急性腦血管病患者ApoE基因多態性臨床分布特征及與血脂水平的相關性研究*

劉婷婷，史海峰，劉 靜

(北部戰區總醫院檢驗醫學中心，沈陽 110016)

急性腦血管病是一種起病急驟的腦部血管循環障礙性疾病，按其臨床表現及病理改變可以表現為短暫缺血性發作(transient ischemic attack，TIA)，腦血管血栓形成或血管栓塞致缺血性腦梗死，腦血管破裂產生腦出血。經研究表明，急性腦血管病的發病率隨年齡增加而增加，其發病還與環境、飲食和遺傳等因素相關，脂質代謝異常是重要的危險因素。載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因，是負責產生多態性蛋白載脂蛋白E的基因，參與脂蛋白的轉化和代謝過程，其基因多態性決定血脂水平[1-3]。ApoE基因位于19號染色體，主要有3種表現型E2，E3和E4，6種基因型ε3/ε3，ε2/ε2，ε4/ε4，ε2/ε3，ε2/ε4和ε3/ε4[4-6]。目前關于ApoE基因與腦血管疾病的研究相對較少，本研究通過收集北部戰區總醫院12個月311例急性腦血管病患者，采用焦磷酸測序技術檢測ApoE基因，旨在探討ApoE基因多態性在急性腦血管患者中的臨床分布特征，及其與血脂水平的相關性，為早期發現、預防和治療急性腦血管疾病提供依據。

1材料與方法

1.1 研究對象 本次研究共收集2017年3月～2018年2月北部戰區總醫院就診并接受ApoE基因多態性檢測的急性腦血管病患者的EDTA-K2抗凝靜脈血311份，采用焦磷酸測序法對ApoE基因的多態性位點進行分析。患者年齡在30～83歲，男性207例(66.6%)，女性104例(33.4%)。根據年齡將急性腦血管病患者分為三組：青年組(<45歲)27例(8.7%)、中年組(45～59歲)108例(34.7%)和老年組(≥60歲)176例(56.6%)。并根據臨床診斷將患者分為腦梗死組196例(63.0%)，腦出血組92例(29.6%)和TIA組23例(7.4%)。納入標準：符合中國腦血管病防治指南診斷標準，所有急性腦血管病患者均未服用他汀類或其它降脂藥物治療。排除標準：診斷不明確或未區分腦梗死、腦出血和TIA。本研究經過北部戰區總醫院倫理委員會批準，所有納入患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑 DNA提取試劑盒及測序反應通用試劑盒均購自長沙三濟生物科技有限公司，焦磷酸測序儀購自德國凱瑞，型號為PyroMark Q24 Vacuum workstation。全自動生化分析儀購自美國貝克曼庫爾特，型號為AU5800。

1.3 方法

1.3.1 ApoE基因多態性檢測：采集EDTA-K2抗凝的受檢者肘靜脈血2 ml，采用血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。采用測序反應通用試劑盒將雙鏈DNA樣本變性成單鏈DNA，置于Qiagen PyroMark Q24焦磷酸測序儀中檢測。

1.3.2 血脂測定：所有檢測對象早晨空腹采集靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min后取上清于全自動生化分析儀，檢測樣本三酰甘油(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)濃度。

2結果

2.1 急性腦血管病患者ApoE基因多態性的分布 見表1。ApoE不同基因型在急性腦血管病患者中的分布差異有統計學意義(χ2=785.95，P=0.000)，其中以ε3/ε3野生基因型分布頻率最高，占69.1%，其次為雜合突變型ε2/ε3和ε3/ε4，分別為12.9%和15.1%，純合突變型ε2/ε2和ε4/ε4較為少見，占0.3%和1.0%。ApoE表現型在急性腦血管病患者中的分布差異也具有統計學意義(χ2=294.32，P=0.000)，以E3居多，占70.7%，E2與E4在急性腦血管病患者中分布相差不多，分別占13.2%和16.1%。

2.2 急性腦血管病患者ApoE基因多態性在不同性別中的分布 見表1。根據性別對納入的急性腦血管病患者分組。急性腦血管病患者ApoE基因型在男女組間的分布差異無統計學意義(χ2=2.31，P=0.81)。此外，急性腦血管病患者ApoE表現型在男女組間的分布差異無統計學意義(χ2=0.37，P=0.83)。可見，急性腦血管病患者ApoE基因多態性的分布可能與性別無關。

表1 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型在不同性別中的分布[n(%)]

2.3 急性腦血管病患者ApoE基因多態性在不同年齡中的分布 見表2。根據年齡將急性腦血管病患者分為三組：青年組(<45歲)、中年組(45～59歲)和老年組(≥60歲)。急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型在各年齡組間的分布差異無統計學意義(χ2=5.08，P=0.89；χ2=3.30，P=0.51)。急性腦血管病患者ApoE基因多態性分布可能與年齡無關。

表2 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型在不同年齡中的分布[n(%)]

2.4 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型在不同臨床診斷中的分布 見表3。在三組患者中的分布特征，急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型在不同臨床診斷中的分布差異無統計學意義(χ2=4.54，P=0.92；χ2=0.71，P=0.95)。急性腦血管病患者ApoE基因多態性的分布可能與其臨床診斷無關。

表3 急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型在不同臨床診斷中的分布[n(%)]

