不同劑量阿托伐他汀對急性腦缺血/再灌注損傷大鼠血管內皮功能的影響及其與自噬相關信號通路Ca2+/AMPK/mTOR的關系研究

李玉竹，鄒梅，于周

過去20年，全球年齡標化腦卒中病死率所有下降，但腦卒中新發患者數量及其全球總負擔巨大，且仍在增加。據統計，腦卒中居我國城市和農村居民致殘和致死原因第一位，其中缺血性腦卒中約占70%［1］。缺血性腦卒中是由動脈粥樣硬化引起顱內外血管閉塞或狹窄而導致腦供血不足，進而引發的腦組織壞死，因此其治療重點為盡快恢復腦組織血供并抑制腦缺血/再灌注損傷［1-2］。既往研究表明，腦缺血灶中細胞大量死亡的同時可形成新生血管、誘導血管內皮細胞增殖，進而改善腦組織血供，恢復腦功能［3］。血管內皮功能與自噬密切相關，但自噬是柄“雙刃劍”，正常情況下其可保護機體內皮細胞結構及功能完整，過度激活后又會使腦缺血/再灌注損傷加重。

阿托伐他汀是一種新型人工合成降脂藥，可有效降低血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及總膽固醇水平，阻止血栓形成及改善血管內皮功能，在預防急性心血管事件及延緩動脈粥樣硬化進展方面具有重要作用［4-5］，但其與自噬的關系研究報道較少。本研究旨在探討不同劑量阿托伐他汀對急性腦缺血/再灌注損傷大鼠血管內皮功能的影響，并分析其與自噬相關信號通路Ca2+/AMPK/mTOR的關系，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 本實驗于2017年6—12月完成。選取75只SPF級Wistar雄性大鼠，6周齡，體質量190～210 g，平均體質量（201.4±4.1）g，均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物合格許可證號：SCXK（京）2018-23。大鼠分籠飼養，每籠5只，室溫維持在22～26 ℃，相對濕度為55%～65%，晝夜循環，保持12 h光照、12 h黑暗，灌胃、添加飼料及換水等均有專人負責。常規飼養1周后開始實驗。

1.2 主要藥物、試劑及儀器

1.2.1 主要藥物 阿托伐他汀鈣片（大連輝瑞制藥有限公司生產，生產批號：L29154）；自制阿托伐他汀混懸液：將阿托伐他汀鈣片研磨為粉，阿托伐他汀鈣片與0.9%氯化鈉溶液以1 mg:2 ml比例混合。

1.2.2 主要試劑 一氧化氮合酶（NOS）、一氧化氮（NO）試劑盒（南京建成生物工程研究所生產），DAB顯色劑、SP試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司生產），兔抗鼠血管內皮生長因子（VEGF）單克隆抗體（美國Santa Cruz Biotechnology公司生產），LC3-Ⅱ、Beclin-1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）多克隆抗體（美國Proteintech公司生產）。

1.2.3 主要儀器 病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司生產，型號：PHY-Ⅲ），轉輪式切片機（德國萊卡公司生產，型號：萊卡-2016），包埋機（常州市中威電子儀器有限公司生產，型號：BMJ-Ⅲ），全自動封閉式組織脫水機（常州市中威電子儀器有限公司生產，型號：TSJ-Ⅱ），電熱恒溫鼓風干燥箱（美國KIMBLE公司生產，型號：DHG-9023A），數字顯示隔水式電熱恒溫培養箱（美國KIMBLE公司生產，型號：PYX-DHS），漩渦混合器（美國KIMBLE公司生產，型號：XW-80A），離心機（美國KIMBLE公司生產，型號：TGL-168）。

1.3 分組及實驗方法 采用隨機數字表法將所有大鼠分為假手術組（A組）、模型制備組（B組）、阿托伐他汀低劑量組（C組）、阿托伐他汀中劑量組（D組）及阿托伐他汀高劑量組（D組），每組15只。B、C、D、E組大鼠制備急性腦缺血/再灌注損傷模型。模型制備前2周，C、D、E組大鼠分別給予阿托伐他汀5、10、20 mg/kg混懸液灌胃，A組和B組大鼠給予等劑量0.9%氯化鈉溶液灌胃，均1次/d。

