生髓健骨膠囊對酒精性骨質疏松大鼠骨密度、骨礦含量影響的研究

任樹軍 梁彥林 姜磊 任明輝 王墉琦 耿慧春 于雪峰 譚福柱*

1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040 2.黑龍江中醫藥大學研究生院，黑龍江 哈爾濱 150040 3.西安市中醫醫院，陜西 西安 710001 4.南昌大學第四附屬醫院，江西 南昌 330003

骨質疏松癥(osteoporosis，OP)一詞由Pommer[1]于1885年首先提出，1950年以來，許多學者都對其進行了比較精確的闡述。美國學者W.A.Peck認為骨量丟失，骨組織顯微結構及骨脆性改變引起骨折風險增加的疾病稱為OP；日本的井上哲郎認為OP的一個典型特征為骨組織內單位體積的骨量減少。對于OP明確的定義是1993年在香港舉辦的骨質疏松國際研討會上提出的，并得到醫學界大多數專家的認可[2]。在流行病學研究[3-4]中發現，過度飲酒能使骨密度降低，對年輕女性的危害較絕經后老年女性的危害更加顯著，屬于繼發性骨質疏松范疇。酒精濫用和酒精依賴導致的骨壞死、骨質疏松、骨折發生率正逐漸增加，通過研究骨密度(bone mineral density，BMD)、骨礦含量(bone mineral content，BMC)的變化，探討酒精對骨代謝的作用機制，無疑對治療酒精性骨質疏松(alcoholic osteoporosis，AOP)[5]具有更重要的意義。

本研究通過建立酒精性骨質疏松癥大鼠模型，觀察不同時期各組實驗大鼠BMD、BMC的變化，進一步探討生髓健骨膠囊在防治AOP大鼠方面的作用機制，為臨床應用提供實驗理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

選用成年雄性(清潔級)SD大鼠120只，體重(220±20)g，平均約6個月月齡，購自黑龍江中醫藥大學動物實驗中心[SCXK(黑)20170130]。根據隨機法將實驗大鼠分為正常對照組、模型組、碳酸鈣+阿法D3組(西藥對照組)及生髓健骨膠囊組(中藥干預組)，每組各30只，在適宜的環境中分籠適應性喂養1周后，稱大鼠體重。

1.2 實驗方法

正常對照組每天用等量生理鹽水(500 mL/袋，出廠批號：B1708018，四川太平洋藥業有限公司)進行灌胃，上午、下午各1次;模型組每天上午用等量白酒(500 mL/瓶，紅星牌二鍋頭，55°，標準號：GB/T20822，北京紅星股份有限公司生產)灌胃，下午用與正常對照組相同量的生理鹽水灌胃，各1次;西藥對照組每天上午用等量白酒(同模型組)灌胃，下午給予碳酸鈣(500 mg/片，國藥準字：H10980201，吉林萬通藥業集團)+阿法D3[0.25 μg/粒，國藥準字：J20080612，以色列梯瓦制藥工業(TEVA)有限公司(昆明貝克諾頓公司分裝)]用生理鹽水(同正常對照組)配成混懸液灌胃給藥，各1次;中藥干預組每天上午用等量白酒(同模型組)灌胃，下午給予生髓健骨膠囊(0.35 g/粒，批準文號：黑衛藥制字Z20110036，黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院)用生理鹽水(同正常對照組)配成混懸液灌胃給藥，各1次。

各組實驗大鼠均按10 mL/kg容積灌胃給藥，白酒按約含純乙醇4.4 g/(kg·d)計量，共持續給藥16周。實驗期間各組大鼠均給予規定(全價標準)營養飼料，自由進食水。各組實驗大鼠每周末通過稱量體重變化來調整給藥劑量。嚴格遵循動物實驗倫理道德，于造模8、12、16周末，將各組實驗大鼠分別采取頸椎脫臼法處死10只，在無菌操作環境下取出左側股骨，將殘余組織剔除后，用生理鹽水沖洗，再用無菌濕紗布包敷，最后用雙能X線骨密度儀(DEXA)檢測。將股骨上端放置于雙能X線骨密度儀(DEXA)探頭下，用小動物學軟件進行掃描處理，對各組大鼠左側股骨的BMD、BMC進行檢測，最后打印出測定結果。

1.3 主要儀器

采用美國通用(Lunar)公司生產的雙能X線骨密度測量儀(PLODIGY-型)附帶的小動物軟件測定實驗大鼠的骨密度;游標卡尺由桂林廣陸數測股份有限公司生產(精確度0.02 mm、長150 mm)，標準號：GB/T21389-2008。

1.4 統計學方法

實驗數據應用統計軟件SPASS 22.0進行(組間單因素ANOVA)檢驗，行t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠8周末檢測股骨BMD、BMC的結果比較(表1)

組別例數BMD/(g/cm2)BMC/(g/cm2)正常對照組100.272±0.0220.149±0.017模型組100.228±0.027★★0.116±0.008★★西藥對照組100.239±0.025▲0.123±0.018▲中藥干預組100.244±0.021▲▲●0.130±0.019▲▲●F值-12.73327.746P值-<0.001<0.001

注：與正常對照組相比，★P<0.05，★★P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與西藥對照組相比，●P<0.05，●●P<0.01。

2.2 各組大鼠12周末檢測股骨BMD、BMC結果的比較(表2)

