CD4+T輔助細胞及細胞因子在兒童肺炎支原體肺炎中的表達

李芹 張蕾 王亞坤 田利遠

(河北醫科大學附屬河北省兒童醫院呼吸科，河北 石家莊 050031)

肺炎支原體肺炎(mycoplasmal pneumouniae pneumounia，MPP)是小兒常見的大葉性肺炎，可并發多系統、多器官功能損害。既往研究，其發病機制復雜，但近年來免疫機制成為目前醫學界廣泛關注的熱門課題。國內、國外學者均提出可能由于CD4+T輔助細胞或CD8+T抑制細胞之間的紊亂引起了機體的免疫抑制[1-2]。本實驗就CD4+T輔助細胞及其細胞因子進一步探討MPP的免疫機制，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月至2017年10月在我院呼吸科住院期間確診為MPP患兒30例為實驗組，其中男17例，女13例，平均年齡(5.6±2.9)歲；細菌性肺炎患兒30例為普通組，男16例，女14例，平均年齡(6.1±3.5)歲；肺炎支原體肺炎診斷標準參照第8版《諸福棠實用兒科學》。選取同期我院健康體檢兒童30名為對照組。實驗組、普通組與對照組患兒年齡及性別差異無統計學意義(P均>0．05)。

1.2 方法 所有患兒在治療前及治療后(加用甲潑尼龍靜滴5 d)取靜脈血2 mL；于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，標本靜置20 min后，以3 000 r/min離心5 min，取上清液均置-80 ℃冰箱保存待檢；采用梯度離心分離單個核細胞，采用貝克曼流式細胞儀及配套試劑盒檢測T淋巴細胞亞群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)；通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清INF-γ/IL-4、INF-γ、IL-4、IgE含量。ELISA試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司。

2 結 果

2.1 T淋巴細胞亞群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)水平 與治療前比較，實驗組治療后血清CD4+/CD8+、CD4+水平均升高，CD8+水平下降，統計學比較，差異顯著(P<0.05)；治療前，實驗組CD4+/CD8+、CD4+水平均低于對照組及普通組，CD8+水平高于對照組及普通組，統計學比較差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1 各組患兒血清CD4+/CD8+、CD4+和CD8+水平比較

注：與治療前比較：*P<0.05；與對照組、普通組比較：△P<0.05；

2.2 血清INF-γ/IL-4、INF-γ、IL-4和IgE含量 治療前，實驗組、普通組患兒血清INF-γ 、IL-4水平明顯增高，分別與對照組比較，差異顯著(P<0.05)，INF-γ/IL-4水平下降，與對照組比較差異顯著(P<0.05)；治療前，實驗組INF-γ 、IL-4水平較普通組升高，INF-γ/IL-4水平下降，差異有統計學意義(P<0.05)；治療后實驗組血清INF-γ 、IL-4水平較治療前均下降，INF-γ/IL-4水平升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。治療前，實驗組血清IgE(380.5±40.6 u/mL)水平明顯升高，與對照組(75.8±18.3 u/mL)、普通組(76.5±19.8 u/mL)比較，統計學差異顯著(P<0.05)，治療后降至正常水平，與對照組及普通組無差異(P>0.05)。

表2 各組患兒血清INF-γ/IL-4、INF-γ和IL-4水平比較

注：治療前，與對照組比較：aP<0.05，與普通組比較：bP<0.05；實驗組治療后與治療前比較cP<0.05。

3 討 論

目前兒童肺炎支原體肺炎最熱議的發病機制是免疫機制，主要包括免疫抑制和自身免疫這兩種學說。在MPP患兒的免疫反應中，肺炎支原體侵入宿主后可誘導T、B淋巴細胞增殖，破壞二者亞群的比例，造成淋巴細胞的多克隆活化，引起Th2型細胞免疫占主要優勢，而Th1型細胞免疫則會受抑制，機體無法發揮正常的免疫功能，進一步引起機體免疫抑制[2]。臨床工作中發現，對于存在嚴重合并癥的MPP患兒，應用糖皮質激素對控制病情、縮短療程、改善預后有重要作用，說明通過調節免疫可取得良好療效[3]。

