伊曲康唑凝膠的制備及體外透皮性考察*

夏愛曉，周鵬，林忠，孫淵，章艷，蔣正立

[1.臺州恩澤醫療中心(集團)浙江省臺州醫院藥劑科臨床藥學實驗室，臺州 317000；2.溫州醫科大學藥學院，溫州 325035]

嬰幼兒血管瘤(infantile hemangioma，IH)是目前嬰幼兒中最常見的良性生長腫瘤，可累及皮膚或內臟器官[1]。IH發病率8.7%～12.7%，早產兒高達30%[2]。可自行消退的IH占較大比例，但對于復雜難治性IH需采用外科手術或藥物治療才能徹底緩解。目前臨床治療IH的方法多樣。在藥物治療方法中，普萘洛爾為目前治療IH的一線藥物[3]。但口服普萘洛爾治療IH存在安全隱患和不良反應，并有減緩心率作用。故臨床考慮局部外用藥物治療IH，以提高患者依從性，特別是針對口服給藥困難的嬰幼兒，目前主要局部外用治療IH的藥物有噻嗎洛爾、咪喹莫特和中草藥制劑。

伊曲康唑(itraconazole，ITZ)是近年來發現具有抗血管瘤作用的藥物[4-5]，口服伊曲康唑對血管瘤改善率達80%～100%，安全性較好。研究表明，伊曲康唑具有抑制血管及血管內皮細胞增生作用，但具體機制尚不清楚，可能與其抑制內皮細胞膽固醇運轉、抑制 hedgehog 信號傳導通路等有關。

伊曲康唑幾乎不溶于水，因此其口服制劑生物利用度低，全身大劑量給藥易導致不良反應，局部外用制劑可避免全身性不良反應。筆者在本實驗制備伊曲康唑凝膠外用制劑，該制劑可長時間停留于瘤體表面，使藥物與皮膚充分接觸，發揮良好藥效，降低毒性，并具有緩釋效果，提高用藥依從性，對于開發治療IH的伊曲康唑外用制劑具有一定應用前景。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters高效液相色譜系統，包含：Waters717自動進樣器，1525四元泵，2487紫外檢測器，breeze數據獲取處理系統(美國Waters公司)；Waters ODS2(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(美國Waters公司)；TP-2A/3A型智能藥物透皮擴散實驗儀(上海互佳儀器設備有限公司)；PHS-3CPH計(上海精密科學儀器有限公司)，XY-80A渦旋混合器(上海醫大儀器廠)，XMTD-204數顯式電熱恒溫水浴鍋(常州諾基儀器有限公司)，SB25-12D超聲波清洗機(寧波新芝生物科技有限公司)，AL104電子分析天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，感量：0.1 mg]。

1.2試藥 伊曲康唑原料藥(武漢東康源科技有限公司，含量：99.7%，批號：20161101)，卡波姆940(德國BASF公司，批號：WPOG565B，含量：99%)，三乙醇胺(分析純，天津市東麗區天大化學試劑廠，批號：20171015)；二甲亞砜(DMSO，分析純，天津市登豐化學品有限公司，批號：20170901)，聚乙二醇(PEG，北京市海淀會友精細化工，批號：FA7030291，含量：99.9%)，噻酮(南京龍潭精細化工有限公司，批號：20170412，含量：99%)，甘油(鄭州祖輝化工產品有限公司，批號：20171217011，含量：99.7%)，甲醇(色譜純，天津四友精細化妝品有限公司，批號：533776-08616)。

2 方法與結果

2.1伊曲康唑凝膠的制備

2.1.1伊曲康唑凝膠基質與輔料的選擇 卡波姆940是一類非常重要的流變調節劑，三乙醇胺中和卡波姆等酸性高分子凝膠后可得到優質凝膠基質，低濃度即可形成高黏度凝膠[6]。以卡波姆940為基質制得的凝膠易涂展，無油膩性，黏附性和均勻性良好，對皮膚和黏膜無刺激性，不污染衣物，藥物呈零級或近似零級釋放[7]。用卡波姆制備的凝膠濃度一般為0.5%～2.0%[8]。

伊曲康唑為脂溶性藥物，在水中幾乎不溶，油水分配系數(lgP)為5.66，lgP在1～3的藥物具有良好的透皮潛能，需用三乙醇胺作為pH值調節劑。PEG-400為液體，與各種溶劑廣泛相容，是很好的溶劑和增溶劑。DMSO有“萬能溶劑”之稱，是最常用的溶劑，集溶劑和滲透促進劑的優點于一身，是最早和最廣泛研究的滲透促進劑之一，具有高滲透性[9]。

