飼料中添加4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長和抗氧化能力的影響

胡 斌，宋理平，冒樹泉，許 鵬

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飼料中添加4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長和抗氧化能力的影響

胡 斌，宋理平，冒樹泉，許 鵬

（1. 山東省淡水漁業研究院// 2. 山東省淡水水產遺傳育種重點實驗室, 山東 濟南 250013）

【目的】研究4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長和抗氧化能力的影響?！痉椒ā吭诨A飼料中分別添加姜黃素(50 mg/kg)、復方中草藥Ⅰ(板藍根、大黃，5 g/kg)、復方中草藥Ⅱ(黃芩、黃柏、大黃、大青葉，5 g/kg)、復方中草藥Ⅲ(辣蓼、青蒿、蒼耳草、赤小豆、苦杏仁，5 g/kg)，連續飼喂初始體質量(19.53±5) g大口黑鱸幼魚60 d，表觀飽食投喂，每天投喂2次?！窘Y果】飼料中添加4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚成活率、特定生長率、飼料系數的影響不顯著(＞0.05)；飼料中添加復方中草藥Ⅱ顯著提高血漿SOD活性(＜0.05)，復方中草藥Ⅲ顯著增高肝臟中脂肪含量(＜0.05)。【結論】飼料中添加適量的4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長不造成不利影響，復方中草藥Ⅱ可提高機體抗氧化能力，但復方中草藥Ⅲ會加大幼魚肝臟病變風險。

大口黑鱸幼魚; 中草藥; 生長; 抗氧化能力

水產養殖中通常被用來治療水產動物傳染性疾病的抗生素可能導致在動物體內殘留超標、病原菌耐藥性和可在養殖環境中傳播，對生態和公眾健康造成不利影響[1-3]。因此，使用既能促進水產養殖動物生長、提高其機體免疫力，又綠色環保的飼料添加劑更加符合市場需求，這有利于水產養殖業的綠色發展。中草藥具有毒副作用小、不易產生耐藥性和藥物殘留、效果顯著、資源可再生等優點，是功能性飼料添加劑的重要研究方向之一。姜黃提取物—姜黃素(Curcumin)[4-9]、板藍根()和大黃()[10-11]、黃芩()和黃柏()等[12-14]、辣蓼()和青蒿()等[15]單一或復方中草藥制劑對水產動物具有促進生長、提高免疫能力、治療水產疫病等作用，其效果已在大黃魚()[16]、黃顙魚()[17]、鯉()[18-20]、草魚()[21]、斑點叉尾鮰()[22]、丁鱥()[23]的養殖實踐中得到驗證。

大口黑鱸()又稱加州鱸，屬硬骨魚綱(Osteichthyes)、鱸形目(Perciformes)、鱸亞目(Porcoidei)、太陽魚科(Cehtrachidae)、黑鱸屬()，分為北方亞種和佛羅里達亞種，原產美國加利福尼亞州密西西比河水系[24]，其肉質鮮美、生長迅速、適溫性廣，現已成為我國重要的淡水名優養殖品種。大口黑鱸為肉食性魚類，攝食兇猛，可馴化食用配合飼料，但配合飼料喂養后期易出現生長停滯、肝臟病變和疾病頻發的狀況，嚴重限制了大口黑鱸養殖業的可持續健康發展?，F階段大口黑鱸人工配合飼料的研制主要集中在飼料蛋白質[25]、脂肪[25-26]、淀粉[27-28]、維生素和礦物質等的營養需求[29-30]及適宜飼料源的篩選[31-33]等方面，有關中草藥制劑對大口黑鱸生長和抗氧化功能等方面作用尚未見報道。本研究通過生長實驗，評估4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚的生長性能、飼料效率以及抗氧化能力的影響，以期為中草藥制劑在大口黑鱸幼魚養殖中的應用提供理論基礎，為綠色高效大口黑鱸配合飼料研制提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗設計