1.4 急性腦缺血/再灌注損傷模型制備 采用改良Zea-Longa線栓法［6］制備急性腦缺血/再灌注損傷模型，具體如下：腹腔注射2.4%水合氯醛0.8 ml/100 g麻醉大鼠，麻醉滿意后固定大鼠背部，常規消毒后于頸部正中作一縱向切口，依次暴露右側翼腭動脈、頸總動脈、頸內動脈及頸外動脈，將頸總動脈近心端與頸外動脈根部結扎，在頸內動脈起始部位打活結。動脈夾夾于頸內動脈近顱端，采用眼科剪在頸總動脈結扎位置遠端剪一斜口，插入制備好的線栓，感覺到阻力后停止，備線結扎后固定線栓，縫合切口、消毒。以大鼠蘇醒后出現右側Horner征（眼球內陷，眼裂變小）及左側以前肢為重的偏癱為模型制備成功。A組大鼠于頸部正中作一縱向切口，依次暴露右側翼腭動脈、頸總動脈、頸內動脈及頸外動脈。

1.5 觀察指標

1.5.1 神經功能缺損評分 再灌注2、6、24、48、72 h時分別從5組隨機選取3只大鼠，采用Zea-Longa評分法評估大鼠神經功能缺損評分，其中無神經功能缺損癥狀計0分，無法伸展對側前爪計1分，行走時向偏癱一側轉圈計2分，行走時向偏癱一側傾斜計3分，意識喪失、無法自發行走計4分［7］。

1.5.2 腦梗死體積 神經功能缺損評分結束后腹腔注射2.4%水合氯醛0.8 ml/100 g麻醉大鼠，斷頸處死，取腦組織速凍10 min，在視神經交叉處向前作冠狀切片，共4個腦片，厚度2 mm，放置在2%的TTC磷酸鹽緩沖液中孵育30 min，采用10%福爾馬林固定，其中梗死組織無著色、正常組織著深紅色，數碼相機正反面拍照，采用病理圖像分析儀檢測每片總面積與梗死面積，梗死體積/大腦總體積=（各片正反面梗死面積總和/2×片厚）/（各片正反面總面積總和/2×片厚）×100%。

1.5.3 腦組織病理形態 選取腦組織，緩沖液沖洗，10%甲醛固定后行酒精梯度脫水、透明，石蠟包埋后切片，厚度為4 mm，常規行HE染色，光鏡下觀察5組大鼠腦組織病理形態。

1.5.4 神經元凋亡率 采用TUNEL法檢測5組大鼠再灌注72 h神經元凋亡率，具體如下：腦組織切片經梯度酒精脫蠟，再滴加不含DNase酶的蛋白酶K溶液20 mg/ml，37 ℃冰箱內放置20 min，采用PBS洗滌；加入新鮮配制的3%過氧化氫（H2O2）溶液于室溫下孵育10 min，采用PBS洗滌；每個樣品內滴加新鮮配制的生物素標記液50 ml，放置在暗盒內維持切片濕潤，37 ℃環境下孵育60 min，采用PBS洗滌；配制DAB顯色液和Streptavidin-HRP工作液，每個樣品內滴加50 ml，放置在暗盒內維持切片濕潤，孵育30 min，采用PBS洗滌；常規梯度酒精脫水后透明，封片。光鏡下觀察切片中棕褐色為凋亡神經元，高倍鏡下每張切片計數8個不同視野并取平均值。

1.5.5 腦組織VEGF表達情況 采用免疫組化法檢測5組大鼠再灌注2、24、72 h腦組織VEGF表達情況，具體如下：石蠟切片脫蠟后將內源性過氧化物酶滅活，熱修復暴露抗原位點，置于孵育盒內，使用PBS溶液沖洗3次，3 min/次，加入山羊血清，孵育10 min，再加入一抗兔抗鼠VEGF單克隆抗體，4 ℃過夜。PBS溶液沖洗3次，5 min/次，滴入二抗在室溫下孵育10 min，PBS溶液沖洗3次，3 min/次，滴入辣根酶標記的鏈酶卵白素，采用DAB顯色劑顯色，中性樹膠封片。圖像中棕黃色細胞為陽性細胞，采用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件檢測陽性細胞光密度。

