桉樹組培工廠化育苗中培養(yǎng)基的調(diào)配研究

摘要：桉樹作為我國重要的林業(yè)資源，由于桉樹具有速生豐產(chǎn)林造林的優(yōu)勢，因此也成為了我國造林主要樹種，在林產(chǎn)業(yè)中的比重非常大。對桉樹組培工廠化育苗中培養(yǎng)基的調(diào)配展開研究，采用了尾巨桉無性系組培苗進(jìn)行試驗，分析影響培養(yǎng)基性能的主要因素。基于此，本文桉樹組培工廠化育苗中培養(yǎng)基的調(diào)配方法與影響因素，繼而提出桉樹組培技術(shù)。

關(guān)鍵詞：桉樹組培;培養(yǎng)基;調(diào)配;組培技術(shù)

中圖分類號：S723.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20190615031

引言

桉樹生長速度非常快，并且在我國南方熱帶、亞熱帶地區(qū)分布廣泛，林業(yè)領(lǐng)域中，桉樹由于產(chǎn)量高、質(zhì)量好，成為了主要的造林育林品種。當(dāng)今人們對木產(chǎn)品需求量越來越高，這也推動了桉樹組培工廠化育苗技術(shù)的發(fā)展。但由于桉樹組培育苗具有周期性特點，這也突出了培養(yǎng)基調(diào)配的重要性，科學(xué)調(diào)整培養(yǎng)基，保證培養(yǎng)基的有效性，實現(xiàn)繼代增殖的目標(biāo)，提升有效發(fā)芽率，最終會落實到林產(chǎn)品產(chǎn)能方面。所以，加強桉樹組培工程化育苗中培養(yǎng)基的研究有著重要意義。

1桉樹組培的重要意義

1.1優(yōu)良遺傳材料快速繁殖

新的優(yōu)良品種、優(yōu)良單株可以在短期內(nèi)大量繁殖，并且在培育1～2a即可生產(chǎn)。

1.2脫毒良種苗培養(yǎng)以及無病毒苗繁殖

通過莖尖培養(yǎng)和脫出病毒，即可提升桉樹的生產(chǎn)效能。對于桉樹來說，需要重點脫出青枯病病毒。

1.3特殊育種材料的快速繁衍

眾所周知多倍體最大的特點就是不育，想要繁殖只能通過無性繁殖，但是多倍體在無性繁殖之后可以保留性能。例如楊樹多倍體在實際試驗中就取得了很大的成就，在桉樹領(lǐng)域也有很大的發(fā)展空間。

1.4基因工程植株快速繁衍

通過良好的母體進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)基因培養(yǎng)，即可得到轉(zhuǎn)基因植物，這些植物不僅帶有母體優(yōu)勢，還可以生成新的能力，如抗病蟲害、提升產(chǎn)能等。受體除了母體，還有器官、組織等，采用根癌農(nóng)桿菌作為載體，在組織器官中轉(zhuǎn)入基因，做好組織培養(yǎng)從而獲取性能更強的轉(zhuǎn)基因植株。

1.5自然、人工誘變有用突變體快速繁衍

優(yōu)良遺傳材料主要是芽變材料、人工誘變材料，通過培養(yǎng)組織的方法繼代繁殖，提高生產(chǎn)效能。

1.6離子保存種質(zhì)快速繁衍

無菌材料采用超低溫保存方法，包括體細(xì)胞、無菌芽等，通過組織培養(yǎng)的方式即可進(jìn)行繁殖。

2桉樹組培工廠化育苗中培養(yǎng)基調(diào)配與影響因素2.1試驗材料

以巨尾桉優(yōu)良單株離體芽器官誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)散的組培繼代作為實驗材料。

2.2試驗方法

2.2.1培養(yǎng)基中添加劑那不同瓊脂

將經(jīng)相同繼代培養(yǎng)的繼代苗加接入到添加6.8g/L 瓊脂條和3.8g/L 瓊脂粉的培養(yǎng)基當(dāng)中，使用50個接種瓶同時培育，連續(xù)接種3代進(jìn)，分析每一代的性能，將變異苗剔除，變異苗率檢測每隔1個月進(jìn)行1次。

2.2.2培養(yǎng)基中添加不同濃度激素組合

基本培養(yǎng)基內(nèi)加入濃度不同的激素組合的6-BA和NAA，分為50個試驗體，重復(fù)3次，在1個月之后進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2.2.3大量元素濃度對桉樹生根率、后續(xù)成長的影響

培養(yǎng)基當(dāng)中元素濃度分別為50%、40%、25%、10%，每一處理50瓶，重復(fù)3次，每隔15d進(jìn)行生根率統(tǒng)計，在30d、40d、50d分別觀察試驗情況。

2.2.4ABT、NAA對生根、組培苗的影響

經(jīng)基本壯苗培養(yǎng)基6-BA+NAA 3代培養(yǎng)之后，在元素濃度為40%基礎(chǔ)上，附加生長素濃度為0.5mg/L的ABT和NAA，每一處理50瓶，重復(fù)3次，15d后對生根率、根長、苗高進(jìn)行記錄，獲取平均值。

