烏藥、大黃對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸屏障功能的影響

馬留學(xué)　劉偉國　鄒忠東　李龑

【摘要】 目的：研究烏藥、大黃對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸屏障功能的影響。方法：60只SD大鼠均建立重癥急性胰腺炎模型，造模后隨機(jī)分為四組，對(duì)照組（A組）予0.9%氯化鈉注射液灌胃，大鼠于造模后死亡或第4天處死取小腸、結(jié)腸送病理，大黃組（B組）予大黃水煎液灌胃，烏藥組（C組）予烏藥水煎液灌胃，烏藥+大黃組（D組）予烏藥、大黃水煎液灌胃，干預(yù)3天（第4天）全部處死，取小腸、結(jié)腸送病理、末端回腸行腸黏膜通透性檢測，處死前下腔靜脈取血行內(nèi)毒素、DAO、D-乳酸檢測。結(jié)果：四組黏膜結(jié)構(gòu)的改變、修復(fù)有顯著差異，其中B組、C組、D組均優(yōu)于A組，且D組優(yōu)于B組及C組。四組腸黏膜通透性有顯著性差異，其中B組、C組、D組均優(yōu)于A組，且D組優(yōu)于B組及C組（P<0.05）。各組內(nèi)毒素、DAO、D-乳酸有顯著性差異，其中B組、C組、D組均優(yōu)于A組，且D組優(yōu)于B組及C組（P<0.05）。結(jié)論：大黃水煎液對(duì)重癥急性胰腺炎大腸黏膜組織損傷有修復(fù)作用，烏藥水煎液對(duì)重癥急性胰腺炎小腸黏膜組織損傷有修復(fù)作用，兩藥合用作用效果更佳。

【關(guān)鍵詞】 重癥急性胰腺炎; 腸屏障功能; 烏藥; 大黃; 大鼠

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.13.001 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2019）13-000-04

Effects of Wuyao，Dahuang on Intestinal Barrier Function in Severe Acute Pancreatitis Rats/MA Liuxue，LIU Weiguo，ZOU Zhongdong，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（13）：-4

【Abstract】 Objective：To study the effect of Wuyao，Dahuang on intestinal barrier function in severe acute pancreatitis.Method：A total of 60 SD rat model of severe acute pancreatitis，after building randomly divided into 4 groups，control group（group A） used 0.9% Sodium Chloride Injection to fill the stomach，the rat died or 4 days after building executed in small intestine，colon pathological，Dahuang group（group B） used the Dahuang decoction lavage fluid，Wuyao group（group C） used the black liquid medicine decoction lavage，Wuyao+Dahuang group（group D） used the decoction of Wuyao，Dahuang lavage fluid.Intervention for 3 days（the fourth day），the intestinal mucosa was detected by intestinal tract，colon pathology and terminal ileum，The intravenous blood endotoxin，DAO，d-lactic acid test were taken in the inferior vena cava.Result：The changes of repair mucous membrane structure had significant differences among the four groups，and group B，C，D were superior to group A，group D was better than that of group B and group C.The intestinal mucous membrane permeability among the four groups had significant differences，and group B，C，D were superior to group A，group D was better than that of group B and group C（P<0.05）.The endotoxin，DAO，D-lactic acid had significant difference among the four groups，and group B，C，D were superior to group A，group D was better than that of group B and group C（P<0.05）.Conclusion：Dahuang Decoction can repair the damage of large intestinal mucosa in severe acute pancreatitis.Wuyao Decoction can repair the damage of small intestinal mucosa in severe acute pancreatitis.The combination of the two drugs has better effect.

【Key words】 Severe acute pancreatitis; Intestinal barrier dysfunction; Wuyao; Dahuang; Rats

First-authors address：Wuwei Liangzhou Hospital，Wuwei 733000，China

重癥胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是一種發(fā)病及進(jìn)展迅速，同時(shí)伴發(fā)多種并發(fā)癥狀、預(yù)后差的消化系統(tǒng)危重疾病。研究證明，腸道作為SAP所致并發(fā)癥的中心器官和能動(dòng)器官，能引起全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）和器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）。而SAP引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，造成嚴(yán)重并發(fā)癥的關(guān)鍵問題在于腸黏膜屏障功能（intestinal barrier function，IBF）的破壞，SAP預(yù)后的關(guān)鍵在于如何改善并維持腸屏障功能，并積極預(yù)防腸源性感染。因此，IBF成為當(dāng)今SAP研究的熱點(diǎn)[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，急性壞死性胰腺炎（ANP）大鼠72 h后空腸肌移動(dòng)復(fù)合波周期長度較對(duì)照組明顯延長[3-5]。文獻(xiàn)[6-7]發(fā)現(xiàn)MSAP患者全部和部分結(jié)腸通過時(shí)間（主要是右和左半結(jié)腸）較輕癥胰腺炎（MAP）患者及對(duì)照組明顯延長。小鼠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，烏藥可促進(jìn)胃腸收縮，改善小腸炭末推進(jìn)率[8]。結(jié)合蒽醌作為大黃的有效成分是有良好的瀉下作用[9-12]。本研究利用多角度觀察實(shí)驗(yàn)性SAP大鼠腸黏膜屏障的變化，包括結(jié)腸與小腸結(jié)構(gòu)的損傷與修復(fù)，末端回腸通透性、血清內(nèi)毒素、DAO、D-乳酸。進(jìn)而評(píng)價(jià)大黃、烏藥對(duì)重癥胰腺炎腸黏膜屏障的保護(hù)作用，說明大黃及烏藥在體內(nèi)的作用部位為臨床用藥提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只（福州總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科提供），體重250～300 g。試劑：牛磺膽酸鈉，由Sigma公司提供（純度95%）。

