PTPRS在食管腺癌中的表達水平及臨床意義*

張國亮，朱奇坤，曾輝，王濤，高峰，王瑞

（河北醫科大學第四醫院 胸外科，河北 石家莊 050011）

食管癌是危及人類健康的惡性腫瘤[1]，具有早期轉移、侵襲、浸潤等特點。因此，研究食管癌侵襲、轉移的基因，能為精準治療提供理論依據。PTPRS是抑制基因，與肝癌、肺腺癌的預后相關[2-3]，但關于PTPRS在食管腺癌的表達，國內外相關報道較少。本研究采用組織芯片和免疫組織化學法對71例配對的食管黏膜組織、癌組織及癌旁組織中PTPRS蛋白的表達水平進行檢測，探討其與食管腺癌患者臨床病理特征和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年2月—2016年5月河北醫科大學第四醫院行根治性切除的71例食管腺癌患者的癌組織及配對的癌旁組織、食管正常黏膜組織。其中，癌旁組織是由有經驗的手術醫師和病理科醫師確定距離腫瘤病灶2 cm處組織，食管正常黏膜組織是其距離癌組織≥5 cm組織。納入患者為首次診療且術前無放化療或者合并其他腫瘤。其中，男性51例，女性20例；年齡34～71歲，平均59.6歲。具有完整的病例資料，腫瘤分級、TNM分期按照國際抗癌聯盟2009年第七版食管腺癌分期標準[4]。術后隨訪次/3個月，隨訪終點為死亡、失訪或生存至截止日期，隨訪截止時間為2017年1月1日，平均隨訪時間29.5個月。本研究通過醫院倫理委員會批準，患者及家屬簽訂知情同意書。

1.2 組織芯片的制備

取癌組織、癌旁組織及食管正常黏膜組織以10%中性甲醛固定，常規脫水浸蠟，石蠟包埋；蘇木精-伊紅染色、切片、病理診斷，標記出腫瘤組織及正常黏膜組織范圍。按照實驗設計出組織芯片的陣列排列方式和組織類型，用10 mm組織穿刺針在每個標本的標記點取樣；然后將其依次排列于模具內預融的石蠟中，構成組織微陣列蠟塊，待石蠟凝固后切成4μm微陣列切片，將其貼附于載玻片上，封蠟備用。

1.3 免疫組織化學SP法

采用免疫組織化學SP法檢測PTPRS蛋白的表達，具體步驟如下：組織芯片置于60℃烤箱中烘烤30 min后，經二甲苯脫蠟及乙醇水化，浸泡于3%過氧化氫H2O2抑制內源性過氧化物酶，置于檸檬酸緩沖液（pH6.0）中高壓加熱抗原修復3 min，羊血清室溫封閉30 min，滴加PTPRS一抗（美國Sigma公司，稀釋度1∶100），37℃溫箱孵育1 h，加二抗酶標抗小鼠/羊IgG聚合物（上海基因科技有限公司），37℃溫箱孵育30 min，3-二氨基聯苯胺顯色3 min，流水洗，蘇木精復染，脫水、透明、中性樹膠封片，鏡下閱片。

1.4 結果判定

切片由2位獨立觀察員采用雙盲法對所有切片進行評估。PTPRS蛋白主要表達在細胞膜，根據細胞膜染色強度作為評判標準。高倍鏡下隨機選取5個不同的視野，觀察細胞染色強度及計數陽性細胞數所占細胞總數的百分比。評分標準，①按染色強度計分：無色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。②按陽性細胞百分比計分：陰性為0分；陽性細胞數≤10%為1分；11%～50%為2分；51%～75%為3分；＞75%為4分。最后將2項得分結果相乘：總分≤4分為低表達；＞4分為高表達。

1.5 統計學方法

數據分析采用SPSS 21.0統計軟件。計數資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線和復發曲線，比較用Log-rank χ2檢驗，采用Cox回歸模型評估各變量對預后的影響，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 食管腺癌、癌旁組織及食管正常黏膜組織中PTPRS蛋白表達率比較

PTPRS蛋白在食管正常黏膜組織和食管腺癌組織中表達（見圖1）。PTPRS蛋白在正常食管黏膜組織、癌旁組織、癌組織中表達率分別為60.56%、52.11%和36.62%，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=8.376，P=0.015）；PTPRS蛋白在食管腺癌組織中表達量低于正常食管黏膜組織（P＜0.05）；癌旁組織中PTPRS蛋白表達水平與正常食管黏膜比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 PTPRS表達水平與食管腺癌臨床病理特征的關系

不同臨床分期、浸潤深度、淋巴結轉移狀態、分化程度、神經受侵及脈管瘤栓的食管腺癌患者的PTPRS蛋白高表達率比較，差異有統計學意義（P＜0.05），而其他臨床病理特征比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。PTPRS蛋白在臨床分期為Ⅲ、Ⅳ期的食管腺癌組織中的低表達率[76.92%(30/39)]高于Ⅰ、Ⅱ期[46.88%(15/32)]（P＜0.05）；高分化食管腺癌患者的PTPRS高表達率高于中、低分化食管癌患者（P＜0.05）；有淋巴結轉移患者PTPRS高表達率低于無淋巴結轉移（P＜0.05）；浸潤至纖維膜及周圍組織患者PTPRS蛋白低表達率[75.56%(34/45)]高于浸潤肌層以下的患者[42.31%(11/26)]（P＜0.05）。PTPRS蛋白表達水平與神經受侵、脈管瘤栓相關（P＜0.05）。食管腺癌組織中PTPRS高表達率在不同年齡、性別、飲酒史、吸煙史、腫瘤家族史、手術方式、腫瘤大小及腫瘤位置方面比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

