疫法檢測兩組血清膽汁酸水平。細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒即為陽性信號(hào)，其中p53陽性信號(hào)位于細(xì)胞核內(nèi)，bax和bcl陽性信號(hào)位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)；采用MIQAS醫(yī)學(xué)影像定量分析系統(tǒng)及醫(yī)學(xué)圖像定量分析軟件(上海求為生物科技有限公司提供)測量染色后不同成分在免疫組織化學(xué)圖像中顯示陽性區(qū)域面積比和光密度值(OD)進(jìn)行定量分析；每片在顯微鏡25×1O視野下隨機(jī)選取三次測量顯色陽性區(qū)域面積比以及OD值，計(jì)算平均值，檢測免疫組織化學(xué)陽性指數(shù)=陽性面積比×OD。

1.3 觀察指標(biāo)

兩組血清膽汁酸水平比較；p53、bax和 bcl-2在兩組胎盤組織中的蛋白表達(dá)情況；p53、bax和 bcl-2與ICP胎盤凋亡發(fā)生的相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組血清膽汁酸水平比

對(duì)照組血清膽汁酸水平(3.59±1.00)μmol/L，觀察組為(29.46±3.76)μmol/L。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=40.21，P<0.05)。

2.2 p53、bax和bcl-2在兩組胎盤組織中的蛋白表達(dá)比較

觀察組p53、bax蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯高，而bcl-2蛋白表達(dá)較對(duì)照組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2；p53、bax和bcl-2在ICP患者胎盤組織中表達(dá)情況，見圖1～3。

表2 p53、bax和bcl-2在兩組胎盤組織中的蛋白表達(dá)比較

圖1p53在ICP患者胎盤組織中表達(dá)

圖2 bax在ICP患者胎盤組織中表達(dá)

圖3 bcl-2在ICP患者胎盤組織中表達(dá)

2.3 p53、bax和 bcl-2與ICP胎盤凋亡發(fā)生的相關(guān)性分析

pearson相關(guān)系數(shù)分析結(jié)果顯示，p53、bax與ICP胎盤凋亡發(fā)生存在明顯正相關(guān)(r=0.29、0.30，P<0.05)，而bcl-2與ICP胎盤凋亡發(fā)生存在明顯負(fù)相關(guān)(r=0.30，P<0.05)，年齡與ICP發(fā)生無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

3 討論

ICP為妊娠中晚期常見并發(fā)癥，患者主要表現(xiàn)為皮膚瘙癢和血中膽汁酸增高，易引發(fā)胎兒窘迫、死胎、新生兒窒息及死產(chǎn)等多種并發(fā)癥，病因多與激素因素、免疫因素、遺傳因素及環(huán)境因素等有關(guān)，ICP診斷主要依據(jù)患者臨床表現(xiàn)、多參數(shù)實(shí)驗(yàn)室檢查等手段，同時(shí)排除急性病毒性肝炎、膽石癥及妊娠期急性脂肪肝、肝酶升高等[3]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究指出，在ICP病理妊娠期間，因存在高膽汁酸血癥及缺氧等致細(xì)胞凋亡因素，常導(dǎo)致胎盤細(xì)胞增殖和凋亡間的平衡紊亂，胎盤灌注不足，最終引發(fā)胎兒宮內(nèi)缺氧等；p53、bax和 bcl-2屬于細(xì)胞凋亡調(diào)控的常見基因[4]，目前有關(guān)ICP患者胎盤細(xì)胞凋亡調(diào)控基因p53、bax和 bcl-2在胎盤中的表達(dá)水平及臨床意義的研究并不多見。

本研究發(fā)現(xiàn)觀察組膽汁酸水平、p53、bax蛋白表達(dá)較對(duì)照組高，bcl-2蛋白表達(dá)較對(duì)照組低，p53、bax與ICP發(fā)生存在正相關(guān)，而bcl-2與ICP發(fā)生存在負(fù)相關(guān)，年齡與ICP發(fā)生無明顯相關(guān)性，初步證實(shí)了ICP患者胎盤細(xì)胞凋亡調(diào)控基因p53、bax在胎盤中的表達(dá)上調(diào)，而bcl-2表達(dá)下調(diào)，三者在ICP胎盤細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。其中p53屬于一個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其水平升高與細(xì)胞DNA損傷程度密切相關(guān)，在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面發(fā)揮重要作用；Bcl-2為抑制細(xì)胞凋亡作用的基因，其在抑制組織細(xì)胞凋亡和延長細(xì)胞壽命方面積極作用明確；bax基因主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡信號(hào)刺激時(shí)，bax基因表達(dá)隨之增多，構(gòu)象發(fā)生變化，并通過其疏水性羧基端結(jié)合在線粒體膜上，從而改變線粒體膜通透性，繼而誘發(fā)細(xì)胞凋亡[5]。

綜上所述，ICP患者胎盤細(xì)胞凋亡調(diào)控基因p53、bax和 bcl-2在胎盤中的表達(dá)對(duì)胎盤細(xì)胞凋亡情況影響顯著，臨床上可據(jù)此為ICP患者制訂安全、有效的治療方案。