薏苡種質資源中甘油三油酸酯和薏苡素的測定

蒙秋伊 付瑜華 申剛

摘要：采用高效液相色譜法（HPLC）分析比較24份薏苡仁中甘油三油酸酯、薏苡根中薏苡素含量的差異，結果表明，24份薏苡種質的薏苡仁中甘油三油酸酯含量存在較大差異，Y78、Y28、Y83、Y24、Y8、Y216、Y14這7份種質的薏苡仁中甘油三油酸酯含量低于0.5%，其他均高于0.5%;甘油三油酸酯含量最高的種質Y166比最低的種質Y78高 3.82倍，薏苡根中薏苡素含量最高的種質Y229比最低的種質Y211高1.22倍;種質Y166、Y164的甘油三油酸酯、薏苡素含量均較高，可作為薏苡品種選育的親本材料。

關鍵詞：薏苡;甘油三油酸酯;薏苡素;高效液相色譜法

中圖分類號： S519.01 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2019）01-0186-03

薏苡（Coix lacryma-jobi L.）為禾本科薏苡屬1年生或多年生草本植物，別稱薏仁米、六谷子、藥玉米等，是傳統藥食兼用經濟作物，具有極高的營養價值和重要的藥用價值[1-2]。薏苡干燥成熟種仁具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結等功效[3]。有研究表明，薏苡對肉瘤、肝癌、胃癌、肺癌等具有較好療效[4-6]，其抗腫瘤主要活性成分為薏苡仁油中的甘油三酯類成分（TAGs），其中包括甘油三油酸酯、甘油三亞油酸酯、1，2-油酸-3-亞油酸-甘油三酯、1，2-亞油 酸-3-油酸-甘油三酯等，《中國藥典》2015年版以甘油三油酸酯作為評價薏苡仁藥材質量指標成分[3]。目前，抗腫瘤藥康萊特注射液的主要成分就是薏苡仁油，并作為一種較為理想的抗腫瘤藥物廣泛應用于肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、鼻咽癌、腎癌等的治療或輔助治療[7-9]。薏苡根收載于貴州省中藥材、民族藥材質量標準（2003年版），為貴州少數民族用藥，其作用成分為薏苡素，具有清熱利濕、健脾和殺蟲等功效，用于治療熱淋、血淋、石淋、黃疸、水腫、白帶過多、腳氣、風濕痹痛和蛔蟲病等癥[10]。

薏苡種質資源中甘油三油酸酯和薏苡素的含量差異較大，導致薏苡品質良莠不齊。甘油三油酸酯一般在薏苡種仁中提取[11-14]，而薏苡素則以薏苡根部含量相對最高[15-16]，2種藥用成分主要提取部位不同。為達到有效利用，須同時采收薏苡仁、薏苡根分別提取薏苡甘油三油酸酯、薏苡素，而培育一個甘油三油酸酯、薏苡素含量高的“雙高”薏苡品種十分有價值。本試驗以藥典指標成分甘油三油酸酯、薏苡素為研究指標，考察貴州省亞熱帶作物研究所24份薏苡種質資源其成分含量差異，初步評價其藥材品質，為優質“雙高”薏苡的選育提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Prominence LC-20A型液相色譜儀，由日本島津公司生產;Alltech ELSD 3300型蒸發光散射器，北京奧泰科技有限公司提供;KQ5200E型超聲波清洗器，由昆山市超聲儀器有限公司生產;RE-52型旋轉蒸發器，由上海亞榮生化儀器廠生產;FS-Ⅱ型藥材粉碎機，由廣州航信科學儀器有限公司生產;BSA224S型電子天平，由賽多利斯科學儀器（北京）有限公司生產。使用化學試劑有乙腈、二氯甲烷、甲醇（Merck公司生產，色譜純）;試驗用水為娃哈哈純凈水;對照品甘油三油酸酯、薏苡素，分別購于Sigma公司、卡邁舒（上海）生物技術有限公司，質量分數均大于98.0%。

1.2 試驗前期處理

試驗于2016年11月在貴州師范大學分析測試中心進行，分別采集24份來源不同的薏苡種質資源（表1）成熟種子及成熟期根;種子脫殼得薏苡仁，烘箱中40 ℃烘24 h，粉碎，過100目篩，備用;成熟期根用烘箱中40 ℃烘干，粉碎，過40目篩，備用。

