卵巢癌患者血清HK10、DJ-1的表達(dá)及意義

任曉兵，李陽(yáng)，陳廣福，朱彤，白筱，馮靜

(1西安高新醫(yī)院，西安 710075；2西北婦女兒童醫(yī)院)

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病隱匿，早期無(wú)特異臨床癥狀和體征，多數(shù)患者確診時(shí)已近中晚期，手術(shù)切除和化療后患者5年生存率僅20%～30%[1,2]。人激肽釋放酶-10(HK-10)為人激肽釋放酶家族成員，通過(guò)與細(xì)胞外基質(zhì)、生長(zhǎng)因子等結(jié)合而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡、血管生長(zhǎng)及腫瘤的發(fā)生發(fā)展[3]，研究[4]顯示，HK-10在卵巢癌患者中表達(dá)上調(diào)，且表達(dá)水平越高，患者預(yù)后越差。DJ-1蛋白由PARK7基因編碼，在人體中具有促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和抑制細(xì)胞凋亡等功能。研究[5,6]發(fā)現(xiàn)，DJ-1與肺癌、胃癌等惡性腫瘤的發(fā)病密切相關(guān)。關(guān)于HK-10、DJ-1與卵巢癌發(fā)病的關(guān)系，目前相關(guān)研究證據(jù)尚不足。2016年8月～2018年8月，我們檢測(cè)了卵巢癌患者血清中HK-10、DJ-1水平，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年8月～2018年8月西安高新醫(yī)院住院手術(shù)治療的卵巢癌患者97例(卵巢癌組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①組織標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)活檢確診為卵巢癌；②既往未接受過(guò)手術(shù)切除，或放、化療治療者；③Karnofsky(KPS)評(píng)分超過(guò)60分；④患者及家屬知情同意，并在知情同意書(shū)上簽字；⑤符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期及哺乳期婦女；②心臟功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④急、慢性感染性疾病患者；⑤自身免疫性疾病及凝血功能障礙者；⑥其他系統(tǒng)惡性腫瘤患者。患者年齡37～78(57.28±5.17)歲；根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)手術(shù)-病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，Ⅰ～Ⅱ期56例，Ⅲ～Ⅳ期41例；腫瘤直徑2～6(4.12±1.26)cm；病理分型：黏液性腺癌33例，漿液性腺癌49例，內(nèi)膜樣腺癌15例；腫瘤分化程度：低分化42例，中、高分化55例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例。同期隨機(jī)選取85例經(jīng)病理活檢證實(shí)為良性卵巢腫瘤患者為良性卵巢腫瘤組，年齡32～70(55.97±6.20)歲。50例其他良性婦科疾病患者為對(duì)照組，年齡31～76(58.64±5.73)歲，盆腔炎23例，子宮內(nèi)膜炎17例，宮頸糜爛10例。三組年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 血清HK-10、DJ-1檢測(cè) 入院后抽取各組空腹肘靜脈血5 mL，室溫下靜置1 h，3 000 r/min離心5 min，離心半徑9 cm，留取血清標(biāo)本置于-70 ℃冰箱中保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清HK-10、DJ-1水平，其中HK-10檢測(cè)試劑盒由北京方程嘉鴻科技有限公司提供，DJ-1檢測(cè)試劑盒由武漢博士康生物工程有限公司提供。使用美國(guó)Thermo公司生產(chǎn)的酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm處的光密度(OD450)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出對(duì)應(yīng)的濃度值。整個(gè)操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 三組血清HK-10、DJ-1水平比較 三組血清HK-10、DJ-1水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F分別為12.368、16.813，P均<0.05)，兩兩比較，卵巢癌組、良性卵巢腫瘤組血清HK-10、DJ-1水平高于對(duì)照組，且卵巢癌組血清HK-10、DJ-1水平高于良性卵巢腫瘤組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組血清HK-10、DJ-1水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與良性卵巢腫瘤組比較，#P<0.05。

2.2 卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平與臨床病理特征的關(guān)系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤細(xì)胞低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平高于Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)；不同年齡、腫瘤直徑、病理分型卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 卵巢癌患者血清HK-10與DJ-1的相關(guān)性 Pearson積矩相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢癌患者血清HK-10與DJ-1呈正相關(guān)(r=0.728，P<0.05)。

2.4 血清HK-10、DJ-1對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值 繪制的血清HK-10、DJ-1診斷卵巢癌的ROC曲線見(jiàn)圖1。血清HK-10、DJ-1聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值最高，AUC為0.944(95%CI：0.889～0.992)，靈敏度、特異度分別為0.93、0.97，準(zhǔn)確度為0.96。見(jiàn)表3。

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，報(bào)道[7]顯示，美國(guó)是卵巢癌高發(fā)國(guó)家，僅北美地區(qū)，2013年卵巢癌新發(fā)病例即高達(dá)2萬(wàn)例，死亡病例1.4萬(wàn)例。我國(guó)屬于卵巢癌高發(fā)國(guó)家，近年發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)。血清糖類抗原125(CA125)是目前臨床診斷卵巢癌的常見(jiàn)腫瘤標(biāo)志物，但研究發(fā)現(xiàn)，部分卵巢癌患者CA125無(wú)明顯表達(dá)，而在婦科良性疾病如盆腔炎、子宮內(nèi)膜異位癥等患者血液中可顯著表達(dá)，說(shuō)明CA125的靈敏度和特異度較差[8～10]。尋找更為靈敏且能早期診斷卵巢癌，并判斷病情嚴(yán)重程度的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)臨床制定針對(duì)性治療方案有重要意義。

