貴州省銅仁地區珠蛋白生成障礙性貧血患者基因分析及分布特征*

田 敏，李 麗，毛萬成，田曉靜，楊 韜

(思南縣人民醫院，貴州思南 565100)

1材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年6月～2019年1月來自銅仁地區(思南、德江、印江、石阡、沿河、江口、松桃、萬山、銅仁等縣市)在思南縣人民醫院門診及住院部就診的400例疑似珠蛋白生成障礙性貧血患者，其中男性38例，女性362例，年齡范圍為8月～40歲。入選標準：通過血細胞檢測，平均紅細胞容積(MCV)<80 fl，平均紅細胞血紅蛋白(MCH)<27 pg為疑似珠蛋白生成障礙性貧血患者[2-3]。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑：珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測試劑盒(PCR+導流雜交法)購置潮州凱普生物化學有限公司。

1.2.2 儀器：Bioer Life Express PCR擴增儀TC-96/G/H(b)(杭州博日科技有限公司)，醫用核酸分子雜交儀HB-2012A(潮州凱普生物化學有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集和處理：乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血，DNA提取及樣本保存嚴格按試劑說明書要求執行。

1.3.2 檢測內容：檢測人抗凝靜脈血樣本中3種缺失類型α-珠蛋白生成障礙性貧血：東南亞型基因缺失(--SEA)，3.7基因缺失(-α3.7)，4.2基因缺失(-α4.2)；3種突變類型α珠蛋白生成障礙性貧血：CS突變(αCS)，QS突變(αQS)，Ws突變(αWS)及19種β珠蛋白生成障礙性貧血突變類型：41-42M，17M，654M，71-72M，-28M，EM，43M，14-15M，30M，-30M，-32M，-29M，CapM(A-C-AAAC)，31M，IVSI-5M，IntM，IVSI-IM，(G-T，G-A)，27-28M。

1.3.3 檢測方法：α-和β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測采取PCR+導流雜交法，具體操作按試劑盒說明書進行。

馮先生以王陽明為《小史》作結。他的解釋是，清代學問風尚轉為漢學，漢學家鄙薄宋學，以為雜佛老而言儒家經學。清代人也有講理學、心學的，但無有顯著的新見，更無成體系的大家。所討論的問題，不出宋明理學家；所根據的經典，也不出四書，故略去不講。

1.3.4 結果判定：觀察測試膜條上出現的藍紫色斑點，與膜條陰陽性對照進行綜合分析判斷，結果判讀詳見試劑盒說明書。

1.4 統計學分析 采用SPSS16.0軟件對數據進行統計學分析，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 總體情況 在400例疑為珠蛋白生成障礙性貧血患者中，經基因檢測共確診188例，檢出率為47%。其中，α-珠蛋白生成障礙性貧血84例，占21%，β-珠蛋白生成障礙性貧血100例，占25%，兩組比較差異無統計學意義(χ2=1.81，P=0179)。此外，α-和β-復合突變4例(αβ-珠蛋白生成障礙性貧血)，占1%。

2.2 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型與構成比 84例α-珠蛋白生成障礙性貧血基因均以缺失型為主，并以--SEA/αα(54.7%，46/84)和-α3.7/αα(38.2%，32/84)居多，其次是αCSα/αα(4.7%，4/84)和--SEA/-α3.7(2.4%，2/84)。

2.3 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型與構成比 見表1。β-珠蛋白生成障礙性貧血中，以基因型βCD17/βN(44%)和βCD41-42/βN(36%)為主。

表1 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型與構成比(n=100)

2.4 不同民族珠蛋白生成障礙性貧血檢出情況 見表2。不同民族珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，漢族90例，占53.7%(90/168)；土家族54例，占45.8%(54/118)，苗族36例，占42.9%(36/84)，其他民族8例，占26.7%(8/30)。經分析，α-珠蛋白生成障礙性貧血檢出率在各民族間差異無統計學意義(χ2=3.1，P=0.37)，β-珠蛋白生成障礙性貧血檢出率在各民族間有差異，具有統計學意義(χ2=8.5，P=0.036)。

表2 不同民族受檢者珠蛋白生成障礙性貧血檢出率(%)

漢族β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，以βCD17/βN基因型最多(54.9%)；土家族與苗族β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，均以βCD41-42/βN基因型最多(53.8%和33.3%)，見表3。

表3 不同民族β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型構成比(%)

3討論珠蛋白生成障礙性貧血臨床上以a-珠蛋白生成障礙性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血最常見，是全球分布最廣、累積人群最多的單基因病[4]。本研究對400例疑似珠蛋白生成障礙性貧血樣本進行分析，初步了解了貴州省銅仁地區珠蛋白生成障礙性貧血基因分布情況。

α-珠蛋白生成障礙性貧血的基因缺陷主要為α-珠蛋白基因缺失或突變，目前全球已發現超過20種基因缺失和68種點突變類型。有資料顯示，α-珠蛋白基因在不同地區有著不同的基因突變譜，具有高度的異質性[5]。本研究涉及貴州銅仁地區84例α-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，僅檢出4種基因型，與以往研究結果相比，基因型別較少，可能與樣本數量較少有關。其中，--SEA/αα基因型最多(54.7%)，其次是-α3.7/αα(38.2%)。與朱曉西[6]報道的貴州地區α-珠蛋白生成障礙性貧血基因型在構成比上存在差異，可能是研究所涉及人群地域差異性所致，本文只針對貴州銅仁地區人群。

對于β-珠蛋白基因突變類型，至今發現了200多種，在我國報道的已超過48種[7]。本研究100例β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，檢出6種基因型，以βCD17/βN基因型最多，占44%，與劉興梅等[8]研究報道一致。β-珠蛋白基因突變譜也存在著地域差異性。有報道顯示，廣西[9]、廣東[10]等地區以CD41-42為主，福建[11]以IVS-Ⅱ-654為主，云南[12]以CD26為主等。貴州是一個多民族地區，遺傳背景多樣化，本研究中涉及到漢族、土家族、苗族及其他民族地區，對β-珠蛋白生成障礙性貧血在不同民族間的檢出率進行比較，差異有統計學意義(χ2=8.5，P=0.036)。其基因型在漢族人群以βCD17/βN為主(54.9%)，土家族與苗族人群均以βCD41-42/βN為主(分別為53.8%和33.3%)，這表明貴州省β-珠蛋白生成障礙性貧血人群中的基因型分布在當地不同民族中有一定的差異性。

總之，通過研究初步明確了銅仁地區珠蛋白生成障礙性貧血基因類型及在不同民族間的分布特征，對婚前遺傳咨詢和出生缺陷干預具有重要的指導意義。