四種梅毒血清學檢測方法在梅毒抗體不確定樣本的分析及評價*

王欣俞，趙晉文，張延海，高雅婷，孫 斌，高德祿，魏殿軍，郭奕陽

(1.河北燕達醫院檢驗科，河北廊坊 066251；2.中國人民解放軍第三○九醫院檢驗科，北京 100091；3.河北醫科大學第四醫院檢驗科，石家莊 050000)

梅毒是一種全球流行的傳染病，被列為《中華人民共和國傳染病防治法》乙類防治管理的病種及《性病防治管理辦法》中5種重點防控性病之一[1]。有研究表明，男男性行為人群中HIV與梅毒共感染率高達50%～70%[2]，梅毒的診斷主要根據病史、臨床表現和實驗室血清學檢測。梅毒螺旋體抗體血清檢測是目前臨床常用的檢測方法[3]，在梅毒的診斷方面起到重要的作用[4]。選擇不同的檢測方法，由于敏感度和特異度不同，可能造成漏檢或者誤診，嚴重影響就診者的身心健康，并導致醫療糾紛[5]。本研究對經化學發光微粒子免疫檢測法(chemiluminescence micropartide immunoassay，CMIA)梅毒螺旋體抗體篩查的不確定標本進行梅毒螺旋體抗體免疫印跡試驗(treponema pallidum-western blot，TP-WB)、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA)及快速血漿反應素環狀卡片試驗(rapid plasma reagin，RPR)法檢測比對及分析評價，現報道如下。

1材料與方法

1.1 研究對象 回顧性納入2018年1月～2019年1月期間，河北燕達醫院27 831例經CMIA法梅毒螺旋體抗體篩查樣本，其中選取檢測結果S/CO比值在1～10.0內反應性的不確定標本190例為研究對象，其中男性76例，女性114例，平均年齡45±17歲。

1.2 試劑和儀器 CMIA檢測法試劑盒及ARCHITECT i2000儀器(美國雅培公司)；TPPA檢測法試劑(日本富士公司的瑞必歐珠式會社)；TP-WB檢測試劑盒(德國歐蒙公司)；RPR試劑(上海科華公司)。

1.3 檢測方法 抽取患者空腹靜脈血5 ml，3 000 r/min離心10 min，血清樣本加樣，-20℃保存。CMIA法：采用CMIA檢測梅毒特異性抗體，儀器測得樣本發光值，計算反應物濃度，依據臨界值對結果進行判斷，S/CO≥1為梅毒螺旋體抗體反應性，S/CO<1為非反應性。RPR法：取50 μl血清滴加反應卡片，加50 μl抗原懸液，微量旋轉儀器震動卡片8 min后觀察結果。TPPA法：在25 μl待測血清中加入100 μl稀釋液混勻，吸取25 μl混合液滴加微孔板，再加稀釋液25 μl倍比稀釋，重復上述操作，混勻靜止2 h后觀察結果。TP-WB法：采用重組梅毒螺旋體基因蛋白抗原，通過含電泳轉移硝酸纖維素膜分離的梅毒螺旋體抗原檢測膜條置于全自動免疫印跡儀EUROBlotMasterll檢測，通過EUROLineScan軟件讀取反應結果。以上所有操作和結果判定均嚴格按照作業指導書進行，實驗同時設置陰性和陽性質控。

1.4 觀察指標統計 CMIA，RPR，TPPA和TP-WB檢測梅毒螺旋體抗體的結果；對比梅毒檢測方法中CMIA，RPR和TPPA法的靈敏度、特異度、誤診率、漏診率、陽性預測值、陰性預測值。

2結果

2.1 四種方法檢測梅毒螺旋體抗體的結果 見表1。以TP-WB檢測結果為標準，檢出56例陽性，134例陰性；47例樣本CMIA與TPPA的結果不一致，CMIA檢測均陽性，TPPA檢測47例陰性、143例陽性。2例樣本TPPA檢測陰性，經TP-WB確證陽性；56例樣本CMIA與TP-WB的結果不一致，CMIA檢測均陽性，經TP-WB確證56例陽性，134例陰性；2例樣本RPR檢測陽性，經TP-WB確證陽性。

表1 CMIA，RPR，TPPA和TP-WB檢測 梅毒螺旋體抗體的結果(n)

2.2 TP-WB檢測在初篩梅毒抗體不確定樣本的診斷價值 見表2。1

表2 三種梅毒檢測方法結果比較

90例弱反應性結果進行不同試驗方法學的比對，以TP-WB陽性結果為真陽性進行分析，最終56例陽性，134例陰性。TP-WB與CMIA陽性符合率為29.5%(56/190)；CMIA與TPPA陽性符合率為75.3%(143/190)；TPPA結果與WB-TP-IgG陽性符合率為28.4%(54/190)，誤診率為66.42%(89/134)，漏診率為3.57%(2/56)，陰性預測值為95.74%(45/47)，RPR現正感染陽性預測值100%(2/2)、陰性預測值為100%(188/188)。

3討論梅毒是由蒼白梅毒螺旋體引起的一種具有復雜臨床表現的慢性接觸性傳染病，傳播途徑多、傳染性強，對社會和人類健康造成極大的危害。2015年國家衛生健康委員會發布《全面控制艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作》通知[2，6]。

目前，我國梅毒血清學檢測策略有2種：非特異性梅毒螺旋體血清試驗、梅毒螺旋體抗原血清試驗[7]。非特異性梅毒螺旋體血清試驗常選用RPR或甲苯胺紅不加熱血清試驗(toluidine red unheated serum test，TRUST)[8]；本項目實驗室方法CMIA，TPPA及TP- WB為特異性梅毒螺旋體抗原血清試驗。

CMIA法易于批量樣本自動化檢測，具有高效率、無攜帶污染。TPPA法檢測判定以產生可見的紅色凝集反應，即免疫凝集反應[9]。TP-WB法檢測使用重組梅毒螺旋體基因蛋白抗原(TpN47，tmpA，TpN17，TpN15)的IgG抗體，是目前較為公認的梅毒特異性抗體確證方法[10]。熊繼紅等[11]對雅培CMIA法結果S/CO值≥10無需復查可直接發出結果，準確率達到100%；張曉紅等[12]對843份TPPA試驗陽性標本中，S/CO值≥10時100%為陽性。實驗室工作人員在梅毒檢測結果強反應性時，檢測結果直接簽發，為臨床提供診斷依據。而弱反應性結果時，有學者報道[13]，梅毒檢測試驗方法學不同廠家存在特異性差異。我們的課題研究中，梅毒檢測弱反應性結果需特異性較高的TP-WB檢測方法學進行鑒別診斷。CMIA檢測方法靈敏度高，特異性低；RPR檢測可以排除梅毒活動性感染；TPPA檢測方法的陰性預測值可以排除陰性結果；TP-WB檢測方法可以為臨床診斷提供實驗室結果的確證。

綜上所述，實驗室梅毒血清方法學的檢測存在局限性，多種因素可導致檢測結果的假陽性，目前還沒有一種試驗方法能完全滿足臨床需求，對于檢測弱反應性結果不一致的標本應首選用免疫印跡法檢測確證，避免臨床診斷中漏診或者誤診發生。