廣東順德地區孕產婦人群地中海貧血基因診斷及血液學特征分析

賀志軍 周遠青 馮影豪 林超群 梁玉全 潘碧燕

1南方醫科大學順德醫院（佛山市順德區第一人民醫院）檢驗科（廣東佛山528308）；2廣州中醫藥大學順德醫院（佛山市順德區中醫院）腫瘤科（廣東佛山 528300）

地中海貧血（thalassemia，簡稱地貧）又稱海洋性貧血，是一組由珠蛋白基因缺失或突變導致肽鏈合成障礙所引起的遺傳性血液?。?］，常見于熱帶和亞熱帶地區，我國主要以廣東、廣西、海南為高發地區［2-3］。重型地貧是一種非常嚴重的致死性疾病，目前尚無有效的治療方法，但可通過對孕產婦進行產前篩查和診斷以防止患兒出生，從而達到優生優育的目的，因此產前篩查與診斷是優生手段之一［4-5］。由于地中海貧血有著地域性的差異，國內外關于順德地區孕產婦人群地貧調查研究報道較少見，為完善本地區孕產婦人群地貧的遺傳學特點，本研究采用異常血紅蛋白表型、基因類型和血液學特征相結合分析的方法，研究本院孕產婦人群地貧發病率及基因類型，并比較分析各種地貧的血液學特征，為本院產前遺傳咨詢和優生優育提供更好的數據支持。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2016年1月至2017年12月在本院產科門診參與地貧初篩的孕產婦資料，排除急性感染、慢性失血以及近期服用影響血細胞參數藥物等的影響，共14 448例，年齡20～48歲。以平均紅細胞體積（MCV）＜82 fL、平均紅細胞血紅蛋白（MCH）＜27 pg和（或）HbA2＜2.5%或HbA2＞3.5%為初篩陽性。以基因診斷為金標準，將地貧基因檢測結果陰性的705例孕產婦作為對照組。本研究符合醫學倫理學規定，所有檢查均經過本人知情同意。

1.2檢測的方法及結果判斷

1.2.1血常規測定采用貝克曼庫爾特LH750全自動血細胞分析儀及配套試劑，檢測孕產婦的紅細胞MCV、MCH、MCHC等血細胞參數。

1.2.2血紅蛋白電泳測定采用法國Sebia公司生產的Capillarys2全自動毛細管電泳儀及配套血紅蛋白電泳試劑盒對標本進行HbA2檢測，嚴格按照廠家提供的說明書進行電泳分析。

1.2.3基因檢測及測序采用單管四重Gap-PCR法檢測3種缺失型α地中海貧血基因，包括東南亞型缺失（--SEA），右側缺失（-α3.7）和左側缺失（-α4.2）；采用PCR-反向斑點雜交（PCR-RDB）同時檢測標本中常見17種β珠蛋白基因突變位點（CD17、CD41-42、IVS-Ⅰ-1、βE、-28、CD27/28、CD71-72、CD43、-29、IVS-Ⅱ-654、CD31、CD14-15、-30、-32、CAPM、Int、IVS-Ⅰ-5），α、β地中海貧血基因檢測使用由中山大學達安基因股份有限公司生產的檢測試劑盒，相關檢測嚴格按照說明書進行操作。若有檢測結果高度懷疑的標本，采用基因測序法進行驗證，由深圳華大基因有限公司完成。

1.3統計學方法應用SPSS 25.0統計軟件對數據進行整理和分析，各組數據計量資料以均數±標準差表示，組間均數比較采用方差分析，計數資料采用百分率表示。以基因診斷為金標準，建立ROC曲線，計算ROC曲線下面積（AUC），以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1地中海貧血產前篩查結果順德地區14 448例孕產婦人群經血常規和血紅蛋白電泳篩查，初篩陽性2 656例，初篩陽性率為18.38%（2 656/14 448）。經地貧基因檢測的例數為1 159例，所占比例為8.02%（1 159/14 448）。檢出302例單純α地貧基因缺失，占26.06%（302/1 159），檢出143例單純β地貧基因突變，占12.34%（143/1 159），9例α、β復合型地貧，占0.78%（9/1 159），具體情況見表1。

表1 14 448例孕產婦地貧篩查與基因診斷結果Tab.1 14 448 cases of maternal thalassemia screening and genetic diagnosis results 例

2.2地中海貧血基因檢測結果本研究經地貧基因檢測的例數為1 159例，確診為地中海貧血的患者有454例，確診率為39.17%（454/1 159）。檢出5種α地貧基因缺失類型，其中東南亞型缺失（--SEA）所占比例最高，差異有統計學意義（χ2=335.173，P＜0.01）。共檢出11種β地貧基因突變類型，其中以-28（A→G）和CD41-42（-TCTT）位點的突變所占比例最高，其次為 IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD17（A→T），差異有統計學意義（P＜0.01）。檢出7種α、β復合型地貧基因類型，α、β以及α、β復合型地中海貧血具體的基因檢測結果見表2、3和4。

