膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎與髖關(guān)節(jié)退變的相關(guān)性研究

戴錫金

（沈陽市骨科醫(yī)院，遼寧 沈陽 110044）

本文對膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎與髖關(guān)節(jié)退變的相關(guān)性進(jìn)行探究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：取60例幼鼠隨機(jī)等分為三組，即正常對照組、直立組、直立聯(lián)合Hulth組各20例。

1.2 試劑：乙二胺四乙酸二鈉、氯霉素眼膏、磷酸二氫鈉I、MMP-13的I抗與II抗、水、二甲苯、乙醇等。

1.3 儀器：電子稱、量筒、切片機(jī)、自動脫水機(jī)、免疫熒光試劑盒、冷凍機(jī)、顯微鏡、常規(guī)手術(shù)器械等。

1.4 模型建設(shè)：把對立組、直立聯(lián)合Hulth組中所有小鼠的雙前肢毛發(fā)剔除并進(jìn)行消毒常規(guī)處理，按照一定配比配置麻醉藥物進(jìn)行腹腔注射麻醉，在麻醉藥物見效后，對小鼠實施手術(shù)操作，主要步驟有雙前肢消毒、剝離周邊軟組織、結(jié)扎上肢肱動脈、橈動脈等重要靜脈，利用手術(shù)器具夾斷肱骨、有效止血后進(jìn)行常規(guī)縫合。

1.5 形態(tài)學(xué)染色

1.5.1 HE染色：采用的藥劑有無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、鹽酸乙醇、氨水返藍(lán)以及伊紅染液等。

1.5.2 甲苯胺藍(lán)染色：無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、甲苯胺藍(lán)染液等，最后應(yīng)用中性樹膠密封，光學(xué)顯微鏡下觀察并采片，對三組大鼠關(guān)節(jié)軟骨結(jié)合Mankin評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行打分。

1.6 免疫熒光檢測：在光學(xué)顯微鏡下觀察陽性細(xì)胞數(shù)目，每一個標(biāo)本取脛骨內(nèi)髁、脛骨外髁、關(guān)節(jié)中心3個主要區(qū)段，分別計算上述區(qū)段內(nèi)所有細(xì)胞數(shù)目以及陽性細(xì)胞數(shù)目。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS16.0軟件包對本次研究數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，納入到Excel表格中，計量資料采用（x-±s）表示，計數(shù)資料采用百分率（%）表示，比較行χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 動物情況：在建設(shè)直立大鼠KOA模型時，無死亡現(xiàn)象，但是在建設(shè)直立聯(lián)合Hulth模型時，由2只大鼠死亡，病死率為3.3%。由此可見，去雙前肢直立聯(lián)合Hulth模型具有成活率高、病死率低、操作流程相對簡單以及時間短暫等特征[1]。

2.2 膝、髖關(guān)節(jié)影像學(xué)檢查：對三組大鼠膝、髖關(guān)節(jié)影像學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行整體分析，發(fā)現(xiàn)正常對照組中大鼠的膝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)與功能無異常，未出現(xiàn)典型性退變癥狀，但是其他兩組大鼠的膝、髖關(guān)節(jié)可發(fā)現(xiàn)有不同程度關(guān)節(jié)縫隙狹窄、苗杜增高影，這代表直立組與直立聯(lián)合假Hulth組大鼠的膝、髖關(guān)節(jié)存在不同程度的退行性改變。

2.3 關(guān)節(jié)軟骨形態(tài)學(xué)觀察

2.3.1 HE染色：直立組與左側(cè)直立聯(lián)合假Hulth組大鼠髖關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)面結(jié)構(gòu)平滑，軟骨層次結(jié)構(gòu)清楚可見，軟骨細(xì)胞有次序分布在股骨頭上，結(jié)合上述表征可以將其視為關(guān)節(jié)應(yīng)力匯集的表現(xiàn)；右側(cè)直立聯(lián)合假Hulth組中關(guān)節(jié)面較粗糙但結(jié)構(gòu)完整，關(guān)節(jié)縫隙狹窄，軟骨細(xì)胞排列無規(guī)律，表層的軟骨細(xì)胞數(shù)目減少，可見潮線，考慮髖關(guān)節(jié)退行性改變。