噻酮是近年來發現的新型外用制劑促滲劑。其高效促滲作用得到廣泛關注，將1%噻酮作為藥物促滲劑可提高臨床療效[10]。

2.1.2正交設計優選處方 經查閱文獻，結合預實驗，確定處方為伊曲康唑含量1%、DMSO含量5%、噻酮含量1%、三乙醇胺適量。根據2015年版《中華人民共和國藥典》對凝膠的要求優選處方，確定影響凝膠形成的3個重要因素，分別為卡波姆用量(A，0.5%～2.0%)、甘油用量(B，5%～10%)、PEG-400用量(C，10%～15%)，利用L9(34)正交表進行處方設計優化，見表1。凝膠綜合評分為考察指標，滿分為10分，見表2(均勻度考察：各取上、中、下部位凝膠0.1 g，配制成10 μg·mL-1樣品溶液，比較樣品中伊曲康唑含量，最大值與最小值差異越小越均勻。熱穩定性考察：取樣品1 g，密封，50 ℃恒溫條件下放置1周，每日測定一次樣品中伊曲康唑含量，最大值與最小值的差異越小熱穩定性越好)。

表1 正交實驗的因子水平

Tab.1Factorsandlevelsintheorthogonaldesign%

表2 評分標準

正交設計方案和結果見表3，根據極差大小，判斷因素主次，RA>RB>RC，因此因素A是影響實驗指標的主要因素，最優工藝條件為A2B3C3。圖1說明各因素水平之間存在主效應，凝膠評分隨因子水平而變化。圖2說明三者之間存在相互作用，響應均值的變化取決于另一因子的水平，如A與B的交互作用，行1列2圖表示在A的2水平，橫坐標B的3水平凝膠評分值最大，這個組合最好。因此，處方的最佳配比為卡波姆(A2)1.0%，甘油(B3)10%，PEG-400(C3)15%。根據最佳配比，按照伊曲康唑 1 g，波姆940 1 g，甘油10 mL，PEG-400 15 mL，DMSO 5 mL，噻酮1 mL，三乙醇胺適量，加純化水至100 g，制備伊曲康唑凝膠樣品3批。制成的凝膠細膩均勻，涂展性良好。

表3 正交實驗方案與結果

圖1 主效應圖

圖2 交互作用圖

2.1.3穩定性實驗 取優選后的同一批樣品，分別在室溫放置0，2，4，6，8，12，24 h，測得其峰面積分別為467 834，455 697，455 987，462 025，455 127，449 879，450 120，計算得RSD為1.4%(n=7)，表明該伊曲康唑凝膠在24 h內穩定性良好。

取3批已放置一周的伊曲康唑凝膠樣品各3 g，置于離心管，以10 000 r·min-1離心20 min，凝膠無分層。

2.2液相測定方法的建立

2.2.1色譜條件與溶液的配制 色譜柱：迪瑪ODSC18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(體積比90：10)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：261 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

供試品溶液：精密稱取伊曲康唑凝膠0.1 g，置燒杯中，加入適量甲醇溶解，搖勻，超聲10 min溶解完全后，轉移至100 mL量瓶，用甲醇定容，搖勻，得10 μg·mL-1的溶液。經孔徑0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液為供試品溶液。

對照品溶液：精密稱取干燥至恒重的伊曲康唑原料藥0.02 g于100 mL量瓶，加適量甲醇溶解并定容，搖勻，稀釋后得10 μg·mL-1對照品溶液。

2.2.2標準曲線的繪制 精密稱取伊曲康唑25.00 mg于25 mL量瓶，加適量甲醇，超聲溶解，再用甲醇定容至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1.00 mL至25 mL量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，得40 mg·L-1伊曲康唑儲備液。分別精密量取該儲備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL至10 mL量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，得一系列標準液，分別進樣，采用HPLC法測定，得標準曲線方程A=41 559C+38 110，R2=0.999。結果顯示伊曲康唑在2.00～20.00 μg·mL-1濃度范圍內與峰面積線性關系良好。

2.2.3精密度實驗 取供試液20 μL進樣，測定。取峰面積積分值計算得日內精密度RSD值為1.11%。連續3 d每天測定6份樣品的精密度，方法同上。得日間RSD為1.47%。結果表明精密度良好。