組別例數BMD/ (g/cm2)BMC/ (g/cm2)正常對照組100.271±0.0180.148±0.037模型組100.222±0.023★★0.109±0.015★★西藥對照組100.235±0.021▲0.119±0.025▲中藥干預組10 0.253±0.017▲▲●0.135±0.026▲▲●F值-29.94017.164P值- <0.001<0.001

注：與正常對照組相比，★P<0.05，★★P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與西藥對照組相比，●P<0.05，●●P<0.01。

2.3 各組大鼠16周末檢測股骨BMD、BMC結果的比較(表3)

組別例數BMD/(g/cm2)BMC/(g/cm2)正常對照組100.270±0.0210.147±0.033模型組100.206±0.026★★0.098±0.012★★西藥對照組100.230±0.024▲0.120±0.021▲中藥干預組100.259±0.020▲▲●0.144±0.022▲▲●F值-15.9909.754P值-<0.001<0.001

注：與正常對照組相比，★P<0.05，★★P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與西藥對照組相比，●P<0.05，●●P<0.01。

2.4 造模干預8、12、16周末骨密度指標檢測結果

模型組BMD、BMC與對照組相比均有不同程度的下降，且差異有統計學意義(P<0.01)，結果表明乙醇能夠引起實驗大鼠骨量減少，BMD、BMC下降；中藥干預組、西藥對照組的BMD、BMC分別與模型組相比明顯升高(P<0.01、P<0.05)，且中藥干預組優于西藥對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。

BMD能直接反應骨礦物質的變化，與BMC息息相關。BMD降低，骨強度減低，骨脆性增加，骨折風險升高。因此，BMD是評估臨床療效的主要依據，也是骨質疏松危險性的重要標志。當骨量丟失超過5%，即可被骨密度儀(雙能X線)檢測出。

3 討論

3.1 酒精性骨質疏松(AOP)概述

AOP目前是一種發病機制尚不清楚的骨代謝疾病。現代研究表明長期過量的酒精攝入將通過多途徑影響骨代謝平衡，使成骨減少、破骨增加，導致骨量減少。過量飲酒會帶來以下影響[5]：①對鈣調節激素[1,25(OH)2D3、降鈣素及甲狀旁腺激素]的影響；②對腎上腺皮質類固醇激素的影響；③對性腺功能產生的影響；④對骨細胞的影響：抑制成骨細胞，促進破骨細胞；⑤對肝功能的影響：使其合成蛋白能力下降、合成IGF-1不足、增加其多種激素代謝酶的活性；⑥對營養的影響。出現不同部位、不同程度的骨骼肌肉或關節疼痛、大多數伴有乏力、軀體各方向活動受限或雙下肢抽筋等是AOP主要的臨床表現，但多無關節的紅腫、變形[6-7]。AOP在祖國醫學中并無此病名，應屬于中醫學中“骨痿” “骨枯” “骨極”等病的范疇[8-10]。此病多為患者素體腎氣虧虛，偏嗜飲酒發為本病。酒乃熟谷之液、水谷之精。偏嗜飲酒，酒邪乃濕熱之邪，易損傷中焦脾胃。中焦失于運化，濕熱內生，蘊久化火，火曰炎上，可導致上焦心肝火旺。久則傷腎，使腎氣陰虧虛，氣機不暢，血行失運，血受熱煎則為瘀[10]。血瘀而四肢百骸失于濡養，瘀久化熱熏灼骨髓，則骨枯髓減，發為骨痿[11-12]。酒精在體內影響氣血精液、臟腑經絡的生理功能，使肝脾腎俱損，筋肉骨骼失于濡養。故AOP病位在骨，與肝腎脾等臟生理功能失調密切相關。其病因包括內因和外因，內因為素體腎氣虧虛，外因為過量飲酒。其主要病機為腎虛血瘀、氣陰虧虛[13]。

3.2 生髓健骨膠囊對BMD、BMC的影響

生髓健骨膠囊為臨床治療AOP的經驗方[14,18]，具有補腎壯骨、健脾益氣、活血通絡的作用，正適合AOP的病因病機。現代研究表明方中鹿角膠、龜板、龍骨、牡蠣富含多種微量元素、氨基酸等，是骨組織合成所必需的物質；用中藥葛根解酒已有千年歷史，而且葛根素能夠抑制骨髓基質干細胞向脂肪細胞分化，保持其成骨分化的能力[15]；黃芪、丹參、當歸具有抑制血小板聚集并改善微循環的作用；白術、熟地能提高機體清除自由基的能力；郁金能減輕高血脂，對肝有保護作用；牛膝用于活血通經以鎮痛，可增大骨小梁密度，減小骨髓腔面積。前期研究證實[16]其能下調骨組織中PPARγ2mRNA基因的表達，抑制MSCs的成脂分化，促進成骨細胞分化，防治骨量丟失。上調AOP大鼠小腸粘膜VDRmRNA的表達[17]，促進腸鈣、磷的吸收，維持鈣、磷的平衡；補腎健脾益氣法可以提高AOP大鼠BMD和BMC含量，能夠抑制骨礦物質丟失[18]，明顯改善AOP大鼠的癥狀，但其確切作用機制仍需進一步深入研究。

實驗結果表明，模型組BMD、BMC顯著降低，通過中藥或西藥干預后BMD、BMC均有不同程度的升高，且中藥干預組的療效優于西藥對照組。本研究表明生髓健骨膠囊可以提高AOP大鼠BMD，增加BMC，抑制骨礦物質的丟失，增強骨的強度，從而預防骨折的發生，值得臨床借鑒應用。