1.5.6 腦組織NOS、NO含量 采用化學比色法檢測5組大鼠再灌注2、24、72 h腦組織NOS、NO含量，具體如下：取腦組織1份，采用4 ℃預冷的0.9%氯化鈉溶液沖洗腦組織血液，0.1 g勻漿，1 500×g離心10 min，取上清液，采用化學比色法檢測5組大鼠腦組織NOS、NO含量，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.5.7 腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、AMPK及mTOR蛋白表達情況 采用Western-blot法檢測5組大鼠再灌注72 h腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、AMPK及mTOR蛋白表達情況，具體如下：選取腦組織研磨，經組織裂解后上樣電泳，起始電壓80 V，溴酚藍染料前緣進入到分離膠上緣后電壓增加到100 V，溴酚藍染料泳出分離膠下緣后電泳結束。采用半干電轉移儀于PVDF膜內行蛋白質電轉移，恒流30 mA，連續90 min。PVDF膜取出后采用5% TBST脫脂奶粉封閉，震蕩60 min。封閉結束后采用TNS-T漂洗液洗膜3次，10 min/次，然后將膜轉移到雜交袋內，加入適量漂洗液稀釋抗體，封口后4 ℃孵育過夜；TBST漂洗液洗膜3次，10 min/次，在加入漂洗液稀釋的辣根過氧化物酶標記二抗，震蕩60 min。PVDF膜放置在電化學發光（ECL）顯色液內震蕩溫育5 min，暗室下曝光、顯影及定影。清水沖洗后晾干掃描，采用IPP軟件分析掃描圖像目標條帶灰度值。目標蛋白相對表達量=目標蛋白條帶灰度值/內參條帶灰度值。

1.6 統計學方法 采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 神經功能缺損評分 再灌注2、6、24、48、72 h，A組大鼠神經功能缺損評分均為0；B、C、D、E組大鼠神經功能缺損評分比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；其中D組和E組大鼠神經功能缺損評分低于B組、C組，差異有統計學意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 梗死體積/大腦總體積 再灌注2、6、24、48、72 h，A組大鼠梗死體積/大腦總體積均為0；B、C、D、E組大鼠梗死體積/大腦總體積比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；其中D組和E組大鼠梗死體積/大腦總體積低于B組、C組，差異有統計學意義（P＜0.05，見表2）。

表1 B、C、D、E組大鼠再灌注2、6、24、48、72 h神經功能缺損評分比較（±s，分）Table 1 Comparison of neurological deficit score in groups B，C，D and E 2，6，24，48 and 72 hours after reperfusion

表1 B、C、D、E組大鼠再灌注2、6、24、48、72 h神經功能缺損評分比較（±s，分）Table 1 Comparison of neurological deficit score in groups B，C，D and E 2，6，24，48 and 72 hours after reperfusion

注：與B組比較，aP＜0.05；與C組比較，bP＜0.05

組別 只數 再灌注2 h 再灌注6 h 再灌注24 h 再灌注48 h 再灌注72 h B組 15 1.81±0.36 2.30±0.48 2.79±0.54 3.41±0.62 3.59±0.65 C組 15 1.80±0.35 2.29±0.46 2.76±0.52 3.38±0.60 3.56±0.62 D 組 15 1.56±0.34ab 2.09±0.50ab 1.65±0.53ab 2.53±0.61ab 2.60±0.63ab E組 15 1.52±0.32ab 2.06±0.49ab 1.62±0.51ab 2.58±0.62ab 2.59±0.61ab F值 4.197 4.013 5.752 5.009 6.751 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表2 B、C、D、E組大鼠再灌注2、6、24、48、72 h梗死體積/大腦總體積比較（±s，%）Table 2 Comparison of infarction volume/total brain volume in groups B，C，D and E 2，6，24，48 and 72 hours after reperfusion

表2 B、C、D、E組大鼠再灌注2、6、24、48、72 h梗死體積/大腦總體積比較（±s，%）Table 2 Comparison of infarction volume/total brain volume in groups B，C，D and E 2，6，24，48 and 72 hours after reperfusion