本研究分為5組，空白對照組以基礎飼料投喂；實驗組飼喂實驗飼料，分別添加姜黃素(50 mg/kg)、復方中草藥Ⅰ(板藍根、大黃，5 g/kg)、復方中草藥Ⅱ[黃芩、黃柏、大黃、大青葉()，5 g/kg]、復方中草藥Ⅲ[辣蓼、青蒿、蒼耳草()、赤小豆()、苦杏仁()，5 g/kg]。將各種中草藥超微粉碎(150 μm)后，按照不同組方配比，姜黃素添加量參考實驗室前期研究基礎（大口黑鱸幼魚姜黃素添加量不宜超過80 mg/kg），復方中草藥制劑添加量參考國家獸藥“魚肝寶散”、“三黃散”的標準使用劑量。姜黃素(純度>95%)由西安飛達生物技術有限公司提供；中草藥飲片購自山東省藥材公司，藥品符合國家獸藥標準要求。

1.2 實驗飼料

實驗飼料為山東省淡水漁業研究院營養與加工研究室自制，將飼料原料粉碎并過380 μm篩，采用逐級混勻的方法使用攪拌機將原料充分混勻，加水后用小型軟顆粒機(SLP-45，購自中國水產科學研究院漁業機械研究所)制成直徑為2.5 mm的顆粒飼料風干備用?；A飼料組成及營養水平見表1。

1.3 實驗魚與養殖管理

大口黑鱸幼魚由山東省淡水漁業研究院良種場提供。實驗開始前，先用基礎飼料暫養7 d，挑選大小、規格、體質基本一致的幼魚375尾，初始體質量(19.53±5) g，隨機分為5個組，每組3個平行，每個平行25尾魚，分別放入15個循環系統箱(60 cm×80 cm×70 cm)中。

每組實驗所用水箱在空間位置上隨機分散排布，減少實驗組之間因光線、循環水質等因素造成的誤差。養殖周期60 d。每天投喂2次(分別于8:30和16:30)，表觀飽食投喂，每次投喂持續30 min以上。每天吸污換水(換水量不超過水體1/3)確保水質，24 h連續充氣增氧。整個養殖實驗期間水質條件為: 水溫24.5~30.5℃、溶解氧在6 mg/L以上、氨氮在0.1 mg/L以下、亞硝酸鹽在0.1 mg/L以下、pH 6.8~7.5。

表1 實驗飼料配方與營養水平

注: 上標字母a：每kg維生素預混料包含以下維生素(IU or mg/kg): VA, 900 000IU; VD,200 000IU; VE, 4 500 mg; VK3, 220 mg; VB1,320 mg; VB2, 1 090 mg; 煙酸 2 800 mg; VB5, 2 000 mg; VB6, 500 mg; VB12, 1.6 mg; VC, 5 000 mg; 泛酸, 1 000 mg; 葉酸, 165 mg; 膽堿, 60 000 mg。上標字母b：每kg礦物質預混料包含以下礦物質(g/kg): FeSO4·7H2O, 25 g; CuSO4·5H2O, 2.0 g; ZnSO4·7H2O, 22 g; Na2SeO3, 0.04 g; KI, 0.026 g; MnSO4·4H2O, 7 g; CoCl2·6H2O, 0.1 g。

Note: a：Vitamin premix supplied the following vitamins (IU or mg/kg): Vitamin A, 900 000IU; Vitamin D,200 000IU; Vitamin E, 4 500 mg; Vitamin K3, 220 mg; Vitamin B1,320 mg; Vitamin B2, 1 090 mg; Niacin, 2 800 mg; Vitamin B5, 2 000 mg; Vitamin B6, 500 mg; Vitamin B12, 1.6 mg; Vitamin C, 5 000 mg; Pantothenate, 1 000 mg; Folic acid, 165 mg; Choline, 60 000 mg.b：Mineral premix supplied the following minerals (g/kg): FeSO4·7H2O, 25 g; CuSO4·5H2O, 2.0 g; ZnSO4·7H2O, 22 g; Na2SeO3, 0.04 g; KI, 0.026 g; MnSO4·4H2O, 7 g; CoCl2·6H2O, 0.1 g.