1.2 方法

1.2.1 SAP大鼠動(dòng)物模型的建立 實(shí)驗(yàn)大鼠禁食12 h，自由飲水，自胰尾部開始，利用1 ml注射器注入3.8%牛磺膽酸鈉1 ml于被膜下，多點(diǎn)緩慢均勻，使胰腺整個(gè)均勻隆起。短時(shí)間內(nèi)，可見胰腺組織充血、水腫，包膜下胰腺組織成點(diǎn)狀或小片狀出血。

1.2.2 中藥湯劑制備方法 大黃、烏藥均由福州總醫(yī)院中藥房鑒定、提供。分別取烏藥12 g，大黃24 g，蒸餾水浸泡1 h，利用自動(dòng)煎藥機(jī)分別將大黃煎煮15 min，烏藥煎煮30 min，冷卻至37 ℃～38 ℃后，密封包裝，備用。

1.2.3 分組及給藥方法 按1.2.1的方法將全部動(dòng)物造模，利用全自動(dòng)血液生化分析儀檢測淀粉酶含量，均高于2 000 U/L提示造模成功。隨機(jī)將其平均分為對(duì)照組（A組）、大黃組（B組）、烏藥組（C組）、烏藥+大黃組（D組），每組15只大鼠。自第2天開始，連續(xù)3 d每組分別給藥，按1.5 ml/100 g灌胃。其中A組予0.9%氯化鈉注射液，連續(xù)3 d，大鼠于造模后死亡或第4天處死取小腸、結(jié)腸送病理檢查;B組第2天予大黃水煎液，C組第2天予烏藥水煎液，D組第2天予烏藥、大黃水煎液。治療3 d后，取前下腔靜脈血檢測血清中DAO、D-乳酸濃及內(nèi)毒素濃度（ELISA法），B、C、D組大鼠全部處死，取小腸和結(jié)腸組織送病理檢查，取末端空腸予腸黏膜通透性檢測（測FITC-Dextran量）。

1.2.4 標(biāo)本采集方法 下腔靜脈取血以3 000 r/min離心15 min，ELISA檢測血清DAO、D-乳酸濃及內(nèi)毒素濃度。處死后即刻剪取小腸（回盲部5 cm處空腸）、結(jié)腸，以生理鹽水輕柔沖洗腸腔內(nèi)容物后，無菌濾紙吸干水分，經(jīng)福爾馬林固定液固定，

24 h后，常規(guī)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，福州總醫(yī)院病理科行染色檢查，另取末端回腸生理鹽水輕柔沖洗，將一端結(jié)扎封閉，另一端灌入200 μl濃度為40 mg/ml的FITC-Dextran溶液后結(jié)扎，將腸段放入裝有20 ml生理鹽水的小杯中，37 ℃搖60 min，將熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)定為0、10、20、30、40、50 μg/ml梯度，檢測取腸囊外溶液FITC-Dextran熒光強(qiáng)度，換算為μg/ml，計(jì)算出20 ml生理鹽水內(nèi)總的FITC-Dextran量，即反映腸黏膜通透性的變化[13]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察各組腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷及修復(fù)情況、腸黏膜通透性變化情況、血清內(nèi)毒素、DAO及D-乳酸濃度變化情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）表示，多組比較采用單因素方差分析F檢驗(yàn)，均為雙側(cè)檢測，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SAP大鼠大體觀察

術(shù)后第4天可見大片胰腺壞死，血性腹水少量，可見胰周脂肪皂化、出血，胃膨脹，小腸腸腔擴(kuò)張、淤血，蠕動(dòng)減慢或消失，顏色變暗，腸壁偶有炎性黏液，剖檢可見腸黏膜充血、腫脹、糜爛，偶有壞死，證明腸損傷嚴(yán)重，部分結(jié)腸擴(kuò)張，說明重癥胰腺炎造模成功，見圖1。

2.2 小腸組織病理學(xué)改變

HE染色觀察：結(jié)果顯示，A組腸黏膜損傷嚴(yán)重，腸黏膜各層（下層、肌層、漿膜層）壞死，絨毛脫落，炎細(xì)胞浸潤;B組腸黏膜破壞，絨毛壞死脫落，炎細(xì)胞浸潤、水腫，固有層殘存少量腺體;C組腸黏膜有大量炎細(xì)胞浸潤，絨毛血管擴(kuò)張充血，偶有上皮細(xì)胞壞死，脫落;D組腸絨毛形態(tài)基本完整，部分絨毛變鈍，固有層腺體豐富，間質(zhì)少量炎細(xì)胞浸潤，見圖2。

2.3 結(jié)腸病理學(xué)改變

HE染色觀察：A組腸損傷嚴(yán)重，腸黏膜層、肌層及漿膜層壞死;B組腸黏膜可見較多炎細(xì)胞浸潤，部分腺體破壞，黏膜及黏膜下血管輕度擴(kuò)張充血;C組腸黏膜可見較多炎細(xì)胞浸潤，部分腺體破壞;D組腸黏膜完整，腺體結(jié)構(gòu)完好，間質(zhì)少量炎細(xì)胞浸潤，見圖3。