噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的消解動態及初步膳食風險評估

毛江勝　李慧冬　陳子雷　張文君　郭長英　方麗萍　丁蕊艷

摘要：建立了QuEChERS -液相色譜一質譜聯用（LC - MS/MS）同時測定韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺殘留量的分析方法，并采用該方法研究了這2種農藥在韭菜中的消解動態及最終殘留量。樣品經乙腈提取，用N一丙基乙二胺（ PSA）、Cls和石墨化碳（PC）凈化，正離子電離，多反應監測模式，LC-MS/MS測定，外標法定量。結果表明：在0. 005-1.000 mg/kg添加水平下，噻蟲胺在韭菜中的平均回收率為90.0%～95.9%，相對標準偏差（RSD）為1.7%～3.3%;滅蠅胺在韭菜中的平均回收率為94.7～98.7%，RSD為0.8%～3.0%。樣品中噻蟲胺和滅蠅胺的定量限（ LOQ）分別為0.010、0.005 mg/kg。噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中殘留量均未檢出。20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑按有效成分l800g/h㎡施藥2次，施藥間隔期為45d，安全間隔期20d，噻蟲胺在韭菜中的殘留量均<0.01 mg/kg，滅蠅胺在韭菜中的殘留量均<0.005mg/kg。

關鍵詞：噻蟲胺;滅蠅胺;韭菜;殘留;消解;膳食風險評估

Dissipation Dynamics and Preliminary Dietary RiskAssessment of Clothianidin and Cyromazine in Chinese ChivesMao Jiangsheng， Li Huidong， Chen Zilei，Zhang Wenjun， Guo Changying， Fang Liping， Ding Ruiyan

Abstract In this study， a simple and practical QuEChERS - based liquid chromatography - tandemmass spectrometry （ LC - MS/MS） method was established to measure the residues of clothianidin and cyroma-zine in Chinese chives. The samples were extracted by acetonitrile and cleaned by primary secondary amine（ PSA） ， C18 and pesticarb （ PC） sorbent， and then were measured by LC - MS/MS operated in the positiveelectrospray ionization （ ESI） mode. The data were collected in multiple reaction monitoring （ MRM） mode.The results showed the average recoveries of clothianidin in Chinese chives were 90.0%～95.9% at the fourspiking levels from 0.005 to 1.0 mg/kg with the relative standard deviations （ RSDs） of l.7%～3.3% . Theaverage recoveries of cyromazine were 94.7～98.7% with the RSDs of 0.8%～3.0% . The limits of quantita-tion （ LOQs） of clothianidin and cyromazine were 0.01 mg/kg and 0.005 mg/kg， respectively. The dissipationdynamic studv showed that clothianidin and cyromazine in Chinese chives were not detected out. When 20%clothianidin - cyromazine SC was applied for 2 times at an interval of 45 days with the dose of 1800 g/h㎡ ，the residue of clothianidin was less than 0.01 mg/kg and that of cyromazine was below 0.005 mg/kg on the20th day after the last spray.

Keywords Clothianidin;Cyromazine; Chinese chives;Residue; Dissipation; Dietarv risk assessment

噻蟲胺（clothianidin），化學名稱：1-（2一氯-5-噻唑基甲基）-3 -甲基一2一硝基胍，是具有噻唑環的新煙堿類殺蟲劑，主要用于水稻、蔬菜、果樹及其他作物田防治薊馬、蚜蟲、飛虱等半翅目、鞘翅目、雙翅目和一些鱗翅目害蟲。滅蠅胺（cyromazine），又名環丙氨嗪，化學名稱為N-環丙基-1，3，5-三嗪一2，4，6三胺，屬三嗪類昆蟲生長調節劑，在動植物體內可通過脫烷基作用代謝為三聚氰胺。滅蠅胺已在許多國家獲準登記作為衣藥使用，在我國主要用于防治菜豆、黃瓜、韭菜等蔬菜上的美洲斑潛蠅和潛葉蠅[1，2]。噻蟲胺和滅蠅胺被分別推薦用于防治韭菜韭蛆，但缺乏兩者在韭菜中的最大殘留限量（MRL）標準，不僅為韭菜質量安全的監管帶來困難，也可能對人體健康存在潛在的風險。