T細胞作為機體細胞免疫的主要參與者，在機體感染后可成熟分化為不同亞群，繼而分泌細胞因子來影響疾病發生、發展和預后[4]。根據表面標志可將成熟T淋巴細胞分為CD4+T細胞和CD8+T細胞2個主要亞群，分別行使不同的功能。CD4+T細胞主要為調節T細胞，包括Th1、Th2等，能促進其他免疫細胞包括B細胞、T細胞等增殖分化，活化后的T細胞還可分泌多種細胞因子參與調節免疫反應。CD8+T細胞主要為殺傷性T細胞，可直接通過識別細胞表面MHC-I類分子直接殺傷靶細胞，發揮其免疫效應。研究顯示，難治性肺炎支原體肺炎患兒普遍存在機體免疫功能的紊亂，表現為細胞免疫功能下降，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯降低，CD8+水平升高[5]。國外研究也表明，MPP患兒外周血中CD4+T和CD8+T比例失衡，機體細胞免疫功能失調，可能與肺炎支原體感染相關[6]。本實驗得到相同的結果，治療前實驗組CD4+/CD8+、CD4+水平明顯下降，CD8+水平上升，給予甲潑尼龍治療后血清CD4+/CD8+、CD4+水平升高，CD8+水平下降至正常，進一步提示肺炎支原體感染后存在CD4+/CD8+比值失衡，而糖皮質激素可能發揮了免疫抑制作用。據報道指出，糖皮質激素可以通過細胞膜，與細胞質內的糖皮質激素受體結合，形成激素-激素受體復合體，進入細胞核內，通過抑制趨化因子、細胞因子、細胞黏附因子及其這些因子受體表達等多種途徑，進一步調節T淋巴細胞功能而起到治療作用[7]。

CD4+T細胞根據其產生的細胞因子和生物學效應分為兩種，即Th1型與Th2 型。研究發現，MPP患兒存在Th1/Th2比例失衡，其中以Th2細胞占優勢的免疫失衡在MPP致病過程中起主要作用，而Th1細胞則是在抵抗MP感染和抑制炎癥反應中發揮作用[8-10]。Th1細胞分泌INF-γ、IL-2、IL-12、TNF-β等促炎因子，介導細胞免疫應答，增強殺傷炎癥細胞的細胞毒性作用。Th2細胞產生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細胞因子，促進抗體的產生，介導體液免疫應答。目前，一般用INF-γ活性反映Th1細胞功能，IL-4活性則代表Th2功能，通過測定細胞因子變化，間接反映機體的免疫狀態。國外研究發現，在MP肺炎患者的肺泡灌洗液中IL-4明顯上升，而INF-γ/IL-4明顯下降，提示MP感染后主要為Th2 樣細胞因子反應[11]。本實驗結果顯示：治療前，實驗組患兒血清INF-γ 、IL-4水平較普通組升高，INF-γ/IL-4水平下降，而治療后IL-4水平明顯下降，INF-γ/IL-4水平升至正常水平；提示肺炎支原體感染后，存在以Th2細胞占主導優勢的免疫失衡，而應用糖皮質激素治療后，IL-4水平迅速降至正常，恢復Th1/Th2平衡狀態；與上述國外報道一致。

另外，Th2細胞分泌的IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細胞因子，能夠增強B細胞介導的體液免疫應答，從而產生大量的IgE，并刺激嗜酸細胞、肥大細胞等產生一系列炎性介質，激發變態反應。本實驗結果顯示，肺炎支原體肺炎患兒血清總IgE水平異常升高，應用糖皮質激素抑制免疫反應后迅速降至正常，從而再次證明了肺炎支原體感染后存在T淋巴細胞免疫失衡。國內研究指出，肺炎支原體誘導細胞介導的免疫反應越強及細胞因子產生的越多，導致的臨床癥狀及肺損害也就越重[12-13]。

綜上所述，肺炎支原體肺炎發病機制與CD4+T輔助細胞水平下降以及Th2細胞占主導優勢的免疫失衡有顯著相關性，但細胞因子INF-γ、IL-4是如何調控的，需要我們進一步從基因水平探討、研究，從而更好地指導臨床診治，阻止疾病進展，避免發生嚴重并發癥及遺留后遺癥。