1.4 采樣與處理

養殖實驗結束禁食24 h采樣，稱取每箱大口黑鱸幼魚的總體質量，計數尾數；每箱隨機取6尾魚，MS-222(100 mg/L)快速深度麻醉，測定體質量、體長；尾靜脈采血，將血樣收集在EDTA-K2抗凝管中，3 000 r/min冷凍離心(4 ℃)10 min取上清血漿；迅速分離內臟、肝臟，并稱取；將取得的血漿、肝臟樣本-80 ℃凍存備用。

1.4.1 生長與形體指標 根據獲得數據，計算增重率、特定生長率、飼料系數、肥滿度、內臟比、肝體比。魚體生長及飼料利用率等指標的計算方法如下：

增重率(Weight gain, WG) = (W-0) ÷0，

特定生長率(Specific growth rate,SGR) =(lnW?ln0) ÷，

餌料系數(Feed conversion ratio, FCR) =÷ (W-0)，

臟體比(Viserosomatic index, VSI) =W÷W，

肝體比(Hepatosomatic index, HSI) =W÷W，

肥滿度(Condition factor, CF) =W÷3。

式中0為實驗開始時魚的體質量(g)；W為實驗結束時魚的體質量(g)；為實驗結束時魚的體長(cm)；為魚的養殖時間(d)；為攝食的飼料量(g)；W為實驗結束時魚的內臟質量(g)；W為實驗結束時魚的肝臟質量(g)。

1.4.2 肝臟水分、脂肪測定 取部分-80 ℃凍存備用的肝臟，4 ℃冰箱解凍，檢測水分、粗脂肪含量。

水分：105℃烘箱干燥法[34]；粗脂肪：索氏抽提法[35]。

1.4.3 血漿生化指標測定 取-80 ℃凍存備用的血漿，4 ℃冰箱解凍。檢測血糖(GLU)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。

GLU：葡萄糖氧化酶法；SOD：WST法。試劑盒購自南京建成生物工程研究所科技有限公司。

1.4.4 肝臟生化指標測定 采樣所取得的肝臟，4 ℃冰箱解凍，濾紙吸干表層血液和水分，以生理鹽水為勻漿介質按照1∶9的比例制成組織勻漿液，3 000 r/min冷凍離心(4 ℃)10 min，取上清液用于總抗氧化能力(T-AOC)、SOD和丙二醛(MDA)的測定。

T-AOC：ABST法；MDA：TBA法。試劑盒購自南京建成生物工程研究所科技有限公司。

1.5 數據統計與分析 實驗數據采用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析，數據差異顯著時，采用Duncan’s檢驗法進行多重比較，差異水平定為<0.05。實驗數據以Mean±SD表示。

2 結果與分析

2.1 中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長性能和形體指標的影響

中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長性能和形體指標的影響見表2。飼料中添加中草藥對魚體的成活率、特定生長率和飼料系數影響不顯著(＞0.05)；與基礎組相比，飼料中添加中草藥對魚體的增重率影響不顯著(＞0.05)，但復方中草藥Ⅲ組較增重率最高的復方中草藥Ⅱ組顯著降低(＜0.05)；復方中草藥Ⅰ顯著降低了幼魚的臟體比(＜0.05)，但與姜黃素組相比差異不顯著(＞0.05)；姜黃素顯著降低了幼魚的肝體比(＜0.05)，但與復方中草藥Ⅰ、Ⅲ組間差異不顯著(＞0.05)；飼料中添加姜黃素和復方中草藥Ⅰ、Ⅲ能夠顯著降低幼魚的肥滿度(＜0.05)。

表2 中草藥對大口黑鱸幼魚生長性能和形體指標的影響

注: 同行數據肩標不含相同字母的兩組平均值之間差異顯著(<0.05)。= 6，Mean ± SD。

Note: Means in the same line with different superscripts are significantly different (0.05).= 6，Mean ± SD.

2.2 中草藥制劑對大口黑鱸幼魚肝臟、血液生化指標的影響

如表3所示，4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚肝臟中水分含量的影響不顯著(＞0.0)；與基礎組比較，復方中草藥Ⅲ顯著提高了幼魚肝臟脂肪含量(＜0.05)，姜黃素和復方中草藥Ⅰ、Ⅱ對幼魚肝臟脂肪含量的影響不顯著(＞0.05)。與基礎組相比，飼料中添加姜黃素和復方中草藥Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對幼魚肝臟中T-AOC和MDA活性影響不顯著(＞0.05)；實驗組間比較，復方中草藥Ⅲ組的幼魚肝臟T-AOC顯著低于復方中草藥Ⅰ組(＜0.05)，MDA顯著高于復方中草藥Ⅱ組(＜0.05)。與基礎組相比，姜黃素和復方中草藥Ⅰ、Ⅱ對幼魚肝臟中SOD活性的影響不顯著(＞0.05)，復方中草藥Ⅲ顯著降低了幼魚肝臟SOD活性(＜0.05)，但實驗組間差異不顯著(＞0.05)。