關于噻蟲胺和滅蠅胺在基質中殘留的分析方法主要包括高效液相色譜法[3-5，11，12]和液相色譜一質譜法[6-10，13，14]。但目前尚未見采用高效液相色譜一質譜聯用方法同時檢測噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上殘留及消解動態并進行膳食風險評估的研究報道。

本研究擬建立韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺殘留量的液相色譜一質譜聯用（LC - MS/MS）檢測方法，研究20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑在設施栽培韭菜中的消解規律和殘留量并進行初步的膳食風險評估，旨在為2種農藥在韭菜上的合理使用及制定2種農藥在韭菜上的最大殘留限量（ MRL）標準提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

ABSciex QTRAP5500質譜儀（美國AB公司）;Acquity UPLC超高效液相色譜儀（美國Wa-ters公司）;色譜柱：Symmetry300 C18 4.6 mm×75mm，3.5μm;T25高速勻漿機（德國IKA公司）;2K高速離心機（美國SIGMA公司）;Laborota4000旋轉蒸發儀（德國Heidolph公司）;超聲波儀（江蘇昆山）;渦流混合器、電子天平、精密移液槍、氮吹儀以及其它實驗室常用儀器設備。

噻蟲胺（clothianidin）和滅蠅胺（cyromazine）標準品：100μg/mL（農業農村部環境保護科研監測所）;20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑（河南金田地農化有限責任公司）。甲醇、乙腈（色譜純，美國Thermofisher）。

1.2 試驗方法

按照《農藥殘留試驗準則》[15]和《農藥登記殘留田間試驗標準操作規程》[16]，于2016年7月至11月在山東濟南和黑龍江哈爾濱進行田間試驗。山東、黑龍江韭菜品種分別為雪韭、平韭。供試藥劑為20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑，試驗設置低劑量區、高劑量區、空白對照區，每小區面積約20㎡，重復3次。施藥方法：灌根;施藥適期：韭菜生長至10—15cm左右時。

1.2.1 消解動態試驗 消解動態試驗的施藥時間為2016年7月19日。施藥劑量為有效成分2700 g/hm2，施藥1次。分別于施藥后2h及1、2、3、5、7、10、14、21、30 d取樣。每處理重復3次。隨機在試驗小區采集1kg生長正常無病害的韭菜樣品，剪成1 cm以下的小段，混勻后四分法留樣2009，于-20℃保存，待測。

1.2.2 最終殘留試驗施藥劑量分高、低兩個劑量。低劑量為推薦劑量，有效成分1800 g/h㎡;高劑量為推薦劑量的1.5倍，即有效成分2700g/h㎡。分別施藥2次和3次，每處理重復3次，施藥間隔期45d。分別于最后一次施藥20、30d后采樣。取樣方法同1.2.1。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品前處理 稱取樣品20g于100mL廣口瓶中，加入乙腈40mL，高速勻漿機勻漿1min，3000r/min離心5min，將上清液過濾人Agi-lent Bond Elut樣品處理管（C18 50 mg，PSA 50mg，PC 8 mg，MgS04 150 mg），將有機相收集于旋轉蒸發瓶，減壓濃縮至近干，2.5 mL甲醇定容，過0. 22μm有機濾膜，待進樣檢測。

1.3.2 儀器測定條件 WatersSymmetry300色譜柱（Cl8 4.6 mm×75 mm，3.5μm）;流動相：V（0.1%甲酸水溶液）：V（甲醇）=3070;流速：0.80mL/min;柱溫400C;進樣體積1.0μL。正離子方式掃描;霧化氣體為氫氣;霧化器壓力55379.2kPa。噻蟲胺和滅蠅胺的測定參數見表1。在此條件下，噻蟲胺和滅蠅胺的保留時間分別為1.17、1.65 min（圖1）。

1.3.3 標準溶液的配制及標準曲線的繪制 將100 μg/mL的噻蟲胺標準溶液用甲醇稀釋配制0.5、0.2、0.1、0.05、0.01、0.005 μg/mL的系列標準工作溶液;將100 μg/mL的滅蠅胺標準溶液用甲醇稀釋配制0.2、0. 02、0.01、0.005、0.001、0. 000 5μg/mL系列。按1.3.2的條件測定，以進樣質量濃度為橫坐標、對應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線。外標法定量。

