氣相色譜法同時測定磷酸特地唑胺原料藥中4種有機溶劑的殘留量

周慶凱

天津紅日藥業(yè)股份有限公司 天津 301700

磷酸泰地唑胺是美國Cubist制藥公司開發(fā)的一種惡唑烷酮類抗生素。用于治療金黃色葡萄球菌（包括耐甲氧西林菌株和甲氧西林敏感菌株）、各種鏈球菌及腸球菌等革蘭陽性細菌引起的成人急性細菌性皮膚和皮膚組織感染。

1 材料

1.1 儀器

Aglient7890A型全自動氣相色譜儀、AglientG1888頂空全自動進樣器、氫火焰離子化檢測器，ChemStation在線色譜工作站；6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷聚硅氧烷毛細管色譜柱色譜柱，KQ-100B型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；SartoriusBP211D型天平(賽多利斯公司)[1]。

1.2 藥品與試劑

磷酸特地唑胺原料藥(四川大學華西藥學院自制）；色譜純甲醇對照品、色譜純二氯甲烷對照品、色譜純乙酸乙酯對照品、色譜純N，N-二甲基甲酰胺均購自德國默克公司，分析純二氧六環(huán)對照品購自成都市科龍化工試劑廠，純度均≥99．8%。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷聚硅氧烷毛細管色譜柱為本方法色譜柱；檢測器：氫火焰離子化檢測器；進樣口溫度設置為200℃；火焰氫離子化檢測器溫度設置為250℃；柱溫采取程序升溫方式：起始柱溫設置為50℃，保持5分鐘，然后以每分鐘15℃升溫至220℃后再保持5分鐘；載氣使用高純氮氣，其柱流速為每分鐘3．0mL；分流比設置為5：1；進樣方式為頂空進樣；頂空進樣體積為1．0uL；頂空瓶裝樣量為10mL；頂空瓶溫度設定為100℃；頂空平衡時間設置為30分鐘。

2.2 溶液的配制

空白溶液：精密量取N，N二甲基甲酰胺1mL，置于10mL頂空瓶中密封保存?zhèn)溆?。混合對照品溶液：精密稱取甲醇150mg、二氯甲烷30mg、乙酸乙酯250mg、二氧六環(huán)對照品各19mg，分別用DMF稀釋至10mL，作為單個對照溶液，備用；分別精密量取2mL單個對照品溶液于50mL量瓶中，用N，N二甲基甲酰胺稀釋至刻度，再搖勻后作為混合對照品儲備液；精密量取2．5mL混合對照品儲備液于量瓶中，加N，N二甲基甲酰胺稀釋至10mL，再搖勻后作為混合對照品溶液。取1mL置于10mL頂空瓶中，加蓋密封保存?zhèn)溆谩９┰嚻啡芤海壕芊Q定本品適量，加N，N二甲基甲酰胺溶解并定容，超聲助溶5分鐘使之溶解，搖勻，制成每毫升50mg的供試品溶液，備用[2]。精密量取1mL供試品溶液于10mL頂空瓶中，加蓋密封即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別精密量取單一對照品溶液1．0mL，對各待測組分進行定位檢測。另精密量取空白對照溶液、混合對照品溶液、供試品溶液，同法測定，記錄色譜圖樣報告，所得空白溶劑、混合對照品溶液及供試品溶液氣相圖譜在本實驗的色譜條件下，各待測組分相互無干擾，均能達到良好的分離，峰形良好，分離度＞1．5，理論塔板數(shù)均大于50000；甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、N，N二甲基甲酰胺的保留時間分別為 2．975、3．885、4．544、5．715 和 7．224分鐘[3]。由此可見，該方法系統(tǒng)適用性符合要求。

2.4 精密度試驗

秘密量取混合對照品溶液1mL于頂空瓶中，加蓋密封，采用本實驗色譜條件同法進行分析，連續(xù)重復進樣測定6次，計算甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)峰面積的RSD分別為0．65%、1．12%、0．73%和1．36%（n=6）。殘留有機溶劑組分的 RSD均小于2%，說明本方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

制備供試品溶液6份，分別放置室溫下0、1、2、4、6和8h時后采用本實驗色譜條件同法進行檢測分析，記錄色譜峰面積。結(jié)果本品中二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)均未檢出，只檢出甲醇，其峰面積的RSD為1．15%（n=6），表明本溶液在8小時內(nèi)(室溫)穩(wěn)定。

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取混合對照品儲備液 0．1、0．5、1．0、2．5、5．0 和10mL，分別置于量瓶中，加N，N二甲基甲酰胺稀釋至10mL作為系列標準曲線混合對照測試溶液，依次取上述溶液1．0mL于頂空瓶中，加蓋密封，再采用本實驗色譜條件(“2．1”項下)同法進樣測定分析，分別記錄各個系列的色譜峰面積[4]。以各個對照品的質(zhì)量濃度ρ(μg/mL)為橫坐標，以與之相對應的峰面積(A)為縱坐標在Excle辦公軟件中進行線性回歸分析，分別得到甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)的標準曲線線性回歸方程及線性范圍，結(jié)果見表1。

表1 4種殘留溶劑的線性方程和線性范圍

3 討論

頂空平衡溫度越高，頂空瓶內(nèi)的飽和蒸氣壓越高，揮發(fā)氣體的濃度越高，靈敏度就相應越高。但是溫度過高可能會損壞頂空進樣瓶導致瓶口漏氣，使得待測成分濃度不準確，以及某些物質(zhì)可能會產(chǎn)生降解產(chǎn)物影響測定的結(jié)果[5]。當平衡時間為30分鐘時，本課題組比較了頂空平衡溫度60、70、80、90、100、110和120℃下的待測溶劑的峰面積，發(fā)現(xiàn)色譜峰面積隨著平衡溫度的升高而升高，但在100℃以上的色譜峰面積增加不明顯，當溫度升至110℃時，有少量未知降解雜質(zhì)出現(xiàn)，考慮到在100℃各待測有機溶劑都能檢出且有良好的響應，故本實驗的頂空平衡溫度設置為100℃。特地唑胺較第一代惡唑烷酮抗生素利奈唑胺相比，主要有兩個優(yōu)勢，一個是用法為每天一次共使用六天，比利奈唑胺的每天兩次共十天更方便；另外一個是劑型有注射劑和片劑，方便臨床切換，減少病人住院時間，從而降低了費用[6]。

本研究首次通過頂空毛細管氣相色譜法測定磷酸特地唑胺原料藥中的4種殘留有機溶劑，并對其進行了方法學驗證。結(jié)果表明，在本實驗設定的色譜條件下，各殘留溶劑之間分離效果好，靈敏度高，在濃度范圍內(nèi)線性良好，回收率符合規(guī)定[7]。該頂空氣相色譜研究方法快速、簡便、經(jīng)濟、靈敏，準確、精密度和重現(xiàn)性良好，適合磷酸特地唑胺原料藥中甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和二氧六環(huán)等有機溶劑的殘留量的同時測定，可以為藥物分析工作者對磷酸特地唑胺原料藥中殘留溶劑的質(zhì)量控制提供一定的參考。