2.3.2 甲苯胺藍(lán)染：右側(cè)直立聯(lián)合Hulth組中髖關(guān)節(jié)面較粗糙但結(jié)構(gòu)完整，染色不均勻，表層的軟骨細(xì)胞數(shù)目降低，且多以線型軟骨細(xì)胞呈現(xiàn)，認(rèn)為是髖關(guān)節(jié)退行性改變[2]。

2.3.3 免疫熒光檢測：在不同波段熒光激發(fā)下，不同小組Aggrecan免疫熒光表達(dá)效果有所差異，除正常對照組之外，其他兩組大鼠髖關(guān)節(jié)Aggrecan所表達(dá)的陽性細(xì)胞勻稱的分布在表層、移形層與放射層的軟骨細(xì)胞內(nèi)，陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)目相對較多；右側(cè)直立Hulth組中髖關(guān)節(jié)Aggrecan所表達(dá)的陽性細(xì)胞表達(dá)很少，熒光強(qiáng)度相對較低，髖關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Aggrecan所表達(dá)的陽性細(xì)胞百分比如下表，可見右側(cè)直立聯(lián)合Hulth組中髖關(guān)節(jié)軟骨的退變。見表1。

表1 Aggrecan所表達(dá)的陽性細(xì)胞百分比（±s）

表1 Aggrecan所表達(dá)的陽性細(xì)胞百分比（±s）

組別 例數(shù)(n) Aggrecan陽性百分比直立組 12 67.76±2.81左側(cè)直立Hulth組 12 66.31±3.11右側(cè)直立Hulth組 12 60.51±3.30

2.2.3 Collagen X免疫熒光測定：在直立組、左側(cè)直立聯(lián)合Hulth組中髖關(guān)節(jié)軟骨Collagen X所表達(dá)的陽性細(xì)胞百分比分別為（34.70±2.02）、（35.95±2.13）、（40.37±2.37）。由于右側(cè)直立聯(lián)合Hulth組中髖關(guān)節(jié)軟骨的Collagen X陽性，故此，可推測髖關(guān)節(jié)軟骨的退變與其他兩組相比更嚴(yán)重。

3 討 論

膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎（KOA）又叫退行性骨關(guān)節(jié)病，為一種常見的風(fēng)濕性疾病[4]。有報道顯示，KOA的發(fā)生發(fā)展有明顯的解剖與生物學(xué)基礎(chǔ)，KOA可誘發(fā)附近髖關(guān)節(jié)力學(xué)改變，但是否影響髖關(guān)節(jié)退變依然沒有確切結(jié)論[5]。

本次研究結(jié)果顯示：通過對HE、甲苯胺藍(lán)、藏紅固綠、Collagenll、MMP-13進(jìn)行染色，進(jìn)而其他組相比較，Hulth組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨Mankin評分與MMP-13陽性細(xì)胞比例最高、CollagenⅡ陽性細(xì)胞比率最低；和其他組相比，Malthus組大鼠同側(cè)髖關(guān)節(jié)軟骨Mankin評分與MMP-13陽性細(xì)胞比例最高、CollagenⅡ陽性細(xì)胞比率最低，軟骨退行病變最嚴(yán)重。膝關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、關(guān)節(jié)活動范圍減縮以及X線檢查結(jié)果和髖關(guān)節(jié)對應(yīng)癥狀無相關(guān)性或相關(guān)性微小。由此可見，去雙前肢直立聯(lián)合Malthus組大鼠膝關(guān)節(jié)退變更為顯著，大鼠的KOA可促使其髖關(guān)節(jié)退變更為嚴(yán)重化，對統(tǒng)計學(xué)結(jié)果進(jìn)行分析，得出人體KOA和髖關(guān)節(jié)的退變之間無相關(guān)性的結(jié)論。