氣相色譜法檢測雞蛋中氟蟲腈的殘留

王愛軍

（上海食品科技學校，上海 201599）

氟蟲腈是苯基吡唑類高活性殺蟲劑，商品名稱為銳勁特（Regent）[1]。該農藥于1996年在美國正式注冊登記，20世紀90年代后期在我國大范圍試驗示范并推廣應用，可用于防止水稻、蔬菜、棉花、煙草等作物上的多種農業(yè)害蟲。目前，農業(yè)部農藥檢定所對含氟蟲腈成分的農藥制劑產品僅能申請衛(wèi)生用、玉米等部分旱田種子包衣劑的田間試驗、臨時登記和正式登記[2]。我國于2009年10月1日發(fā)布了《氟蟲腈限用管理規(guī)定》對該農藥禁/限用，目前僅有部分家庭用衛(wèi)生害蟲除蟲劑含有氟蟲腈成分。然而2017年8月初，歐洲被爆出毒雞蛋事件，全世界將矛頭再一次指向氟蟲腈[3]。

氟蟲腈具有慢性神經毒性作用，被定為C類致癌物質，被世界衛(wèi)生組織列為“對人類有中度毒性”的化學品。該藥動物試驗研究表明，短期攝取大量氟蟲腈會對神經系統(tǒng)造成不良影響，大量進食含有高濃度氟蟲腈殘留的動物性食品（如肉、蛋、奶等）可引起肝臟、甲狀腺和腎臟等損害，具有致癌、致畸、致突變的不良作用。因此，歐盟法律規(guī)定，氟蟲腈不得用于人類食品產業(yè)鏈的畜禽養(yǎng)殖過程[3]。目前，世界各國已對雞蛋中氟蟲腈的殘留量制定了最大殘留限量標準（MRL）。其中，國際食品法典委員會 （CAC） 規(guī)定的 MRL值為 0.02 mg/kg，美國為0.15 mg/kg，歐盟為0.005 mg/kg，日本為0.02 mg/kg，因而對雞蛋中氟蟲腈的檢測而言，檢出限應當至少低于0.005 mg/kg才能對風險進行有效評估[4]。

氟蟲腈的測定方法有氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜-質譜法、液相色譜-質譜聯(lián)用法。氣相色譜法檢測氟蟲腈通常使用ECD檢測器，該檢測器對氟蟲腈響應高、儀器檢出限低、檢測成本低，適用于水果蔬菜基質的測定[5-8]。氣相色譜-質譜聯(lián)用法具有較高的靈敏度和分辨能力，能夠有效排除雜質干擾[9]。氣相質譜一般配備EI離子源，氟蟲腈分子經過電子轟擊后無法產生響應高、質荷比大的特征峰，因而檢出限較高，如GB/T 23204—2008茶葉中519種農藥及相關化學品殘留量的測定：氣相色譜-質譜法中規(guī)定農藥殘留的檢測方法為氣相色譜質譜聯(lián)用法，其氟蟲腈的檢出限為0.100 mg/kg[10]。配備化學源（CI） 的氣相色譜質譜儀可以獲得較低檢出限，如陳珊珊等人[11]測定蝦中氟蟲腈，檢出限可達到0.4 μg/kg。然而CI源沒有EI源應用廣泛，該方法無法在更多的實驗室進行推廣。對于液相色譜法，已有檢測方法中采用液相色譜法檢測的大部分是對原藥檢測，對于實際樣品的檢測無太大的實際意義[12]。液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用法結合液相色譜的高分離能力和串聯(lián)質譜的高分辨能力，在食品中的痕量污染物殘留檢測方面具有很強的定性和定量能力，從而獲得廣泛的應用。龔勇等人[13]建立了檢測雞蛋中氟蟲腈殘留的方法，抗干擾能力強，定量限達到0.002 mg/kg。然而液相質譜檢測前處理復雜、儀器維護成本高。

針對雞蛋的基質，通過比較QuEChERS、固相萃取前處理方法，采用針對性填料和吸附劑進行凈化，比較不同通量、極性的毛細管色譜柱以獲得更低的檢出限，建立快速、經濟檢測雞蛋中氟蟲腈的氣相色譜方法，該方法有效降低雜質干擾、提高檢測準確性，以滿足雞蛋中氟蟲腈風險評估的需求，便于在各實驗室進行推廣。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

氟蟲腈標準品（Dr.Ehrenstorfer，99.2%）；雞蛋，市售；己腈（TEDIA，色譜級）；石墨化碳（CNW）；PSA（CNW）；固相萃取柱（Oasis，PRiME HLB 200 mg/6 cc）；丙酮（TEDIA，色譜級）；實驗用水為三級水。

7890B型氣相色譜儀，配有電子捕獲檢測器（ECD）；QL-866型旋渦混合器；Velocity 14R型高速冷凍離心機；TTL-DC型氮吹儀。

1.2 樣品前處理

雞蛋樣品經去殼，均勻制備后，準確稱取2.5 g（精確到0.000 1 g）于50 mL旋蓋離心管，加入10 mL 80%的己腈水溶液，蓋上蓋子于漩渦混合器中振蕩60 s，然后以轉速12 000 r/min離心5 min，取上清液6 mL進固相萃取柱，控制流速1.0～1.5 mL/min，棄去前1 mL洗脫液，收集4 mL洗脫液于10 mL塑料離心管，于氮吹儀上50℃濃縮近干，準確加入1 mL丙酮，加蓋后超聲提取3min，使用0.45 μm的微孔濾頭過濾，待氣相色譜分析用。