2.3結(jié)果討論

2.3.1瓊脂類型

在培養(yǎng)基下，變異苗率會隨著瓊脂添加率變化而產(chǎn)生變化。在添加了瓊脂條之后，不同代數(shù)變異苗率十分穩(wěn)定，1～3代在4%之內(nèi)。而添加了瓊脂粉之后，會隨著代數(shù)增加，變異苗率持續(xù)增加，3代變異苗率提升到了25%，是1代的9倍。再者添加了瓊脂條和瓊脂粉之后，1代培養(yǎng)變異苗率的差異不大，2代后培養(yǎng)的差異變化明顯。由此可見，在添加瓊脂粉培養(yǎng)基中的變異苗表現(xiàn)為莖呈現(xiàn)壓扁的不規(guī)則形狀，并且葉片缺失，瓊脂條變異率低，苗木表現(xiàn)十分正常。

2.3.2繼代培養(yǎng)階段中激素農(nóng)速

在繼代增殖培養(yǎng)過程中，需要選擇正確的激素濃度組合，這也是獲得理想繼代苗的關(guān)鍵。在繼代增殖中，6-BA濃度從0.25～0.30mg/L ，NAA0.10～0.15mg/L 皆可，但是繼代苗生長有所差異。在試驗當(dāng)中，如果6-BA濃度超過了0.3mg/L時，玻璃苗數(shù)量明顯增加。在實際生產(chǎn)應(yīng)用中，使用6-BA濃度在0.27～0.3mg/L 的情況下，增殖繼代苗較為理想，所以濃度最好不超過3.0mg/L 。在壯苗階段，1.5cm以上有效苗率存在著差異，試驗觀察中6-BA濃度分別在0.27mg/L 和0.25mg/L時，有效苗率差別不大，但繼代增殖存在著明顯差異。在壯苗生根過程中，由于采用了邊生根邊繼代的方法，所以該階段要嚴(yán)格控制培養(yǎng)基的激素濃度，不僅要能夠確保有效苗數(shù)量，還需要在一定的增值苗中實現(xiàn)再次繼代，通過對比分析可知，6-BA濃度為0.27mg/L ，NAA濃度為0.10～0.15mg/L配比最佳，在實際生產(chǎn)當(dāng)中可以根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整。

2.3.3生根培育階段大量元素濃度選擇

在經(jīng)附加相同種類、濃度的細(xì)胞分裂素、生長素的壯苗生長完畢之后，生根培養(yǎng)基附加相同類型、濃度的生長素，在試驗完畢之后，發(fā)現(xiàn)大量元素濃度與組培苗生根率成反比例，也就是大量元素濃度降低生根率升高，但后續(xù)生長情況表現(xiàn)出了明顯差異。大量元素濃度在50%時，生根率達(dá)到了90%以上，在接種后50d性能良好，少部分葉片發(fā)黃，大部分依然嫩綠;如果大量元素濃度在40%以內(nèi)時，生根率也超過了95%，在接種50d苗木葉色濃綠、生長態(tài)勢良好，葉片變黃數(shù)量非常少;大量元素濃度在25%以下時，苗木生根率有了明顯增高，達(dá)到了98%以上，但是后續(xù)生長受到了嚴(yán)重的影響，在接種的30d之后苗木葉尖位置變黃，待到40d之后大部分葉子變黃，待到50d之后葉色整體偏黃并枯萎。

2.3.4生根培養(yǎng)階段激素種類和濃度配比

在壯苗期通過6-BA0.27mg/L和NAA0.15mg/L配比獲得生根瓶苗，經(jīng)過了3代繼代培養(yǎng)，瓶苗生根率明顯降低，之后通過調(diào)整，使用ABT0.5mg/L和NAA0.5mg/L可以獲得較好的生根率，達(dá)到了95%左右，根長與苗高生長不同，15d之后根長為0.5～0.8cm，苗高在1.5～1.8cm范圍。

3培養(yǎng)基的制作要點與建議

通過上述相關(guān)方案進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基調(diào)配過程精度要求高、實施環(huán)節(jié)復(fù)雜，如果一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)了問題會影響整個培養(yǎng)基性能。從經(jīng)濟(jì)性方面考慮，要嚴(yán)格控制每種材料的應(yīng)用量，由于過去都是采用瓊脂粉，但是在繼代培養(yǎng)之后會增加變異苗率，這是因為瓊脂中含有大量重金屬、微量元素。所以在培養(yǎng)基調(diào)配當(dāng)中盡可能使用瓊脂條，在生根培養(yǎng)基中添加瓊脂粉。

繼代培養(yǎng)激素濃度調(diào)配較為粗放，為了能夠提升繼代增殖效率，需要將6-BA控制在0.25～0.30mg/L之間，NAAS控制在0.10～0.15mg/L之間。壯苗階段培養(yǎng)基調(diào)配需要根據(jù)有效苗率、繼代增殖進(jìn)行考慮，此時的6-BA濃度為0.27mg/L，NAA濃度為0.10～0.15mg/L范圍。

大量元素含量會直接影響升高，需要重點考慮生根率、生長情況、后續(xù)生長等，所以在培養(yǎng)基調(diào)配中，要采用40%配比最為理想。由于苗木后續(xù)生長存在著差異，在大量元素含量40%情況下，生根苗放置時間更長，多達(dá)50d，而大量元素含量在25%情況下，可以放置30d，而大量元素含量在10%時，放置時間非常短，不宜采用。

生根培養(yǎng)基當(dāng)中，需要控制激素濃度，在3代培養(yǎng)之后需要調(diào)節(jié)濃度，否則會降低生根率，最佳添加量為ABT0.5mg/L和NAA0.5mg/L。

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作者簡介：黃全東（1981-），男，本科，工程師，研究方向：森林培育、林木種苗快繁研究和苗木工廠化生產(chǎn)。