2.5 不同ApoE基因型急性腦血管病患者血脂水平 見表4。不同ApoE基因型的急性腦血管病患者在TC，TG，HDL-C及LDL-C濃度水平上的差異均具有統計學意義(均P<0.05)。ε4/ε4純合突變基因型的急性腦血管病患者其TG，TC及LDL-C濃度水平顯著高于其他基因型急性腦血管病患者，而HDL-C濃度水平低于其他基因型急性腦血管病患者。ε4/ε4基因型可能與血脂濃度水平密切相關。

表4 不同ApoE基因型急性腦血管病患者血脂水平的比較(mmol/L)

2.6 不同ApoE表現型急性腦血管病患者血脂水平的比較 見表5。不同ApoE表現型的急性腦血管病患者在TC，HDL-C及LDL-C濃度水平上的差異均具有統計學意義(均P<0.05)，而TG濃度水平差異無統計學意義(P=0.114)。E4表現型的急性腦血管病患者，其TC及LDL-C濃度水平均高于其他表現型的急性腦血管病患者，而HDL-C濃度水平低于其他表現型。E2表現型的急性腦血管病患者，其TC及LDL-C濃度水平要低于其他表現型的急性腦血管病患者，而HDL-C濃度水平高于其他表現型。

表5 不同ApoE表現型急性腦血管病患者血脂水平的比較(mmol/L)

3討論載脂蛋白E(ApoE)可以通過多種途徑來調節人體的脂質代謝，并影響我們體內的血脂水平。有研究表明，當體內脂質代謝異常時或出現腦動脈粥樣硬化時，ApoE會較早且較顯著的出現變化，并且其靈敏度和特異度優于血脂的常規監測指標TG和TC，這也是ApoE可以作為急性腦血管病早期發現和臨床指導用藥的重要原因[6-7]。研究認為，不同ApoE的表達與心腦血管疾病的發生發展密切相關[6，8-9]。因此，本研究主要以急性腦血管病患者為研究對象，通過檢測其血清中ApoE基因型及表現型分布，分析與性別、年齡、臨床診斷以及血脂的關系，用以指導急性腦血管病患者選擇合適的降脂藥物，為臨床急性腦血管病的治療提供更好的理論指導依據，同時提高急性腦血管病患者的預后。

我們的結果顯示，急性腦血管病患者基因型及表現型的分布不均勻。在ApoE六種基因型中，以野生基因型ε3/ε3分布頻率最高，純合突變型ε2/ε2和ε4/ε4較為少見。而在ApoE三種表現型中，等位基因的頻率順序為E3>E4>E2，這與國內外一些研究報道基本一致[10-11]。可見，ApoE基因在急性腦血管病患者中呈多態性分布[6，12]。本研究證實了急性腦血管病患者ApoE基因型及表現型的分布不存在性別和年齡差異，同時也不受臨床診斷的影響。因此，可排除性別、年齡和臨床診斷因素對ApoE基因的影響，表明ApoE基因不受性別、年齡和臨床診斷等因素的干擾而存在[13-14]。

他汀類藥物可以有效降低血清中膽固醇和三酰甘油濃度，增加高密度脂蛋白濃度，從而減緩急性腦血管病的發生和發展，是防治腦血管疾病的基礎用藥[13-14]。有研究表明，ApoE基因多態性影響他汀類藥物的療效，與血清中TC，TG水平密切相關[15]。我們發現，不同ApoE基因型的急性腦血管病患者，其血清TC，TG，HDL-C及LDL-C表達水平存在明顯差異。

其中，ε4/ε4純合突變型急性腦血管病患者，血清TG，TC及LDL-C水平顯著高于其他基因型急性腦血管病患者，而HDL-C水平低于其他基因型急性腦血管病患者。這可能是由于不同ApoE基因型，其編碼的異構體與脂蛋白受體結合的親和力不同引起的，從而最終影響急性腦血管病患者的血脂水平[16-17]。此外，我們還發現，不同ApoE表現型的急性腦血管病患者，TC水平由高到低依次為E4，E3和E2，LDL-C水平由高到低依次為E4，E3，E2，HDL-C水平由高到低依次為E2，E3，E4。可見，ApoE4與高TC和LDL-C水平相關，較高的TC和TDL-C，可以沉積于腦血管動脈壁，堵塞腦血管，從而影響動脈粥樣硬化的發生發展，增加患腦血管病的風險，同時也可能導致他汀類藥物治療效果相對較差。因此，ApoE4可以作為腦血管病的遺傳危險因素。ApoE2具有較高水平的HDL-C，而血清中HDL-C具有抗動脈粥樣硬化的作用[18]，可見，ApoE2不易患腦梗塞等心腦血管疾病，他汀類藥物治療的效果較好，是一種保護因子。以上都提示急性腦血管病患者ApoE基因多態性與血脂水平可能存在相關性，這與孫謙等[19]的研究相一致。

本次研究仍有不足，納入的樣本量較少，而且部分研究對象的血脂數據不能排除飲食影響，此外本文納入患者多為沈陽及其周邊地區患者，具有一定的區域局限性。

綜上所述，本次研究結果提示ApoE基因多態性會影響急性腦血管病患者的血脂濃度，對腦血管病的早期發現和預防具有重要意義，可以作為風險預測因子。同時，臨床上在應用他汀類降脂藥物之前，對急性腦血管病患者的ApoE基因型及表現型進行篩查，有利于了解患者對降脂藥物的敏感性，選擇適合的降脂藥物，合理指導臨床用藥。