與基礎組比較(表3)，飼料中添加4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚血液GLU的影響不顯著(＞0.05)，但復方中草藥Ⅰ較復方中草藥Ⅱ顯著降低了幼魚血糖含量(＜0.05)。

復方中草藥Ⅱ組較基礎組和復方中草藥Ⅰ、Ⅲ組顯著提高幼魚血漿超氧化物歧化酶活性 (＜0.05)，但與姜黃素組差異不顯著(＞0.05)。與基礎組比較，姜黃素和復方中草藥Ⅰ、Ⅲ對幼魚血漿SOD的影響不顯著(＞0.05)。

表3 中草藥對大口黑鱸幼魚血液、肝臟生化指標的影響

注: 同行數據肩標不含相同字母的兩組平均值之間差異顯著(<0.05)。=6，±SD。

Note: Means in the same line with different superscripts are significantly different (0.05).=6，±SD.

3 討論

姜黃素是從姜科姜黃屬植物姜黃根莖中提取的一種脂溶性酚類物質[36]。對水產動物的研究發現，飼料中添加適量的姜黃素能促進草魚、大黃魚、黃顙魚等的生長[4-8]，但對大菱鲆()幼魚[9]特定生長率沒有顯著影響。在本研究中，飼料中添加50 mg/kg姜黃素對大口黑鱸幼魚的存活率、特定生長率和餌料系數沒有顯著影響，與飼料中添加400 mg/kg和600 mg/kg大菱鲆幼魚的研究結果[9]相同；本實驗室前期研究中，飼料中姜黃素添加量＜80 mg/kg時，大口黑鱸生長性能差異不顯著，添加量≥80 mg/kg后大口黑鱸生長受到抑制，表明姜黃素在飼料中適宜劑量的差異可能與魚類種類、食性、養殖環境、飼料原料組成等有關。本研究中，50mg/kg姜黃素顯著降低了大口黑鱸幼魚的肝體比，表明適量姜黃素對大口黑鱸幼魚肝腫大具有一定抑制作用。板藍根、大黃按比例配伍的“魚肝寶散”和黃芩、黃柏、大黃、大青葉按比例配伍的“三黃散”作為國標獸藥已被廣泛應用于魚類病害防治中，主要用來防治水產動物細菌性疾病[17-21]，參考這2種獸藥標準劑量，在飼料中分別添加5 g/kg的復方中草藥Ⅰ(板藍根、大黃復方制劑)、復方中草藥Ⅱ(黃芩、黃柏等復方制劑)和復方中草藥Ⅲ(辣蓼、青蒿等復方制劑)對大口黑鱸的存活率、特定生長率和餌料系數沒有顯著影響，復方中草藥Ⅰ顯著降低了大口黑鱸的臟體比，這與在鯉魚[15]中的研究結果一致。實驗結果表明，飼料中適量中草藥制劑(姜黃素和復方中草藥Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的添加不會對大口黑鱸的生長造成不利影響。

大口黑鱸為典型淡水肉食性魚類，飼料中碳水化合物含量超過20%時就會導致肝臟細胞中糖類物質的大量積累，并出現高血糖癥，嚴重時會導致肝臟功能異常、生長緩慢甚至死亡率也會隨之上升[37-38]。以12%、24%、36%這3種碳水化合物水平的飼料喂養大口黑鱸8周，其血糖含量分別為10.30、17.77、25.64 mmol/L[39]。本研究中大口黑鱸幼魚血糖含量為7.26～9.31 mmol/L，未出現高血糖癥狀，且4種中草藥制劑的添加對大口黑鱸幼魚血糖含量影響不顯著，這可能是因為基礎飼料主要采用魚粉為蛋白源，植物性原料添加較少。