注：與B組比較，aP＜0.05；與C組比較，bP＜0.05

組別 只數 再灌注2 h 再灌注6 h 再灌注24 h 再灌注48 h 再灌注72 h B 組 3 12.14±0.47 14.11±0.68 19.30±1.09 16.19±0.64 15.91±0.45 C 組 3 12.10±0.46 14.08±0.66 19.28±1.10 16.16±0.61 15.89±0.42 D 組 3 10.63±0.45ab 13.32±0.65ab 16.78±1.12ab 12.59±0.60ab 12.25±0.43ab E 組 3 10.59±0.44ab 13.29±0.61ab 16.71±1.08ab 12.53±0.62ab 12.22±0.41ab F值 4.802 4.163 6.052 6.971 8.683 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 腦組織病理形態 A組大鼠腦組織內皮質區域神經元層次分明，神經元形態、結構及數量正常；B組大鼠缺血區域內腦組織壞死神經元較多，正常神經元減少，細胞為梭形，胞核出現皺縮、偏移，胞質較少，為空泡狀，排列紊亂且周邊明顯水腫；C組大鼠腦組織病理形態與B組相似；D組和E組大鼠腦組織損傷較輕，周邊水腫明顯好轉，壞死神經元數量較少，見圖1。

2.4 神經元凋亡率 再灌注72 h，A組大鼠凋亡神經元數量極少；B組大鼠凋亡神經元散布在缺血半暗帶區域內，且分布不均勻；C組大鼠凋亡神經元數量與B組相近；D組和E組大鼠凋亡神經元數量明顯少于B組、C組，見圖2。再灌注72 h，A組大鼠神經元凋亡率為（1.00±0.52）%，B組 為（42.18±0.49）%，C組 為（40.13±0.55）%，D組為（25.10±0.56）%，E組為（24.87±0.58）%。5組大鼠神經元凋亡率比較，差異有統計學意義（F=27.194，P＜0.05）；其中B、C、D、E組大鼠神經元凋亡率高于A組，D組和E組大鼠神經元凋亡率低于B組、C組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.5 腦組織VEGF相對表達量及NO、NOS含量 再灌注2、24、72 h，5組大鼠腦組織VEGF相對表達量及NO、NOS含量比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；再灌注2 h，D組和E組大鼠腦組織VEGF相對表達量高于B組、C組，B組大鼠腦組織NO、NOS含量高于A組，差異有統計學意義（P＜0.05）；再灌注24、72 h，D組和E組大鼠腦組織VEGF相對表達量高于B組、C組，B、C、D、E組大鼠腦組織NO、NOS含量高于A組，D組和E組大鼠腦組織NO、NOS含量低于B組、C組，差異有統計學意義（P＜0.05，見表3）。

圖1 5組大鼠腦組織病理學形態（HE染色，×400）Figure 1 Pathological morphology of brain tissue in the five groups

圖2 5組大鼠神經元凋亡情況（TUNEL染色，×400）Figure 2 Neuronal apoptosis status in the five groups

表3 5組大鼠再灌注2、24、72 h腦組織VEGF相對表達量及NO、NOS含量比較（±s）Table 3 Comparison of relative expression quantity of VEGF，NO and NOS in brain tissue in the five groups 2，24 and 72 hours after reperfusion

表3 5組大鼠再灌注2、24、72 h腦組織VEGF相對表達量及NO、NOS含量比較（±s）Table 3 Comparison of relative expression quantity of VEGF，NO and NOS in brain tissue in the five groups 2，24 and 72 hours after reperfusion

注：VEGF=血管內皮生長因子，NO=一氧化氮，NOS=一氧化氮合酶；與A組比較，aP＜0.05；與B組比較，bP＜0.05；與C組比較，cP＜0.05；“-”為無相關數據

