山莓葉揮發(fā)油提取優(yōu)化及ＧＣ特征圖譜比較

張曦 羅宏泉 張敏

【摘 要】 目的： 優(yōu)化山莓葉揮發(fā)油提取條件，建立山莓葉揮發(fā)油特征圖譜。方法：采用水蒸餾提取、同時(shí)蒸餾萃取、微波輔助提取山莓葉揮發(fā)油，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化微波輔助條件，提取不同采收期山莓葉的揮發(fā)油，運(yùn)用GC測(cè)定比較。結(jié)果：上述方法提取山莓葉揮發(fā)油得率分別0.203%、0.208%、0.278%。微波輔助最優(yōu)條件為微波時(shí)間2h、微波功率120w、料液比1∶10。7月采收的山莓葉揮發(fā)油得率達(dá)到0.46%。不同采收期的揮發(fā)油GC圖譜中八個(gè)共有峰，其占百分比在81%以上。結(jié)論：微波輔助提取方法穩(wěn)定可靠，特征圖譜方法簡(jiǎn)便，為山莓葉揮發(fā)油綜合評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】山莓葉;提取優(yōu)化;揮發(fā)油;GC;特征圖譜

【中圖分類號(hào)】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）5-0019-04

山莓（Rubus Corchorifolius L.f）是薔薇科懸鉤子屬落葉灌木，山莓根、莖、葉、果實(shí)均可入藥[1]。根性味微苦、辛、平，具有活血化瘀、祛風(fēng)除濕、解毒斂瘡的功效，主治痢疾、遺精、濕疹、毒蛇咬傷、閉經(jīng)痛經(jīng)、風(fēng)濕腰痛、小兒疳積等癥[2]，果實(shí)性味微甘、酸、濕，可生食、制果醬及釀酒，未成熟果實(shí)常用于替代覆盆子入藥做引，具有化痰止渴、澀精益腎、助陽(yáng)明目之功效，主治腎虛、遺精、醉酒、丹毒等癥[3-4]。葉性微苦，具有解毒、消腫、斂瘡、清熱利咽等作用，主治咽喉腫痛、多發(fā)性膿腫、乳腺炎等癥[5]。目前山莓葉及其揮發(fā)油的化學(xué)成分和生物活性研究雖已見(jiàn)報(bào)道[6-8]，由于生態(tài)環(huán)境的多樣性，意味著二次代謝產(chǎn)物的多樣性，為了更好地利用山莓資源，研究采用水蒸餾提取、同時(shí)蒸餾萃取、微波輔助萃取等方法提取山莓葉揮發(fā)油，并對(duì)微波輔助萃取條件進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)GC測(cè)定不同采收期山莓葉揮發(fā)油，試圖尋找山莓葉揮發(fā)油的特征峰，為開(kāi)發(fā)和評(píng)價(jià)山莓葉提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料 山莓葉采自湖南張家界市永定區(qū)三角坪，經(jīng)吉首大學(xué)城鄉(xiāng)資源與規(guī)劃學(xué)院廖博儒研究院鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物山莓（R.corchorifoius L）的葉，每月中旬采集，陰干，粉碎，低溫保存。所用試劑均為分析純。

1.2 儀器 蒸餾萃取裝置，RE-5298旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，UV-2600紫外分光光度計(jì)，萬(wàn)分之一天平，安捷倫GC7890氣相色譜儀，CW-2000超聲微波協(xié)同萃取裝置，電爐，真空干燥箱。

1.3 方法

1.3.1 提取方法的選擇 水蒸氣蒸餾：取山莓葉粉100.00g于1000mL燒瓶中，加入去離子水800mL，冷凝回流5h，收集蒸出液，用NaCl飽和，乙醚萃取，無(wú)水Na2SO4脫水，乙醚萃取液于37℃真空濃縮，即得淺黃色山莓葉揮發(fā)油。

蒸餾萃?。喝∩捷~粉100.00g于1000mL燒瓶中，加入去離子水800mL，取200mL乙醚于燒瓶中，同時(shí)蒸餾萃取5h，收集乙醚萃取液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，乙醚萃取液于37℃真空濃縮，即得黃色山莓葉揮發(fā)油。

微波輔助提取：取山莓葉粉100.00g于1000mL蒸餾燒瓶（微波專用），加入去離子水800mL，裝上水蒸氣蒸餾裝置，微波功率100w，冷凝回流3h，收集蒸出液， 乙醚萃取，無(wú)水Na2SO4脫水，乙醚萃取液于37℃真空濃縮，得到黃色山莓葉揮發(fā)油。

[JP2]

1.3.2 單因素實(shí)驗(yàn) 取山莓葉粉100.00g于1000mL燒瓶（微波專用），去離子水800mL，裝上蒸氣蒸餾裝置，分別依次考察固液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12，微波功率60、80、100、120w，微波時(shí)間0.5、1、2、3h。收集蒸出液，乙醚萃取，無(wú)水Na2SO4脫水，乙醚萃取液于37℃真空濃縮，即得山莓葉揮發(fā)油。以得率為指標(biāo)，考察上述因素的影響。[JP]