表2 α地中海貧血基因檢測結果Tab.2 α thalassemia gene test results

表3 β地中海貧血基因檢測結果Tab.3 β thalassemia gene test results

表4 α、β復合型地中海貧血基因檢測結果Tab.4 α、β Complex thalassemia gene test results 例

2.3 兩組血常規指標比較將地貧基因檢測結果陽性的454例孕產婦作為觀察組，并將地貧基因檢測結果陰性的705例孕產婦作為對照組，分別比較兩組對象的MCV、MCH、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、血紅蛋白A2（HbA2）水平，發現觀察組的MCV、MCH、MCHC水平均比對照組的低，而HbA2水平比對照組的高，差異有統計學意義（P＜0.01），見表5。

表5 兩組不同類型孕婦血常規指標Tab.5 Blood routine indicators of different types of pregnant women in two groups ±s

表5 兩組不同類型孕婦血常規指標Tab.5 Blood routine indicators of different types of pregnant women in two groups ±s

地貧類型觀察組對照組F值P值例數454 705 MCV（fL）75.22±9.11 90.12±8.51 799.90＜0.01 MCH（pg）23.64±3.37 29.36±3.18 851.38＜0.01 MCHC（g/L）314.21±7.87 325.38±7.90 553.91＜0.01 HbA2（%）3.37±1.47 2.57±0.46 180.61＜0.01

2.4 ROC曲線分析血常規指標在α地貧的診斷價值選取302例α地貧基因篩查陽性孕產婦作為觀察組，將地貧基因檢測結果陰性的705例孕產婦作為對照組，對兩組MCV、MCH、MCHC、HbA2進行多項分析，以敏感度為縱坐標，以1-特異性為橫坐標，建立ROC曲線。MCV、MCH、MCHC、HbA2曲線下面積分別為0.844、0.849、0.836、0.657。MCV、MCH、MCHC、HbA2診斷的靈敏度分別是87.7%、89.6%、80.7%、51.1%，特異度分別是71.9%、74.2%、75.8%、67.5%，見圖1。

圖1MCV、MCH、MCHC、HbA2的ROC曲線Fig.1 ROC curve of MCV、MCH、MCHC、HbA2

3 討論

地中海貧血是一種由于某類珠蛋白肽鏈的合成速率降低導致珠蛋白肽鏈合成不平衡，在臨床上表現為溶血性貧血的血紅蛋白病［6-8］。輕型地貧攜帶者臨床癥狀不明顯或無癥狀，如果不開展地貧篩查，可能導致地貧患兒的出生，對家庭和社會產生巨大的經濟和精神壓力［9］。廣東省屬于高發區之一，因此，進行產前地貧篩查和地貧基因檢測在廣東的各個地區顯得十分重要［10］。

本研究經地貧基因檢測的例數為1 159例，確診為地中海貧血的有454例，確診率為39.17%，本研究結果顯示：單純α地貧、單純β地貧以及α、β復合型地貧確診率分別為26.06%、12.34%、0.78%。本地區以α地貧基因為主，α地貧共檢出5種基因缺失類型，其中東南亞型缺失（--SEA）構成比為82.45%，所占比例最高，差異有統計學意義（χ2=335.173，P＜0.01），與國內其他地區α地貧基因缺失類型一致［11-13］。單純β地貧共檢出11種基因突變類型，其中-28（A→G）和 CD41-42（-TCTT）位點突變的構成比分別為29.37%、26.57%，所占比例最高，其次為IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD17（A→T），差異有統計學意義（P＜0.01）。分別檢出IVS-Ⅰ-1（G→A，G→T）位點突變和CAPM位點突變的稀有型別各1例，構成比為0.70%。而成明等［14］報道的廈門地區β地貧基因以IVS-Ⅱ-654（C→T）位點突變所占比例最高，這說明不同地區不同人群β地貧基因會因人群種屬不盡相同。α、β復合型地貧共檢出9例，發現7種地貧基因類型，基本都屬于稀有型別。

本研究分別比較了兩組對象的MCV、MCH、MCHC、HbA2水平，發現觀察組的HbA2水平比對照組的高，原因可能是觀察組以HbA2＜2.5%或HbA2＞3.5%為初篩陽性，而對照組的HbA2大部分在2.5%～3.5%范圍內的緣故。

本研究為完善本地區孕產婦人群地貧的遺傳學特點，分析了順德地區孕產婦人群地貧的基因類型、分布特點以及血液學特征，對本地區地中海貧血的防治有重要意義。為避免中重型地貧患兒的出生，夫婦一方確診為地貧攜帶者，即使其配偶血液學指標或HbA2篩查陰性，仍應進一步進行地貧基因診斷。本研究也有不足之處，筆者只分析了孕產婦這一特殊人群，而沒有分析其丈夫的地貧基因攜帶情況，同時有部分初篩陽性卻未做地貧基因檢測的孕產婦，這樣會導致地貧基因確診率降低。有少部分初篩陰性卻進行了地貧基因檢測的人群檢測出地貧基因，因為她們進行了產前遺傳咨詢，要求進行地貧基因檢測，因此對高度懷疑地貧或有家族史的人群應及時進行地貧基因檢測。本研究結果有助于更深入了解順德地區孕產婦人群的地中海貧血基因變異類型，對臨床診治、產前診斷、遺傳咨詢、地貧防治宣傳，防止重度地貧患兒出生，為臨床防治、實現優生優育具有一定意義。