肺癌組織中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表達情況及與臨床特征的關系

高蕓菲，楊婧，孔曼

首都醫科大學附屬北京潞河醫院腫瘤科，北京101149

對肺癌細胞的細胞生物學改變過程進行探究，可以發現腫瘤調控相關因子或蛋白的波動能夠通過多種病理途徑促進肺泡上皮細胞的病變，從而提高肺癌的發生風險[1-2]。P65蛋白是核轉錄因子信號通路的重要效應因子，通過促進腫瘤細胞的持續性DNA擴增，增加肺泡上皮細胞細胞核DNA異常分裂的風險[3]；細胞角質蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）的表達，能夠通過提高腫瘤細胞的變形能力，促進腫瘤細胞的浸潤和侵襲，進而促進肺癌的發生和轉移[4]；波形蛋白（vimentin）的表達，通過提高腫瘤細胞對基底膜組織的浸潤能力，增加了腫瘤細胞的轉移能力，進而促進肺癌的進展[5]。為了揭示P65、CYFRA21-1、vimentin的表達與肺癌的關系，為臨床上肺癌的診療提供理論基礎，本研究對肺癌患者P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表達情況及與肺癌患者臨床特征的關系進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2016年1月至2017年1月首都醫科大學附屬北京潞河醫院收治的肺癌患者的病歷資料。納入標準：①臨床資料完整；②經組織學或細胞學檢查確診為原發性肺癌；③術前未接受放化療。排除標準：①伴有心、肝、腎等主要臟器功能不全或急慢性炎癥；②合并其他部位惡性腫瘤；③妊娠期和哺乳期女性；④伴有免疫系統疾病。根據納入和排除標準，本研究共納入60例肺癌患者，其中男性40例，女性20例；年齡為36～79歲，平均年齡為（55.56±9.12）歲；腺癌28例，鱗癌20例，小細胞肺癌10例，未定性肺癌2例；按國際抗癌聯盟（Union for International Cancer Control，UICC）分期系統[6]進行TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期8例，Ⅲ期15例，Ⅳ期32例；低分化31例，中分化20例，高分化9例。收集所有患者的肺癌組織標本及其對應的癌旁組織標本各60例。

1.2 檢測方法

采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（streptavidin-perosidase，SP）檢測肺癌組織和癌旁組織中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表達情況。石蠟包埋后，采用連續性病理切片，脫蠟至水后采用H2O2室溫下孵育10 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3～5 min，8%的蛋白粉封閉液封閉2 h，棄去封閉液后加入一抗[兔來源，1∶（1000～1500）]，4℃冰箱過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次 3～5 min，加入二抗[鼠來源，1∶（400～500）]，室溫孵育 20～30 min，磷酸鹽緩沖液沖洗 3次，每次3～5 min，加入辣根酶或堿性磷酸酶的標志物，室溫孵育10 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次3～5 min，滴加顯色劑（DAB），復染，脫水，封片。

1.3 判定標準

以細胞膜內出現棕黃色顆粒為陽性染色，綜合陽性細胞占腫瘤細胞的比例和著色強度進行半定量判定。P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白表達著色強度判定標準：不著色為0分；淺黃色為1分；黃棕色為2分；棕褐色為3分。陽性細胞占腫瘤細胞的比例判定標準：選擇5～10個高倍視野，計算1000個腫瘤細胞中陽性細胞所占比例，陽性細胞所占比例＜5%為0分；5%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；＞75%為4分。兩種評分相加，最終結果0～1分為陰性（-）；2分為弱陽性（+）；3～4分為強陽性（++）；5～7分為極強陽性（+++）；本研究將強陽性和極強陽性歸為陽性表達，陰性和弱陽性歸為陰性表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件對數據進行分析。計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；等級資料比較采用Wilcoxon秩和檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白表達情況的比較

肺癌組織和癌旁組織中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）（表1）；肺癌組織中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）（表2）。

