孕婦血清可溶性B7-H4水平與胎膜早破早產之間的關系研究*

張慧雅，魏建勛，劉秋霞

(1.西電醫院婦產科，西安 710077；2.延安大學附屬醫院產科，陜西延安 716000)

免疫耐受在女性妊娠過程中扮演著至關重要的角色。T淋巴細胞具有識別外來抗原、使機體產生炎癥反應的能力。在女性妊娠期間，特異性免疫耐受反應可以抑制母胎交互作用時T細胞的此類功能，進而阻止母體對胎兒的抗原進行免疫防御的過程[1]。與此同時，母體體內一定程度的炎癥反應是確保胎兒成功著床和成功分娩的所需因素。免疫耐受是女性妊娠過程中胎兒正常發育所必需的反應，母體對外來細胞缺乏適當的耐受能力，會誘發妊娠并發癥[2]。未足月胎膜早破 (preterm premature rupture of membranes，pPROM)的發生率占妊娠女性人群的2%～3.5%，其與早產相關聯，這是影響新生兒發病和死亡的主要因素[3-5]。雖然其發病機理尚不明確，但與感染存在一定關系[6-7]。本研究旨在評估免疫耐受因子[血清可溶性B7-H4(soluble B7-H4， sB7-H4)] 與胎膜早破早產之間的關系。通過分析最終發展為pPROM和PROM的患者在妊娠期為11～13周時血清中sB7-H4的濃度，并將其與正常妊娠女性進行比較，最終通過結果分析來揭示sB7-H4與胎膜早破早產之間的關系。

1材料與方法

1.1 研究對象 選擇2008年4月～2015年12月于西電醫院婦產科接受產前檢查和分娩的女性為研究對象。納入標準：①年齡18～35歲；②人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)篩查陰性；③患者臨床資料完整。排除標準：①狼瘡抗凝物陽性、血漿中抗心磷脂抗體≥40 GPL KU/L或血漿中同型半胱氨酸≥25 μg/L；②相關性激素(如絨毛膜促性腺激素)或孕甾酮類藥物使用史；③血漿免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)不足，清蛋白或免疫球蛋白過敏史；④抗炎藥物或抗凝藥物長期服用史；⑤女性子宮異常或雙親染色體異常；⑥其它慢性疾病或糖尿病史。本研究經醫院倫理道德委員會審核通過，所有研究對象均簽訂知情同意書。

研究共納入41例胎膜早破患者和35例健康妊娠女性。將41例胎膜早破患者分為2組，其中一組為妊娠期<37周時診斷為未足月胎膜早破的患者(pPROM組，n=22)，包括絨毛膜羊膜炎患者7例，非絨毛膜羊膜炎患者15例；另一組為妊娠期≥37周時胎膜破裂自然分娩或行剖宮術的患者(PROM組，n=19)。羊膜破裂的鑒定根據患者臨床資料調查、陰道羊水流出性檢測、陰道酸堿度(pondus hydrogenii，pH)測定、超聲檢查和胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factors -1，IGF-1)及結合蛋白檢測等手段進行。35例健康妊娠女性納入對照組。

1.2 試劑和儀器 抗凝采血管(美國BD公司)；ELISA檢測試劑盒(德國BIOZOL公司)；多功能酶標儀(美國MD公司)。

1.3 方法

1.3.1 血樣的采集和處理：于受試者肘靜脈處采集外周血9 ml，置于枸櫞酸鈉(濃度為0.129 mol/L)抗凝管中，并貯存于4℃環境中。為避免細胞裂解，樣本需在采集后4 h內完成處理并貯存在-80℃，檢測(樣品在1個月內完成檢測)。

1.3.2 血清標本中sB7-H4蛋白定量分析：采用酶聯免疫吸附法測定血清中sB7-H4的蛋白濃度，具體操作參照ELISA試劑盒(BIOZOL，Eching，Germany)說明書進行。

2結果

2.1 pPROM組、PROM組和對照組的臨床基本資料比較 見表1。pPROM組、PROM組和對照組在妊娠年齡、BMI值和妊娠次數之間比較，其差異均無統計學意義(P>0.05)。pPROM組、PROM組和對照組在分娩時孕周、剖宮產率、新生兒出生體重、5 min Apgar評分、C反應蛋白(C reactive protein，CRP)水平和白細胞(white blood cell，WBC)計數間的差異均有統計學意義(P<0.05)；pPROM組患者血清中sB7-H4濃度高于PROM組患者和對照組女性，其差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 pPROM組、PROM組和健康對照組產婦和新生兒臨床基本特征