組別 只數VEGF相對表達量 NO（μmol/g） NOS（μmol/g）再灌注2 h 再灌注24 h 再灌注72 h 再灌注2 h 再灌注24 h 再灌注72 h 再灌注2 h 再灌注24 h 再灌注72 h A 組 3 - - - 4.62±0.48 4.59±0.47 4.60±0.50 3.25±0.51 3.58±0.55 3.59±0.52 B 組 3 20.41±3.69 52.71±4.82 35.71±3.95 5.69±0.53a 25.21±0.56a 16.20±0.54a 5.05±0.57a 20.42±0.59a 18.23±0.51a C 組 3 20.46±3.71 53.18±4.77 35.93±3.86 5.63±0.52 24.97±0.54a 16.12±0.51a 5.03±0.56 20.29±0.57a 17.98±0.55a D 組 3 25.31±3.52bc 69.39±4.57bc42.28±3.74bc 5.41±0.51 20.16±0.52abc13.07±0.51abc 4.99±0.54 16.28±0.53abc12.17±0.54abc E 組 3 25.73±3.48bc 69.81±4.62bc42.55±3.69bc 5.38±0.50 19.98±0.50abc13.01±0.52abc 4.97±0.52 15.99±0.51abc12.02±0.53abc F值 5.083 13.284 9.073 3.185 10.002 5.723 3.449 8.061 12.390 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.6 腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、AMPK蛋白表達情況 再灌注72 h，5組大鼠腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、AMPK蛋白相對表達量比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；其中B、C、D、E組大鼠腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、AMPK蛋白相對表達量高于A組，D組和E組大鼠腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、AMPK蛋白相對表達量低于B組、C組，差異有統計學意義（P＜0.05，見表4）。

表4 5組大鼠再灌注72 h腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、AMPK、mTOR蛋白相對表達量比較（±s）Table 4 Comparison of relative protein expression quantity of LC3-Ⅱ，Beclin-1，AMPK and mTOR in brain tissue in the five groups 72 hours after reperfusion

表4 5組大鼠再灌注72 h腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、AMPK、mTOR蛋白相對表達量比較（±s）Table 4 Comparison of relative protein expression quantity of LC3-Ⅱ，Beclin-1，AMPK and mTOR in brain tissue in the five groups 72 hours after reperfusion

注：AMPK=腺苷酸活化蛋白激酶，mTOR=雷帕霉素靶蛋白；與A組比較，aP＜0.05；與B組比較，bP＜0.05；與C組比較，cP＜0.05

組別 只數 LC3-Ⅱ蛋白 Beclin-1蛋白 AMPK蛋白 mTOR蛋白A 組 3 0.06±0.02 0.05±0.03 0.20±0.05 0.21±0.06 B 組 3 0.24±0.04a 0.21±0.05a 0.61±0.07a 0.56±0.07a C 組 3 0.22±0.04a 0.20±0.04a 0.59±0.06a 0.54±0.06a D 組 3 0.13±0.03abc 0.11±0.04abc 0.29±0.06abc 0.32±0.05abc E 組 3 0.12±0.04abc 0.10±0.03abc 0.27±0.05abc 0.30±0.06abc F值 7.083 8.114 6.053 7.119 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

3 討論

腦缺血/再灌注損傷指腦組織缺血一定時間后恢復血供，但相應腦組織功能未完全恢復或損傷更嚴重。腦缺血/再灌注損傷的發生機制較為復雜，可能與自由基過度形成、血管內皮功能損傷、細胞內Ca2+超載、炎性反應等有關，其中再灌注是腦缺血后神經功能恢復的根本條件，但再灌注又是加重腦組織損傷的主要原因之一［8］。腦缺血/再灌注的本質是恢復腦組織循環功能，減輕腦組織損傷，避免腦組織缺血范圍擴大，加速缺血半暗帶神經元功能恢復等。本研究采用改良Zea-Longa線栓法制備急性腦缺血/再灌注損傷大鼠模型，結果顯示，B組大鼠缺血區域內出現缺血/再灌注損傷病理表現，且神經功能缺損評分較高，提示模型制備成功。