表1 不同組織中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白表達情況的比較

表2 不同組織中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白陽性表達情況的比較

2.2 肺癌組織中P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白表達與肺癌患者臨床特征的關系

不同臨床分期、淋巴結轉移情況肺癌患者肺癌組織中P65蛋白表達情況比較，差異均有統計學意義（Z=-3.411、-3.791，P＜0.01）。不同臨床分期肺癌患者肺癌組織中CYFRA21-1蛋白表達情況比較，差異有統計學意義（Z=-4.07，P＜0.01）；但不同淋巴結轉移情況肺癌患者肺癌組織中CYFRA21-1蛋白表達情況比較，差異無統計學意義（Z=-0.415，P=0.678）。不同臨床分期、淋巴結轉移情況肺癌患者肺癌組織中vimentin蛋白表達情況比較，差異均有統計學意義（Z=-4.024、-3.427，P＜0.01）（表3）。臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的肺癌患者肺癌組織中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白陽性表達率均明顯高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者，差異均有統計學意義（χ2=6.597、16.362、9.467，P＜0.01）。有淋巴結轉移的肺癌患者肺癌組織中P65蛋白和vimentin蛋白陽性表達率均高于無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（χ2=6.686、9.467，P＜0.05）；不同淋巴結轉移情況肺癌患者肺癌組織中CYFRA21-1蛋白陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）（表4）。

表3 不同臨床特征肺癌患者肺癌組織中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白的表達情況[ n=60， n（%）]*

表4 不同臨床特征肺癌患者肺癌組織中 P65、CYFRA21- 1、vimentin蛋白的陽性表達情況[ n=60， n（%）]

3 討論

長期吸煙、家族性肺癌病史等，均能夠促進肺泡上皮細胞的細胞核異常病變，增加肺癌的發生風險，尤其是年齡大于65歲的長期吸煙男性人群，其肺癌的發生風險更高[7]。長期的隨訪觀察發現，肺癌患者接受綜合性治療方案治療后，5年生存率不足40%，遠期復發率和轉移率均明顯增高[8]。免疫靶向性治療在肺癌的輔助治療過程中發揮著重要作用。本研究針對肺癌組織中P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的表達情況及其與肺癌患者臨床特征的關系進行探討，旨在為肺癌患者的血清學病情評估提供參考，為肺癌患者的免疫靶向性治療提供作用靶點。

P65蛋白通過對糖蛋白末端進行磷酸化修飾，可以促進腫瘤細胞內核因子-κB（nuclear factorkappa B，NF-κB）信號通路的激活，提高腫瘤細胞DNA的復制速度[9]；CYFRA21-1是腫瘤細胞的骨架成分，其能夠增加腫瘤細胞紡錘體異常分裂的風險[10-11]；vimentin作為細胞間質成分蛋白，能夠促進腫瘤細胞間質成分的分解，降低上皮細胞間的黏附能力，促進腫瘤細胞的轉移和擴散[12]。本研究結果顯示，肺癌組織中P65、CYFRA21-1的陽性表達率均明顯高于癌旁組織（P＜0.01），提示P65、CYFRA21-1的陽性表達均能夠促進肺癌的發生。結合相關文獻，P65、CYFRA21-1對肺癌發生的促進作用有以下幾點[13]：①P65陽性表達能夠導致腫瘤細胞內NF-κB信號通路的激活，造成局部腫瘤微環境的改變，增加了細胞的畸變風險；②CYFRA21-1表達水平的升高，能夠促進腫瘤細胞形態學的改變，增加腫瘤細胞的異型性，提高腫瘤細胞對正常肺組織的浸潤能力。段新春等[14]研究表明，相對于癌旁肺部組織，肺癌組織中CYFRA21-1蛋白的陽性表達率明顯增高。在探討P65、CYFRA21-1的表達與肺癌患者臨床特征的關系中，可以發現在臨床分期較晚或發生淋巴結轉移的患者中，P65的陽性表達率較高，而CYFRA21-1的表達與肺癌患者的臨床分期也有密切的關系，提示P65、CYFRA21-1的表達與肺癌患者的臨床特征密切相關。在探討vimentin的表達與肺癌患者關系的過程中發現，相對于癌旁肺部組織，肺癌組織中vimentin的陽性表達率明顯增高，同時在臨床分期較晚、有淋巴結轉移的患者中，vimentin的表達水平進一步上升[15]。其臨床意義在于臨床上可以通過檢測vimentin等標志物水平，進而評估肺癌患者的疾病進展情況。

綜上所述，在肺癌患者中，P65、CYFRA21-1、vimentin蛋白的陽性表達率較高，同時P65、CYFRA21-1及vimentin的陽性表達情況與肺癌患者的臨床分期、淋巴結轉移情況有關。但本次研究缺乏對于P65、CYFRA21-1及vimentin的表達與肺癌患者臨床預后的關系分析，故仍存在一定的局限性。