圖1 食管正常黏膜組織及食管腺癌組織中PTPRS蛋白的表達

表1 食管腺癌臨床病理特征與PTPRS表達水平的關系 [n =71，例（%）]

2.3 PTPRS蛋白表達與預后的關系

Kaplan-Meier生存分析顯示，PTPRS低表達患者生存率與高表達患者生存率比較，經Log-rank χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=10.764，P=0.002）；食管腺癌患者PTPRS蛋白低表達組生存率低于高表達組（見圖2）。兩組患者的中位生存時間分別為24和58個月，兩組患者總生存率分別為33.33%和57.69%。兩組患者中位復發時間分別為20和50個月，兩組患者總復發率分別為73.33%和50.00%。PTPRS蛋白低表達患者復發率與高表達患者比較，差異有統計學意義（χ2=11.468，P=0.001）；PTPRS蛋白低表達患者復發率高于PTPRS蛋白高表達患者（見圖3）。經單因素Cox回歸分析顯示，脈管瘤栓、神經受侵、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移、分化程度、臨床分期及PTPRS是影響食管腺癌患者預后的危險因素（P＜0.05）；進一步多因素Cox回歸分析顯示，分化程度、PTPRS表達是影響食管腺癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。見表2、3。

圖2 食管腺癌患者術后生存時間與PTPRS蛋白表達的關系

圖3 食管腺癌患者術后復發時間與PTPRS蛋白表達的關系

表2 食管腺癌預后的單因素Cox回歸分析參數

表3 食管腺癌預后的多因素Cox回歸分析參數

3 討論

PTPRS基因是1988年從人胎盤基因組DNA文庫首次被發現，位于染色體19p13.3[5]。其編碼的蛋白PTPRS和蛋白酪氨酸磷酸酶受體F[6]、蛋白酪氨酸磷酸酶受體D[7]一樣，是PTPR家族中Ⅱa亞型成員[8]，其胞外區由多種免疫球白和纖維結合素Ⅲ重復片段等組成[9]。最初發現PTPRS在神經再生、突觸形成中發揮重要作用[10]。王智超等[2]研究發現，PTPRS在肝癌的發生、發展及轉移中起重要作用，被認為是一個新型抑癌基因。MORRIS等[11]發現，在頭頸部鱗狀細胞癌中PTPRS基因的缺失可達26%，其編碼的PTPRS缺失與細胞增殖、腫瘤發生和轉移相關。同時MORRIS等[3]發現，PTPRS蛋白的低表達與肺腺癌預后密切相關。全基因組測序發現PTPRS基因突變，如膽管細胞癌A1384T[12]，結直腸癌V224M[13]和惡性黑色素瘤P141S[14]。DAVIS等[15]發現，PTPRS與結直腸癌的發生密切相關。提示PTPRS可能是腫瘤潛在的抑癌基因，其表達的PTPRS蛋白可能參與腫瘤的發生、侵襲及轉移。

目前，關于PTPRS在食管腺癌中的表達及復發轉移的研究較少。筆者對71例食管腺癌患者研究發現，PTPRS蛋白在食管腺癌組織的表達低于正常黏膜組織和癌旁組織，提示PTPRS可能是腫瘤的抑癌基因，在食管腺癌發生過程中起一定的作用。筆者進一步分析PTPRS蛋白的表達與食管腺癌患者臨床病理特征的關系發現，PTPRS蛋白在早期食管腺癌組織中的表達高于晚期患者，在侵犯組織廣泛及伴有淋巴結轉移的患者中表達較低，提示PTPRS可能參與食管腺癌的復發轉移，并與腫瘤的發生、發展密不可分。本組實驗發現，PTPRS蛋白表達與腫瘤分化程度、神經受犯及脈管瘤栓相關，其在有神經浸潤、脈管瘤栓的組織中的低表達率分別高達84.00%、82.61%，提示PTPRS不僅與腫瘤的惡性程度密切相關，而且與腫瘤血管形成及組織侵襲有關。PTPRS的表達量與腫瘤位置、大小無關，可能與樣本量相對較少有關。

本組實驗進一步探討PTPRS蛋白表達與食管腺癌患者的生存關系。Kaplan-Meier生存曲線顯示，隨著時間的推移，PTPRS蛋白低表達患者生存率低于高表達患者。Cox單因素及多因素回歸分析顯示，PTPRS蛋白表達水平與食管腺癌患者預后相關，與PTPRS在頭頸部鱗癌、肝癌及肺腺癌研究結果一致[2-3，11]。

綜上所述，PTPRS可能是腫瘤的抑癌基因，其在食管腺癌的發生、發展中起著非常重要的調控作用。PTPRS在食管腺癌中確切的生物影響和分子機制仍不清楚，因此，筆者將繼續增加樣本量，完成術后長期隨訪，明確PTPRS在食管腺癌中扮演的角色，以便為食管腺癌的靶向治療及預后監測等方面提供參考。