阿托伐他汀為他汀類調脂藥，其不但具有良好的調脂作用，還具有抑制血栓形成、細胞黏附、平滑肌細胞增殖及改善內皮功能等多種效應。既往研究表明，負荷劑量他汀類藥物可降低腦卒中發病率［9］。動物實驗表明，阿托伐他汀能縮小血脂正常的缺血性腦卒中大鼠腦梗死面積，保護其神經功能，降低其心血管事件發生概率［10］。本研究結果顯示，再灌注2、6、24、48、72 h，D組和E組大鼠神經功能缺損評分和梗死體積/大腦總體積低于B組、C組；再灌注72 h，B、C、D、E組大鼠神經元凋亡率高于A組，D組和E組大鼠神經元凋亡率低于B組、C組，提示阿托伐他汀10、20 mg/kg灌胃可有效減輕急性腦缺血/再灌注損傷大鼠神經功能損傷，減少神經元凋亡。

VEGF是一種特異地作用于血管內皮細胞的強有力的多功能細胞因子，亦是目前臨床發現的增加血管通透性作用最強的物質之一，其可誘導新生血管形成及血管內皮細胞有絲分裂，對局灶性腦缺血后神經功能恢復具有重要促進作用［11-12］。NO是經細胞膜擴散的氣體自由基，生理條件下其可調節血管張力，抑制血管平滑肌細胞、血小板激活因子及血小板聚集，誘導內皮細胞和中性粒細胞黏附；此外，其還在刺激神經元活動、血栓形成及控制腦血流量等方面具有重要作用。NOS是NO內源性合成的關鍵酶，可影響NO表達。本研究結果顯示，再灌注2 h，D組和E組大鼠腦組織VEGF相對表達量高于B組、C組，B組大鼠腦組織NO、NOS含量高于A組；再灌注24、72 h，D組和E組大鼠腦組織VEGF相對表達量高于B組、C組，B、C、D、E組大鼠腦組織NO、NOS含量高于A組，D組和E組大鼠腦組織NO、NOS含量低于B組、C組，提示阿托伐他汀10、20 mg/kg灌胃可有效改善急性腦缺血/再灌注損傷大鼠血管內皮功能，分析其原因可能與阿托伐他汀促進局部腦組織血管新生、減少腦組織氧化應激損傷等有關。

自噬是將細胞內受損、變性、衰老的蛋白質或細胞器運輸到溶酶體內并降解的過程，以胞質中出現自噬體作為主要標志。LC3-Ⅱ和Bechlin-1蛋白是哺乳動物自噬相關基因編碼產物，二者與B細胞淋巴瘤蛋白2、哺乳動物自噬相關基因編碼產物等相互影響而激活細胞自噬，因此LC3-Ⅱ和Bechlin-1蛋白常被認為是自噬標志分子［13-14］。既往研究表明，急性腦缺血/再灌注損傷與血管內皮功能密切相關，而再灌注過程中機體血管內皮細胞直接接觸循環血液內高濃度血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）而形成大量腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素1（IL-1）、活性氧（ROS）等炎性因子及細胞內Ca2+，若機體Ca2+超載則血漿內鈣調素（CaM）含量升高，鈣/鈣調蛋白激酶依賴性激酶β（CaMKK-β）激活，AMPK活性增大，磷酸化結節性腦硬化復合物2（TSC-2）而抑制重組人表皮因子（RHE），并經過負反饋抑制mTOR活性，進而激活細胞自噬，因此急性腦缺血/再灌注損傷與自噬密切相關，可通過調節Ca2+/AMPK/mTOR信號通路而促使血管內皮細胞凋亡、壞死，加重病情［15-16］。本研究結果顯示，再灌注72 h，B、C、D、E組大鼠腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、AMPK蛋白相對表達量高于A組，D組和E組大鼠腦組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、mTOR、AMPK蛋白相對表達量低于B組、C組，提示Ca2+/AMPK/mTOR信號通路可能參與急性腦缺血/再灌注損傷的病理過程，而阿托伐他汀10、20 mg/kg灌胃可通過抑制Ca2+/AMPK/mTOR信號通路激活而減輕自噬對腦組織血管內皮功能的損傷。

綜上所述，阿托伐他汀10、20 mg/kg灌胃可有效減輕急性腦缺血/再灌注損傷大鼠神經功能損傷，減少神經元凋亡，改善血管內皮功能，其機制可能與調控自噬相關信號通路Ca2+/AMPK/mTOR有關。