1.3.4 添加回收試驗 在韭菜中分別添加噻蟲胺和滅蠅胺標準工作溶液，添加水平分別為0.01、0.5、1.0 mg/kg，滅蠅胺為0.005、0.05、0.5、1.0mg/kg，每個水平重復5次，按本研究建立的方法進行樣品前處理和測定，分別計算平均添加回收率和相對標準偏差。

1.4 農藥殘留膳食攝入風險評估

膳食攝人評估是在毒理學和殘留化學評估的基礎上，對居民因膳食攝人帶來的農藥殘留對人體健康造成的風險進行定量評價，為提出農藥最大殘留限量建議值提供依據。本研究中膳食的來源包括韭菜、已登記作物及食品中農藥最大殘留限量標準（GB 2763-2016）[17]中有殘留限量值的作物。

2 結果與分析

2.1 方法的線性范圍及檢出限

噻蟲胺在0.005～0.5 mg/L和滅蠅胺在0.0005—0.2 mg/L范圍內，質量濃度與對應的峰面積間線性關系良好。經最小二乘法擬合得標準曲線，噻蟲胺回歸方程為Y=2×106X一3241.4（R=0.995），滅蠅胺回歸方程為Y=2×107X一12604（R=0.995）。典型色譜圖見圖2。

2.2 方法的準確度及精密度

添加回收試驗結果（表2）表明：在0. 01、0.5、1.0 mg/kg 3個添加水平下，基質為韭菜時，噻蟲胺平均回收率為90.0%～95.9%，相對標準偏差（RSD）為1.7%～3.3%;在0. 005，0.05、0.5、1.0 mg/kg 4個添加水平下，基質為韭菜時，滅蠅胺平均回收率為94.7- 98.7%，RSD為0.8%～3.0%。根據標準曲線最低檔濃度和進樣體積，計算得到滅蠅胺和噻蟲胺的檢出限（ LOD）均為0.5 ng;根據添加回收最低檔添加濃度，噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的定量限（LOQ）分別為 0.01mg/kg和0.005mg/kg。

2.3 噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上的消解動態

噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中殘留量均未檢出，故無法計算農藥消解半衰期。這可能與施藥方式有關，由于施藥方式是灌根，藥劑并未立即被韭菜植株吸收，而采樣是韭菜植株，所以韭菜中均沒有檢出農藥殘留。

2.4 噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上的最終殘留量

由表3可知，20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑以高、低2個劑量施藥2～3次，施藥間隔期為45d，距末次施藥后20d和30d采樣測定，韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺的殘留量均為未檢出。

2.5 膳食攝入風險評估結果

根據噻蟲胺日允許攝人量（ADI）0.1 mg/kgbw及中國人平均體重63 kg[18，19]，計算得到中國成人的日允許攝人量為6.3mg。依據食品中農藥最大殘留限量標準（GB 2763-2016）中膳食風險評估要求，通過已有的殘留限量標準、試驗中得到的20d所對應的規范殘留試驗中值（STMR）以及中國成人的日允許攝人量，計算得出膳食風險概率為5.63%。結合中國農藥登記情況和居民人均膳食結構，計算得到普通人群噻蟲胺的理論最大日攝人量（ TMDI）為0.35 mg，占ADI的5.63%，表明通常不會對一般人群健康發生不可接受的風險（表4）。

根據滅蠅胺日允許攝人量（ ADI）0.06 mg/kgbw及中國人平均體重63 kg[19]，計算得到中國成人的日允許攝人量為3.78 mg。依據食品中農藥最大殘留限量標準（GB 2763-2016）中膳食風險評估要求，通過試驗中得到的20 d所對應的STMR（0.005 mg/kg）以及中國成人的日允許攝人量，計算得出膳食風險概率為3.86%。結合中國農藥登記情況和居民人均膳食結構，計算得到普通人群滅蠅胺的理論最大日攝人量（ TMDI）是0.15mg，占ADI的3.86%，表明不會對一般人群健康發生不可接受的風險（表5）。

3 結論

建立了基于QuEChERS - LC - MS/MS同時測定韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺殘留量的分析方法。在0. 005～1.0 mg/kg范圍內，噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的平均添加回收率為90.0%～98.7%、RSD為0.8%～3.3%。利用建立的殘留分析方法，進行動態消解試驗結果表明，噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的殘留量均未檢出。

噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上均未獲得登記。擬推薦20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑按有效成分1800 g/h㎡施藥2次，施藥間隔期為45d，安全間隔期20d。噻蟲胺在韭菜中的殘留量均<0.01mg/kg，滅蠅胺在韭菜中的殘留量均<0.005mg/kg。在此基礎上，結合膳食攝人結構模型分析，對噻蟲胺和滅蠅胺的膳食風險進行初步評估，其風險概率<1，分別為5.63%和3.86%。表明栽培韭菜，按照推薦劑量和施藥次數，施用20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑，通常不會對一般人群健康產生不可接受的風險。目前，中國尚未制定噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的最大殘留限量值（MRL），本研究結果為制定噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的MRL值提供了數據支撐。

參考文獻：

[1] 張明媚，孫克，吳鴻飛，等.噻蟲胺的合成[J].農藥，2010，49（2）：94 -96.

[2] 王忠燕，苑士濤，李夢瑤，等.20%滅蠅胺·噻蟲胺懸浮劑不同劑量防治韭菜遲眼蕈蚊幼蟲的田間藥效試驗[J].農藥，2017，56（1）：76 -78.

[3] 侯如燕，蔡薈梅，張正竹，等.液相色譜法檢測水果蔬菜中的煙堿類農藥殘留[J].分析試驗室，2010，29（2）：59 -63.

[4] 楊慶喜，劉娜，程功，等.噻蟲胺在水稻和土壤中的殘留及消解動態[J].農藥，2018，57（5）：343 -346，358.

[5] 李廣領，谷珊山，劉博，等.基質分散萃取一高效液相色譜法對菠菜中噻蟲胺殘留的檢測[J].湖北農業科學，2016，55（2）：465 -468.

[6] 張鵬，金芬，楊莉莉，等.噻蟲胺在番茄和土壤中的殘留及消解動態[J].農藥學學報，2016，18（4）：490 -496.

[7] 劉艷萍，王思威，孫海濱，等.噻蟲嗪及其代謝物噻蟲胺在節瓜中的消解動態及初步膳食風險評估[J].農藥學學報，2018，20（2）：211 -216.

[8] 張春榮，何紅梅，徐玲英，等.噻蟲胺在水稻中的殘留分析方法及其消解動態[J].浙江農業學報，2014，26（5）：1263 -1267。

[9] 徐軍，張盈，董豐收，等.超高效液相色譜一串聯質譜法快速檢測菜豆及土壤中的滅蠅胺殘留[J].農藥學學報，2012，14（6）：654 -658.

[10]樊苑牧，俞雪鈞，顧曉俊，等.高效液相色譜法測定含脂羊毛中滅蠅胺和環蟲腈[J].分析化學，2010，38（1）：113 -116.

[11] 郭筠，莫漢宏，安鳳春，等.HPLC法檢測滅蠅胺在黃瓜和土壤中的殘留[J].環境化學，2004，23（6）：700 -703.

[12] 王冉，劉鐵錚，柳偉榮.SPE - HPLC法測定雞蛋中滅蠅胺一環丙氨嗪[J].浙江農業學報，2005，17 （6）：376 - 379.

[13] 錢鳴蓉，章虎，何紅梅，等.親水作用色譜一串聯質譜測定蔬菜中滅蠅胺及其代謝物三聚氰胺[J].分析化學，2009，37（6）：902 -906.

[14] 王京文，周航，卜惠斐，等.滅蠅胺及其代謝物三聚氰胺在大棚黃瓜上的殘留降解動態[J].農藥，2011，50（2）：130 -140.

[15] NY/T 7882004，農藥殘留試驗準則[s].北京：中國農業出版社，2004.

[16] 農業部農藥檢定所.農藥登記殘留田間試驗標準操作規程[M].北京：中國標準出版社，2007：143 - 147，320 -324.

[17] GB 27632016，食品安全國家標準食品中農藥晟大殘留限量[s].北京：中國標準出版社，2017.

[18] 中國農藥信息網.農藥登記信息[EB/OL].http：//www.chinapesticide. gov. cn/2017 - 11 - 20.

[19] 中華人民共和國衛生部，中華人民共和國科學技術部，中華人民共和國國家統計局.中國居民營養與健康狀況2002[M].北京：人民衛生出版社，2005.