2.2.4回收率實驗 按處方量配制3份不含伊曲康唑的空白凝膠基質，分別加入80%，100%，120%處方量的伊曲康唑原料藥，按“2.1.1”項方法配制溶液，測定其峰面積，計算得回收率分別為96.5%，100.4%，95.3%。平均回收率為97.4%，RSD為1.99%。

2.3體外透皮實驗 取處理好的大鼠皮，剪成適當大小，將鼠皮固定于改進的Franz立式擴散池接受器上口，表皮層在上。其中擴散池的有效滲透面積(A)為3.4 cm2。一般用0.9%氯化鈉溶液作為接受液來模擬人體皮膚生理環境，由于伊曲康唑水溶性很差，故在0.9%氯化鈉溶液中加入PEG-400增加其溶解度，加入PEG-400體積分數為20%。在接受室中加入接受液15 mL，使接受液與處理好的大鼠皮充分接觸。稱取凝膠1.0 g均勻涂在皮膚表面，固定裝置。將此裝置置于溫度為(32.0±0.5)℃TP-2A/3A型智能藥物透皮擴散實驗儀上，磁力攪拌，并開始計時。分別于1，2，4，6，8，10，12，24 h抽取接受液3 mL，并同時加入等體積同溫度空白接受液。取出的接受液過孔徑0.45 μm濾膜，棄去初濾液，取續濾液20 μL進樣，記錄峰面積，求藥物濃度，計算累積釋藥量。

樣品的制備：取凝膠0.1 g，加適量含20%PEG-400的0.9%氯化鈉溶液溶解，超聲10 min，再轉移至100 mL量瓶，用20%PEG-400的0.9%氯化鈉溶液定容即得10 μg·mL-1樣品溶液。

Q=(CnVn+ΣCi·Vi)∕A

式中：Q為單位皮膚累積滲透量，Cn為第n次取樣時藥物濃度，Vn為接受室的總體積，Ci為第n-1次取樣時藥物濃度，Vi為每次取樣的體積，A為有效滲透面積。

伊曲康唑凝膠在大鼠皮膚上的累積滲透量結果， 其24 h皮膚累積滲透量Q為(6.88±0.10) μg·(cm2)-1(n=3)。將樣品各時間點滲透量的均數與時間的關系，分別采用零級動力學、一級動力學、Higuchi方程3種數學模型進行擬合，分析其體外滲透性。以單位面積累積滲透量(Q)對時間(t)分別進行一級、零級、Higuchi方程擬合，結果分別為lgQ=0.015t+0.520(R2=0.899)、Q=0.016t+0.317(R2=0.949)、Q=0.102t1/2+0.188(R2=0.977)。結果表明伊曲康唑凝膠的體外釋放符合Higuchi方程，隨著時間的增加其累積釋放量也逐步增加，在前1 h經皮滲透比較明顯，之后透過較緩慢，分析原因，可能是前1 h由于濃度差的快速透過皮膚，使皮下迅速達到治療濃度，之后就緩釋透過，維持一定治療濃度后藥物緩慢釋放，達到較久的治療作用。

3 討論

伊曲康唑為脂溶性藥物，在水中幾乎不溶，故考慮先將伊曲康唑溶于有機溶劑，再與基質混合均勻。根據2015年版《中華人民共和國藥典》，結合實際凝膠評選標準，利用正交設計進行處方優化，最后篩選出處方最佳配比為卡波姆1.0%，PEG-400 15%，甘油用量10%，制得的凝膠均勻細膩，性質穩定。選擇合適的體外透皮實驗條件是反映藥物透皮吸收特征的重要因素[12]。由于伊曲康唑為脂溶性藥物，故在0.9%氯化鈉溶液中加入PEG-400來增加其溶解度。體外滲透實驗結果表明伊曲康唑凝膠體外釋放率高，該藥物具有緩釋作用效果，有部分伊曲康唑貯存在皮膚中，隨著時間的累積其貯存量也越來越多，這將有利于IH的治療。

目前國內外伊曲康唑的上市制劑有伊曲康唑膠囊、伊曲康唑軟膏、伊曲康唑口服液，用于治療真菌性疾病，HIV陽性或免疫系統損傷患者的口腔或食道念珠菌病[13]。伊曲康唑暫無適于治療IH的制劑，將其制成凝膠有利于藥物充分吸收，且安全性良好，可提高患者依從性，用于治療IH具有價值。后期將對伊曲康唑的藥效學及作用機制做進一步的探索。