XpertMTB/RIF技術對結核分枝桿菌的診斷價值

陳波 馬曉波 洪國粦

摘要：目的? 對Xpert MTB/RIF技術檢測結核分枝桿菌（MTB）的結果進行分析并評估其價值。方法? 采集2017年10月～2018年10月本院就診疑為結核分枝桿菌感染的患者共580例，利用Xpert MTB/RIF技術對其痰液（或體液）標本進行DNA檢測，同時將標本進行固體培養及涂片抗酸染色并對檢測結果進行比較。結果? Xpert MTB/RIF技術檢測MTB的陽性率為18.97%（110/580），和固體培養法的陽性率18.62%（108/580）相比差異無統計學意義（P>0.05）;和抗酸染色法的陽性率15.00%（87/580）相比則更為敏感，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論? Xpert MTB/RIF檢測技術和固體培養法不相上下，且由于抗酸染色法，可以用于MTB的快速篩選。

關鍵詞：Xpert MTB/RIF技術;結核分枝桿菌;篩選;酸染色法;固體培養法

中圖分類號：R542.2+2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.06.056

文章編號：1006-1959（2019）06-0172-02

Abstract：Objective? To analyze and evaluate the results of Xpert MTB/RIF detection of Mycobacterium tuberculosis （MTB）.Methods? A total of 580 patients with suspected Mycobacterium tuberculosis infection were enrolled in our hospital from October 2017 to October 2018. The sputum （or body fluid） specimens were tested for DNA by Xpert MTB/RIF technique. Solid culture and smear acid-fast staining and comparison of test results.Results? The positive rate of MTB detected by Xpert MTB/RIF technique was 18.97%（110/580）， and the positive rate of solid culture method was 18.62% （108/580），the difference was not statistically significant （P>0.05）; The positive rate of staining was 15.00%（87/580）， which was more sensitive，the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion? Xpert MTB/RIF detection technology is comparable to solid culture method， and can be used for rapid screening of MTB due to acid-fast staining.

Key words：Xpert MTB/RIF technology;Mycobacterium tuberculosis;Screening;Acid staining;Solid culture

結核病（tuberculosis）是全球十大死因之一，2017年全球因結核病死亡例數為總共為160萬例，是高于艾滋病在內的單一傳染病中的頭號殺手。根據世界衛生組織2018年的報告，2017年全球的結核病潛伏感染人群約為17億，潛伏感染率為23%。全球新發結核病患者約1000萬，結核病發病率為133/10萬，而中國的新發患者數為88.9萬（約占全球的8.9%），估算結核病發病率為63/10萬[1-3]。早期診斷和及時治療對防控結核有重要意義。實驗室檢查是確診結核病的必要依據，而目前實驗室的常規的痰涂片抗酸檢查法作為篩查方法操作繁瑣，耗時費力，且敏感度和特異性也難以滿足臨床的實際需要[4-6]。因此，臨床急需一種簡易快速，敏感度高，特異性強的新型檢測手段來填補這一需求。隨著分子診斷技術的發展，一種新型的全自動基因檢測系統Xpert MTB/RIF系統于2010年開始被WHO推薦用于MTB及多重耐藥結核菌的快速診斷。本研究將同時采用Xpert MTB/RIF系統、涂片抗酸染色法以及羅氏固體培養法對疑似結核患者的標本進行檢測，以評估Xpert MTB/RIF系統對MTB的診斷價值。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2017年10月～2018年10月在廈門大學附屬第一醫院住院及門診就診懷疑為結核菌感染的疑似患者共580例，其中男性332例，女性248例，留取其痰標本、肺泡灌洗液標本或者尿液標本。

1.2方法? ?所有疑似患者的痰標本、肺泡灌洗液標本及尿液標本都同時采用萋-尼氏抗酸染色法（試劑購于珠海貝索生物技術有限公司），固體培養法（試劑購于珠海貝索生物技術有限公司）和Xpert MTB/RIF系統（美國Cepheid公司）進行結核分枝桿菌的檢測。①萋-尼氏抗酸染色法：參考《痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》對標本進行涂片制備、染色及鏡檢，檢出1條及以上分枝桿菌即為涂片陽性[1]。②固體培養法：參考《分枝桿菌分離培養標準化操作程序及質量保證手冊》將中和離心后的標本混懸液接種于固體培養基并放在孵箱中培養[2]。在第3、7天觀察培養基中菌落的生長狀況，之后每周觀察1次，至少連續30 d以上未有分枝桿菌生長方可報陰性。③Xpert檢測法：標本和前處理液按1：2的比例混勻后靜置15 min以上，待標本中沒有明顯細顆粒存在即可用專用吸管吸取2 ml處理后的樣品液加入到反應盒中。將反應盒放入Xpert檢測系統中完成樣品DNA的自動提取、擴增及檢測，以檢出目標序列為陽性。