按照上述方法另取一份樣品前處理，離心后取上清液6 mL于氮吹儀上50℃濃縮近干，準確加入1 mL丙酮，加蓋后超聲提取3 min，加入20 mg PSA和10 mg石墨化碳，加蓋后于旋渦混合器混合30 s，使用0.45 μm的微孔濾頭過濾，待氣相色譜分析用。

1.3 儀器條件

色譜條件：色譜柱Agilent HP-5MS UI（30 m×0.25 mm×0.25 μm） 彈性石英毛細管柱；色譜柱Agilent DB-1701（30 m×0.53 mm×0.25 μm） 彈性石英毛細管柱；載氣：N2（99.999%）；恒流模式，柱流量1.5 mL/min（HP-5MS UI），10 mL/min（DB-1701）；不分流進樣，進樣量1 μL；進樣口溫度220℃，柱初始溫度60℃，保持2 min，程序升溫以20℃/min至160℃，然后以5℃/min至250℃保持10 min，檢測器溫度280℃，尾吹60 mL/min。

1.4 測定方法

取樣品和標準溶液各1 μL，通過自動進樣器注入氣相色譜儀中進行分析，以保留時間定性，峰面積外標法計算樣品中氟蟲睛的含量。

1.5 標準曲線繪制

（1）母液配制。用感量0.000 01 g的電子天平準確稱取氟蟲腈10.0 mg，溶于10.00 mL丙酮中，配成質量濃度為1 000 μg/mL的標準母液。

（2）工作曲線的制作。用丙酮將標準母液配制成 0.000 5，0.001 0，0.002 0，0.004 0，0.008 0，0.016 0，0.032 0，0.064 0 μg/mL的標準工作溶液，進行分析，以進樣質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，制作標準曲線。

2 結果與分析

2.1 色譜柱選擇

色譜柱HP-5MS UI和DB-1701是農殘常用色譜柱，對這2種不同極性和通量的色譜柱進行考查。

1.0 μg/mL氟蟲腈標準品色譜圖見圖1，氟蟲腈色譜峰參數見表1。

圖1 1.0 μg/mL氟蟲腈標準品色譜圖

從表1看出，進樣質量濃度均為1.0 μg/mL，氟蟲腈在DB-1701上對稱因子為0.85，在HP-5MS UI僅0.20，可能的原因是氟蟲腈在弱極性色譜柱上峰型較差，容易拖尾，在中等極性色譜柱上出峰效果較好。此外，試驗中HP-5MS柱內徑為0.25 mm，通量較小，容易造成拖尾和過載現(xiàn)象。同樣質量濃度的標準品在DB-1701上峰面積是HP-5MS的6.8倍，信噪比13.9倍，這說明標準品在DB-1701中通量高、基線平滑，能夠獲得更低的檢出限。由于氟蟲腈在DB-1701上有較長的保留時間，因此更容易和大多數低沸點的雜質分離，大大降低假陽性發(fā)生。綜上所述，選擇使用DB-1701色譜柱。

表1 氟蟲腈色譜峰參數

2.2 線性范圍、檢出限、精密度、回收率

氟蟲腈質量濃度為0.000 5 μg/mL時，峰面積32 Hz·s，信噪比 3.1，因此儀器檢出限為 0.000 5 μg/mL，當稱樣量2.5 g時，方法檢出限為0.6 μg/kg。配制標準系列質量濃度0.000 5，0.001 0，0.002 0，0.004 0，0.008 0，0.016 0，0.032 0，0.064 0 μg/mL 進行測定，以峰面積S為縱坐標、質量濃度C（μg/mL）為橫坐標繪制標準工作曲線，在標準溶液在范圍內，線性回歸方程為S=88 349.924 02C-20.892 69，相關系數為0.999 85，線性較好。對加標樣品進行6次獨立試驗，3倍檢出限低質量濃度加標（1.8 μg/kg） 相對標準偏差RSD=8.6%，回收率為73.4%。高質量濃度加標（6.0 μg/kg） 時，相對標準偏差RSD=6.1%，回收率為84.2%。

氟蟲腈標準曲線見圖2。

圖2 氟蟲腈標準曲線

2.3 凈化條件的選擇

目前，農殘常用的快速凈化方法有QuEChERS方法（吸附劑主要為PSA/石墨化碳）、固相萃取法（SPE）。

不同凈化方法的基質色譜圖見圖3。

圖3 不同凈化方法的基質色譜圖

經過QuEChERS方法凈化后，部分色素和極性雜質被去除，基質色譜圖雜峰有所降低，但是25 min后雜峰并沒有明顯減少；經過SPE凈化后，基質中的小分子酸、極性化合物和磷脂得到有效清除，基質色譜圖雜峰顯著降低，尤其是25 min后雜峰明顯減少，有效避免假陽性產生。因此，試驗使用SPE凈化效果較好。

3 結論

建立了一種檢測雞蛋中氟蟲腈殘留量的檢測方法，該方法檢測成本低、易普及、前處理簡單快捷高效，能有效避免假陽性產生，方法檢出限為0.6 μg/kg，具有靈敏度高、準確性、重現(xiàn)性好等特點，可有效滿足檢驗部門對雞蛋中氟蟲腈殘留量的檢測。