2.2 sB7-H4濃度對患者臨床結局的預測 見表2。sB7-H4濃度在區分pPROM組與對照組時，其最佳臨界值為13.01 ng/ml、特異度為96.5%、敏感度為62.1%；血清中sB7-H4濃度的增加(每ng/ml水平)會提高pPROM發生的風險，其優勢比(odds ratio， OR)為1.52(95% CI：1.09～1.88，P=0.001)。

表2 PROM組和pPROM組與對照組相比較ROC曲線分析結果

2.3 急性絨毛膜羊膜炎和非絨毛膜羊膜炎pPROM患者的sB7-H4濃度比較 患有pPROM并伴有急性絨毛膜羊膜炎的患者，其妊娠早期血清中sB7-H4的濃度高于非絨毛膜羊膜炎pPROM患者，但差異無統計學意義(P>0.05)；兩組患者在妊娠年齡、BMI值、妊娠次數、流產次數、pH值、WBC計數間的差異均無統計學意義(均P>0.05)；兩組患者在分娩時孕周、新生兒出生體重、5 min Apgar評分、CRP水平間的差異均有統計學意義(均P<0.05)。

3討論本研究表明妊娠期<37周即發展為pPROM的患者、妊娠期≥37周后發展為PROM的患者與健康妊娠女性相比，pPROM患者妊娠早期血清中sB7-H4的濃度較高，其差異有統計學意義(P<0.05)；此外，本研究還發現急性絨毛膜羊膜炎pPROM患者中妊娠早期sB7-H4的濃度處于較高水平。綜上，本研究結果顯示對于妊娠早期女性，其血清中sB7-H4的濃度可用于預測發展為pPROM的可能性。

目前相關研究已表明pPROM的發生與女性妊娠期間免疫耐受功能紊亂相關聯[8]。本研究中pPROM組妊娠早期血清中過高的sB7-H4濃度表明在此階段這些女性的免疫系統活性顯著增加。在女性懷孕的前三個月內，抗炎性Th2細胞占主導地位，主要用于維持正常的胎兒發育；反之，在此期間內如果Th1細胞占主導地位，母體的免疫系統活性增加，胎兒的正常發育就很可能會受負面影響[9]。sB7-H4在免疫系統中的功能尚不明確，XIE等[10]針對老鼠模型的研究表明sB7-H4作為誘餌分子可以阻斷細胞相關性B7-H4的抑制功能，導致T細胞介導的自身免疫反應增強。但也有研究顯示sB7-H4作為T細胞負調節分子可以抑制宿主的免疫力，使腫瘤可以逃脫免疫系統的監控[11-12]。ILIAN等[13]的研究表明不同來源的sB7-H4具有不同的結構和功能。此外，相關報道也顯示對于分娩期間的產婦，羊膜破裂同免疫反應向Th1轉換相關聯。B7-H4抑制Th1免疫反應[14]，這可用于解釋本研究中所觀測到的pPROM組患者血清中sB7-H4濃度升高。目前對于圍產期的分娩動因研究顯示，分娩的發動與促炎癥因子的表達具有相關性，如IL-6和IL-8因子[15-16]；JENESSA等[12]還觀測到IL-6和IL-10因子可以刺激巨噬細胞中B7-H4的表達，以維持慢性感染條件下母體足夠的免疫耐受。這可用于解釋發展為pPROM的患者其血清中sB7-H4濃度處于較高水平這一研究結果，尤其是急性絨毛膜羊膜炎pPROM患者。因此，免疫系統活性對妊娠期母體及胎兒具有一定程度的適應性，主要用于維持正常的胎兒發育和產婦分娩。

對妊娠期間免疫進程和免疫系統活性更深層次的研究，有助于制定新的治療策略以預防胎兒早產。探尋生物標記分子既有助于識別有早產風險的高危患者，也有助于確定適當的早產預防策略。盡管如此，目前尚無有效的生物預測分子可以減少無分娩癥狀女性的早產或延遲分娩。本研究中女性妊娠早期sB7-H4的濃度在區分pPROM組和對照組之間表現出較高的特異度和敏感度，這表明sB7-H4可作為潛在的生物標記分子用于預測妊娠期間免疫系統活性的增加和妊娠并發癥發生的風險。鑒于本研究的局限性，對于sB7-H4作為預測pPROM發生風險的標記分子尚需更多的前瞻性研究，以便更好地應用于臨床，以采取相應的治療措施減少早產的發生。