1.3統計學分析? 采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，計數資料采用百分比（%）來表示，組間比較采用配對四格表？字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 Xpert MTB/RIF技術與固體培養法陽性結果比較? 疑似患者共580例，固體培養法檢出陽性標本108例，陽性率為18.62%;Xpert MTB/RIF系統檢出陽性標本110例，陽性率為18.97%。Kappa檢驗提示兩種方法診斷結果一致性良好（Kappa=0.932），McNemer檢驗的結果表明兩者的差別無統計學意義（P=0.774），見表1。

2.2 Xpert MTB/RIF技術與抗酸染色法陽性結果比較? 疑似患者共580例，Xpert MTB/RIF系統檢出陽性標本110例，陽性率為18.97%;抗酸染色法檢出陽性標本87例，陽性率為15.00%。Kappa檢驗提示兩種方法診斷結果一致性較好（Kappa=0.848），McNemer檢驗的結果提示兩種方法診斷結果差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

3討論

結核病是一種在世界范圍內廣泛分布的常見傳染病，在中國其發病率約為63/10萬，因此對其防控不容忽視。傳統的涂片抗酸染色法步驟較為繁瑣，耗時較長，對制片質量及染色的效果均有嚴格的要求[1，7]。而且鏡檢需要有經驗的工作人員進行檢測，對鏡檢人員數量及單日閱片量亦有要求。而對于含菌量較少的痰液或者體液標本采用涂片鏡檢法時有可能會出現漏檢現象。而傳統作為金標準的的培養法則耗時更長，對患者來說容易延誤治療[2，8]。隨著分子診斷技術的發展，以實時熒光定量PCR技術為基礎的Xpert MTB/RIF技術被應用到MTB及其耐藥相關基因檢測中。該方法兼具耗時少（約2 h），靈敏度高，操作封閉安全等優點，而且還能同時檢測常見的結核桿菌耐藥基因，因此得到了世界衛生組織的推薦。劉亞芹及劉婷等人以培養法為金標準和Xpert MTB/RIF技術進行比較未發現兩者的陽性結果有顯著差異[3，4]。周洪經[6]等的研究則認為Xpert MTB/RIF技術檢出MTB的陽性率高于培養法及抗酸染色法。

本文對580例疑似結核患者同時采用抗酸染色法、固體培養法和Xpert MTB/RIF技術進行結核分枝桿菌的檢測，結果顯示Xpert 技術檢測MTB的陽性率和固體培養法相比一致性較好，且差異無統計學意義（P>0.05）;和抗酸染色法陽性率相比則更為敏感。與鄒遠嫵及馬秀珍等人的結論較為一致[9，10]。固體培養法常常被作為結核桿菌檢測的金標準，但由于結核桿菌分裂增殖緩慢，所以其在培養基上要觀察到陽性結果需要較長的時間，尤其是標本含菌量少的情況下其所需要的時間更長，這很難滿足患者及臨床醫生的診治需要。而抗酸涂片法作為常規結核的過篩實驗耗時費力，敏感性低，對人員和安全設備有較高的要求，操作也比較繁瑣，且較低的陽性檢出率也一直困擾著大家。從本次研究的結論可以看出，Xpert MTB/RIF系統有著和固體培養法不相上下的陽性檢出率，且整個檢測過程快速安全，可作為臨床快速篩查MTB的一種有效手段，為臨床預防和診治結核提供有效幫助。

參考文獻：

[1]趙雁林，姜廣路.痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊[M].北京：中國協和醫科大學出版社，2009.

[2]趙雁林，王黎霞.分枝桿菌分離培養標準化操作程序及質量保證手冊[M].北京：人民衛生出版社，2013.

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[8]陳子芳，勞海黎，李秀華，等.全自動醫用 PCR 分析系統在肺外結核診斷及利福平耐藥檢測中的應用價值[J].中華結核和呼吸雜志，2016，39（7）：529-533.

[9]鄒遠嫵，劉尚武，朱蕾，等.Xpert MTB/RIF檢測結核分枝桿菌及其耐藥性在結核病輔助診斷中的臨床價值[J].臨床肺科雜志，2015（3）：568-570.

[10]馬秀珍，卓瑪.高海拔地區Xpert MTB/RIF檢測結核分枝桿菌及其耐藥性在結核病輔助診斷中的應用價值[J].廣東微量元素科學，2016，23（9）：34-36.

收稿日期：2018-12-20;修回日期：2018-12-30

編輯/成森