1.3.3 正交試驗(yàn) 利用L9（34）設(shè)計(jì)，考察固液比、微波功率、微波時(shí)間對(duì)得率的影響，優(yōu)化提取條件，因素水平見(jiàn)表1。

1.3.4 GC色譜條件 石英毛細(xì)管柱BP×5（25m×0.22mm×0.25μm）;高純氮?dú)?，進(jìn)樣量0.5μL。程序升溫：初始溫度： 40℃，保持3min，以5.0℃/min速率升至200℃，保持10min，不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣器230℃，檢測(cè)器250℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法的選擇 由表2可以看出，微波提取得率0.278%，比同時(shí)水蒸氣蒸餾和蒸餾萃取得率高。

2.2 單因素的影響 從圖1可知，隨著微波提取時(shí)間的增長(zhǎng)，山莓揮發(fā)油得率增加。2h 以后，提取時(shí)間增長(zhǎng)，得率增長(zhǎng)平緩，考慮到能耗，選擇微波時(shí)間2h為宜。從圖2可見(jiàn)，液料比1∶6時(shí)，山莓葉揮發(fā)油得率低。隨著液料比的增大，得率平緩增大，本實(shí)驗(yàn)可以選擇料液比1∶8。從圖3可看出，隨著微波功率逐漸增大，山莓液揮發(fā)油得率增加。這是由于微波功率越大，使分子熱運(yùn)動(dòng)動(dòng)能增大，得率相應(yīng)增加，但微波功率增加，極易造成爆沸現(xiàn)象，本實(shí)驗(yàn)將微波功率控制在120w以下。

2.3 正交試驗(yàn) 由表3可知，影響山莓葉揮發(fā)油提取的因素順序?yàn)椋何⒉〞r(shí)間﹥微波功率﹥固液比，最佳提取條件為A2B3C3，這與上述實(shí)驗(yàn)不一致，為此，以A2B3C3進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得率為0.2705%，與極差分析一致。表4方差分析可知，微波時(shí)間、微波功率、固液比對(duì)提取影響顯著。其中，微波時(shí)間對(duì)得率影響最顯著，微波功率次之。結(jié)果表明微波輔助最優(yōu)條件為料液比1∶10、微波功率120w、微波時(shí)間2h。

2.4 不同采收期山莓葉微波輔助蒸餾提取 按2.3正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化微波輔助條件，取100.00g不同采收期山莓葉粉于1000mL燒瓶（微波專用），去離子水800mL，裝上水蒸氣蒸餾裝置，微波功率120w，冷凝回流2h，收集蒸餾液，乙醚萃取，無(wú)水Na2SO4脫水，乙醚萃取液于37℃真空濃縮，即分別得到不同采收期山莓葉揮發(fā)油。由表5可知，不同采收期的山莓葉，其揮發(fā)油得率隨采收時(shí)間變化，其中6～7月?lián)]發(fā)油得率在0.45%以上，3～4月?lián)]發(fā)油得率低于0.26%。

2.5 不同采收期山莓葉揮發(fā)油GC特征圖譜 按1.3.4項(xiàng)下GC色譜條件，檢測(cè)從3月到10月不同采收期山莓葉的揮發(fā)油，記錄25min色譜圖，見(jiàn)圖4。不同采收期山莓葉揮發(fā)油GC圖譜進(jìn)行比較，確定八個(gè)共有峰，均在22min內(nèi)出現(xiàn)， 各個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間一致，各個(gè)共有峰的相對(duì)峰面積變化趨勢(shì)基本一致，共有峰百分比均大于81%。不同采收期山莓葉揮發(fā)油化學(xué)成分種類和數(shù)量有明顯相似度，這與采集地、提取方法相同有關(guān)，提示了同一生長(zhǎng)地域共有峰相對(duì)穩(wěn)定。結(jié)果見(jiàn)表6-8。

3 討論

山莓葉揮發(fā)油具有消炎殺菌作用[8]，本研究主要考察揮發(fā)油得率，其中微波輔助提取得率為0.278%。優(yōu)化提取條件：微波功率120w、料液比1：10、微波時(shí)間2h，山莓葉揮發(fā)油得率隨著采收期不同變化，氣溫高時(shí)揮發(fā)油得率高， 6月、7月?lián)]發(fā)油得率達(dá)到0.45%。

植物揮發(fā)油的化學(xué)成分復(fù)雜，同時(shí)受到氣候環(huán)境、地理環(huán)境、不同采收期等等多種因素的影響，本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明同一生長(zhǎng)地山莓葉揮發(fā)油的化學(xué)成分相對(duì)穩(wěn)定穩(wěn)定。該法操作簡(jiǎn)便，根據(jù)GC出峰的次序及出峰特征，獲得不同采收期山莓葉揮發(fā)油的特征圖譜，以期為綜合評(píng)價(jià)山莓葉揮發(fā)油提供依據(jù)。

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（收稿日期：2018-12-23 編輯：劉斌）