T-AOC是機體內抗氧化能力的總體體現，是酶促(超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽硫轉移酶等)和非酶促(維生素、氨基酸和金屬蛋白等)兩方面因子抗氧化能力的總和[40]，更加綜合反映了機體抗氧化酶系統和非酶促系統對外來刺激的代償能力。脂質過氧化能產生眾多有毒的活性氧簇(ROS)，如超氧陰離子(O2－·)、H2O2和臭氧等。SOD是機體中唯一以O2－為底物的酶，能催化O2－歧化為H2O2和O2，從而減少O2－在生物體內的積聚并阻斷其轉化為羥基自由基OH·，維持細胞內氧自由基處于低量無害狀態[41]。MDA是氧自由基攻擊生物膜中的 PUFA 引發脂質過氧化作用形成的最終分解產物，其含量可間接反映機體的氧自由基和脂質的過氧化水平，從而間接反映出細胞受損傷的程度[41]。本研究中姜黃素和復方中草藥Ⅰ對大口黑鱸肝臟中脂肪含量、T-AOC、SOD、MDA和血漿中SOD影響不顯著，復方中草藥Ⅱ顯著提高了大口黑鱸血漿中SOD活性。這可能是因為黃芩抗氧化活性強于姜黃[42]，且黃柏主要活性物質小檗堿具有較高抗氧化增強作用[43]。復方中草藥Ⅲ的藥理配伍以健脾和胃消食調中為目的，在本實驗室前期研究中可顯著提升鯉魚、大口黑鱸的肌肉品質，但本研究中顯著降低了肝臟SOD活性，顯著提高了幼魚肝臟中脂肪含量，肝臟MDA含量有升高趨勢，降低了幼魚抗氧化能力。

4 結論

飼料中添加姜黃素(50 mg/kg)會顯著降低大口黑鱸幼魚肝體比和肥滿度；飼料中添加復方中草藥Ⅰ(板藍根、大黃，5 g/kg)會顯著降低臟體比和肥滿度；飼料中添加復方中草藥Ⅱ(黃芩、黃柏、大黃、大青葉，5 g/kg) 顯著提高血漿SOD活性，可增強機體抗氧化能力；飼料中添加復方中草藥Ⅲ(辣蓼、青蒿、蒼耳草、赤小豆、苦杏仁，5 g/kg)顯著降低肥滿度，顯著降低肝臟SOD活性，提高肝臟中脂肪含量，肝臟MDA含量有升高趨勢，加大了肝臟病變風險。

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Effects of Four Chinese Herbal Preparations on Growth Performance and Antioxidant Activity in Juvenile

HU Bin1,2, SONG Li-ping1,2, MAO Shu-quan1, XU Peng1

（1.//2,250013,）

【Objective】A 60-d feeding trial was conducted to evaluate the effects of dietary four Chinese herbal preparations on growth performance and antioxidant activity in juvenile[initial body weight (19.53±5) g]. 【Method】A basal diet (control) was supplemented with curcumin (50 mg/kg), Chinese herbal preparations Ⅰ(,, 5 g/kg), Chinese herbal preparationsⅡ(,,,, 5 g/kg), Chinese herbal preparations Ⅲ(,,,,, 5 g/kg) to formulate five experimental diets. The fish were fed twice daily to apparent satiation. 【Result】The survival rate, specific growth rate, feed conversion ratio ofwere not significantly affected by the dietary four Chinese herbal preparations (＞0.05).The activity of plasma SOD significantly increased by the dietary Chinese herbal preparationsⅡ(＜0.05). The liver lipid content significantly increased by the dietary Chinese herbal preparations Ⅲ(＜0.05).【Conclusion】The results from the present study indicated that there were no significant adversely affect on growth performance of juvenileamong all treatments. Antioxidant activity significantly increased by the dietary Chinese herbal preparationsⅡ, but the dietary Chinese herbal preparations Ⅲ would increase the risk of liver disease.

juvenile; Chinese herbal preparations; growth performance; antioxidant activity

S968.22

A

1673-9159（2019）04-0101-07

10.3969/j.issn.1673-9159.2019.04.015

2019-04-09

山東省2017年度農業重大應用技術創新項目

胡斌（1980－）, 男, 碩士, 助理研究員, 主要從事水產動物營養與飼料加工研究。E-mail: b-hu@163.com

宋理平（1974－）, 男, 博士, 研究員, 主要從事水產動物營養與飼料加工研究。E-mail: lpsyang1974@126.com

胡斌，宋理平，冒樹泉，等. 飼料中添加4種中草藥制劑對大口黑鱸幼魚生長和抗氧化能力的影響[J].廣東海洋大學學報，2019，39（4）：101-107.

（責任編輯：劉嶺）