表2 卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平與臨床病理特征的關(guān)系

圖1 血清HK-10、DJ-1診斷卵巢癌的ROC曲線表3 血清HK-10、DJ-1對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值

指標(biāo)AUC95%CI截?cái)嘀奠`敏度特異度準(zhǔn)確度HK-100.8420.768～0.9151.220.830.790.82DJ-10.8540.772～0.93610.790.850.820.87HK-10+DJ-10.9440.889～0.992-0.930.970.96

HK-10是由KLK10基因編碼相對(duì)分子質(zhì)量為30 kD的分泌型絲氨酸蛋白酶，含有276個(gè)氨基酸，在細(xì)胞外形成胞外生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子或細(xì)胞表面受體等介導(dǎo)細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡等過(guò)程，正常細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，HK-10主要在母乳、腦脊液等生物學(xué)液體中表達(dá)，而在心臟、胸腺等器官中表達(dá)微乎其微，在骨骼肌、肝腎等臟器中不表達(dá)[11]。研究[12]表明，HK-10表達(dá)異常參與了乳腺癌等內(nèi)分泌惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，并與惡性腫瘤細(xì)胞的脫落、遷移侵襲過(guò)程密切相關(guān)，其主要機(jī)制可能與雌激素受體、孕激素受體等類固醇激素受體復(fù)合物及其同源激素反應(yīng)元件通過(guò)相互作用而促進(jìn)或抑制人組織激肽釋放酶基因10(KLK10)的表達(dá)有關(guān)。Grzmil等[13]發(fā)現(xiàn)，HK-10在前列腺癌患者中表達(dá)上調(diào)，水平越高，預(yù)后越差。馬睿等[11]證實(shí)，HK-10在卵巢癌組織中的表達(dá)明顯高于正常卵巢組織，并由此推斷其可作為卵巢癌的診斷標(biāo)志物。DJ-1基因位于染色體1P36，長(zhǎng)度為24 kb，DJ-1蛋白單體在人體腎臟、胰腺、肝臟、肌肉組織等不同組織中廣泛表達(dá)，且其二聚體形式在細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄、相互轉(zhuǎn)化、氧化應(yīng)激等生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用[14]。Tabata等[15]研究顯示，DJ-1蛋白在膽管癌組織中表達(dá)升高，且其水平越高，預(yù)后越差。李海等[16]對(duì)甲狀腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，DJ-1參與了各型甲狀腺癌的發(fā)病過(guò)程，但與其預(yù)后無(wú)明顯關(guān)系。Shu等[17]證實(shí)，子宮內(nèi)膜癌組織中DJ-1表達(dá)較正常子宮內(nèi)膜組織明顯升高，且與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。農(nóng)雪萍等[18]發(fā)現(xiàn)，DJ-1在非小細(xì)胞肺癌組織中異常表達(dá)，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺癌組織中DJ-1表達(dá)水平更高，并由此推斷DJ-1可作為評(píng)估肺鱗癌預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，卵巢癌及良性卵巢腫瘤患者血清HK-10、DJ-1水平高于對(duì)照，且卵巢癌患者高于良性卵巢腫瘤患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示卵巢良、惡性腫瘤中HK-10、DJ-1表達(dá)上調(diào)存在差別，二者可能參與了卵巢癌發(fā)病過(guò)程，與有關(guān)研究結(jié)果相似。馬睿等[11]發(fā)現(xiàn)，HK-10在卵巢癌患者中表達(dá)明顯高于卵巢良性疾病，且經(jīng)過(guò)TP方案化療后顯著降低。王偉明等[9]證實(shí)，DJ-1在卵巢良、惡性腫瘤中表達(dá)有顯著差別，惡性腫瘤患者表達(dá)明顯升高。此外，本研究結(jié)果顯示，血清HK-10、DJ-1與FIGO分期、腫瘤細(xì)胞的分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，F(xiàn)IGO臨床分期越高、腫瘤分化程度越差及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平越高，提示HK-10、DJ-參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程，且與預(yù)后密切相關(guān)，二者表達(dá)水平越高，預(yù)后越差。因此，早期檢測(cè)血清HK-10、DJ-1有望作為臨床評(píng)估卵巢癌患者病情嚴(yán)重程度的重要標(biāo)志物。

Pearson積矩相關(guān)分析結(jié)果顯示，卵巢癌患者血清HK-10與DJ-1呈正相關(guān)，兩種標(biāo)志物可能通過(guò)表達(dá)上調(diào)發(fā)揮協(xié)同作用，參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，通過(guò)信號(hào)通路的交叉，HK-10、DJ-1共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。本研究進(jìn)一步評(píng)估血清HK-10、DJ-1對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示HK-10、DJ-1診斷卵巢癌有較好的診斷價(jià)值，且聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度可達(dá)0.93，特異度可達(dá)0.97，準(zhǔn)確度可達(dá)0.96，提示早期聯(lián)合檢測(cè)可最大化減少漏診率和誤診率，提高早期診斷卵巢癌的準(zhǔn)確率。

綜上所述，卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平升高，并與癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān);二者聯(lián)合檢測(cè)有助于卵巢癌的早期診斷。