雞傳染性法氏囊病活疫苗（NF8株）生產(chǎn)工藝的參數(shù)優(yōu)化

滕穎 葛俊偉

摘要：雞傳染性法氏囊病（IBD）是由傳染性法氏囊病病毒引起的、主要侵害幼齡雞的一種急性、高度接觸性傳染病。用于防治IBD的疫苗有活疫苗、滅活疫苗和其他疫苗。我國已經(jīng)批準(zhǔn)新獸藥注冊和進(jìn)口注冊的IBD活疫苗很多，包括低毒力株活疫苗、中等毒力株活疫苗和中等偏強(qiáng)毒力株活疫苗。中等毒力株活疫苗NF8株既具有一定毒力，可突破一定水平的母源抗體，又不引起法氏囊不可逆的損傷。在制苗用毒液的制備工藝環(huán)節(jié)中，由于毒種不同的稀釋倍數(shù)、雞胚不同的培養(yǎng)時間，對雞胚死亡的高峰時間、收獲單產(chǎn)結(jié)果都不同。為了得到更穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量，適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)還需要進(jìn)一步優(yōu)化疫苗的生產(chǎn)工藝參數(shù)。

關(guān)鍵詞：雞;傳染性法氏囊病活疫苗（NF8株）;雞胚接種日齡;毒種稀釋倍數(shù);培養(yǎng)時間

中圖分類號：S852.5 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：2095-9737（2019）05-0011-01

1 材料

毒種：雞傳染性法氏囊病病毒（NF8株），批號201802，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司提供，符合毒種標(biāo)準(zhǔn)要求。

雞胚：選用哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司SPF雞場提供的SPF種蛋，分別孵化成10～11日齡的雞胚。

0.85%生理鹽水：由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司配制、滅菌。

2 方法

2.1 接毒量優(yōu)化

將雞傳染性法氏囊病病毒（NF8株）毒種用生理鹽水作50倍、100倍和500倍稀釋，分別經(jīng)尿囊腔接種10～11日齡SPF雞胚150枚，接毒量為0.1 mL/枚，并設(shè)10枚10～11日齡SPF雞胚作為空白對照，置37℃繼續(xù)培養(yǎng)。雞胚接種后，將24 h前死亡的雞胚棄去，后每6 h撿胚1次，死胚取出氣室向上，置2～8℃冷卻12 h后，用碘酊消毒氣室部位，然后無菌收取胎兒。在收取胎兒前對每枚雞胚進(jìn)行檢查，凡胎兒腐敗、胚液渾濁及有任何可疑污染者棄去;各組收取的胎兒放于不同滅菌的容器內(nèi)，測定病毒含量和單胚收獲量。

2.2 收毒時間優(yōu)化

將雞傳染性法氏囊病病毒（NF8株）毒種作100倍稀釋，分別經(jīng)尿囊腔接種10～11日齡SPF雞胚150枚，每胚0.1 mL，并設(shè)10枚10～11日齡SPF雞胚作為空白對照，置36℃繼續(xù)培養(yǎng)，雞胚接種后，將24 h前死亡的雞胚棄去，后每6 h撿胚1次，培養(yǎng)至96 h。取出死亡雞胚氣室向上，置2～8℃冷卻12 h后，用碘酊消毒氣室部位，然后無菌收取胎兒。在收取胎兒前對每枚雞胚進(jìn)行檢查，凡胎兒腐敗、胚液渾濁及有任何可疑污染者棄去;各組收取的胎兒放于不同滅菌的容器內(nèi)，測定病毒含量和單胚收獲量。

3 結(jié)果與分析

3.1 病毒稀釋度優(yōu)化結(jié)果

將雞傳染性法氏囊病病毒（NF8株）毒種用生理鹽水作50倍、100倍和500倍稀釋，分別經(jīng)尿囊腔接種10～11日齡SPF雞胚50枚，從結(jié)果可見，當(dāng)稀釋倍數(shù)為50倍及100倍時，單產(chǎn)和病毒含量均相對較高，結(jié)果見表1。考慮到大規(guī)模生產(chǎn)的成本因素，選擇100倍稀釋為最佳病毒稀釋度。

3.2 收毒時間優(yōu)化結(jié)果

將雞傳染性法氏囊病病毒（NF8株）毒種以100倍稀釋，分別經(jīng)尿囊腔接種10～11日齡SPF雞胚180枚。從結(jié)果可見，48 h和72 h收獲的原液病毒含量（ELD50）均相對較高，96 h病毒含量有所下降。在胚液的收獲量上，48 h獲的量明顯小于72 h和96 h獲的胚液量，結(jié)果見表2。從大規(guī)模生產(chǎn)的成本出發(fā)，選擇72 h獲為最佳收毒時間。

4 討論

本次雞傳染性法氏囊病活疫苗（NF8株）生產(chǎn)工藝的參數(shù)優(yōu)化試驗(yàn)，意在尋找雞傳染性法氏囊病在雞胚繁殖過程中，在確保半成品病毒含量達(dá)到規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)要求的前提下提高收率，通過選擇不同原液收獲時間及毒種稀釋倍數(shù)的試驗(yàn)比較，將雞傳染性法氏囊病活疫苗（NF8株）做100倍稀釋接種10日齡雞胚，雞胚死亡高峰向后推遲，收獲單產(chǎn)提高。

在該生產(chǎn)工藝條件下，收獲的病毒原液的病毒含量及單胚收獲量均可達(dá)到規(guī)程指標(biāo)要求。