1.3 對照品和供試品溶液的制備

精確稱取甘油三油酸酯對照品適量，加流動相制成 0.14 mg/mL 的溶液;精確稱取薏苡素對照品適量，加甲醇配制成0.096 mg/mL的溶液。稱量薏苡仁粉末0.1 g于20 mL瓶中，加入乙腈、二氯甲烷質量比為59 ∶ 41的流動相5 mL;浸泡過夜，超聲30 min;取出，冷卻，稱質量，加同樣的流動相補足質量，搖勻;濾紙過濾，濾液用有機膜過濾;采用高效液相色譜法（HPLC）分析濾液的甘油三油酸酯含量。稱量薏苡根粉末大約1 g于索氏提取器，加丙酮提取至無色;待提取液揮發干，25 mL容量瓶中加甲醇溶解定容;有機膜過濾，采用高效液相色譜法（HPLC）分析濾液的薏苡素含量。

1.4 液相色譜條件

測量甘油三油酸酯的色譜條件：色譜柱為250 mm×4.60 mm、5 μm phenomenex C18柱，流動相為乙腈、二氯甲烷質量比為59 ∶ 41，流量為0.7 mL/min，色譜柱溫度為30 ℃;蒸發光散射檢測器檢測。測量薏苡素的色譜條件：色譜柱為250 mm×4.60 mm、5 μm wondasil C18柱;流動相為乙腈、水、磷酸質量比為25 ∶ 75 ∶ 0.1，流速為0.7 mL/min，色譜柱溫度為25 ℃，紫外檢測器波長為232 nm。對照品和供試品溶液的高效液相色譜見圖1。

1.5 高效液相色譜法測試效果檢驗

1.5.1 線性關系檢驗 分別精確吸取甘油三油酸酯對照品溶液2、5、10、15、20 μL及薏苡素對照品溶液2、4、6、8、10 μL，采用HPLC法分別測定峰面積;以進樣量為橫坐標（x），峰面積為縱坐標（y），分別繪制甘油三油酸酯、薏苡素的標準曲線，檢驗線性情況。

1.5.2 精密度檢驗 分別精確吸取甘油三油酸酯、薏苡素對照品溶液10 μL，HPLC法連續測定6次甘油三油酸酯、薏苡素的峰面積，計算峰面積相對標準偏差（RSD）。

1.5.3 穩定性檢驗 分別精確吸取同一薏苡仁、薏苡根供試品溶液，HPLC法分別測定薏苡仁甘油三油酸酯、薏苡根薏苡素的峰面積，進樣時間分別為0、4、8、12、24 h，每次進樣量為10 μL，計算峰面積相對標準偏差（RSD）。

1.5.4 重復性檢驗 分別稱取已測的同一薏苡仁、薏苡根樣品各6份，薏苡仁0.6 g、薏苡根0.2 g，分別制備成供試品溶液;HPLC法分別測定薏苡仁甘油三油酸酯、薏苡根薏苡素的峰面積，每次進樣量為10 μL，計算峰面積相對標準偏差（RSD）。

1.5.5 加樣回收率檢驗 分別稱取同一薏苡仁、薏苡根樣品各6份，薏苡仁0.5 g、薏苡根1.0 g，分別加入等量的甘油三油酸酯、薏苡素對照品溶液，甘油三油酸酯、薏苡素添加量分別為0.386、0.296 mg，分別制備成供試品溶液，HPLC法測定薏苡仁、薏苡根分別添加甘油三油酸酯、薏苡素的峰面積，計算甘油三油酸酯、薏苡素平均回收率和RSD值。

1.6 供試樣品的測定

分別精確吸取24份薏苡種質薏苡仁、薏苡根供試品溶液各10 μL作為進樣，HPLC法分別測定薏苡仁、薏苡根峰面積，按外標法計算甘油三油酸酯、薏苡素含量。每個樣品重復3次，取平均值。

2 結果與分析

2.1 高效液相色譜法測試效果檢驗

2.1.1 線性關系檢驗 試驗結果表明，甘油三油酸酯、薏苡素的標準曲線分別為y=1.292x+17.310（r2=0.983 0）、y=1 997.308x+10.692（r2=0.999 9），線性范圍分別為 0.335～3.1230、0.280～1.310 μg，線性關系良好。

2.1.2 精密度檢驗 試驗結果表明，甘油三油酸酯、薏苡素峰面積相對標準偏差（RSD）分別為1.25%、0.96%，說明試驗精密度良好。

2.1.3 穩定性檢驗 試驗結果表明，甘油三油酸酯、薏苡素峰面積RSD值分別為0.44%、0.28%，說明試驗穩定性良好。

2.1.4 重復性檢驗 試驗結果表明，甘油三油酸酯、薏苡素峰面積RSD值分別為1.05%、1.10%，說明試驗重復性較好。

2.1.5 加樣回收率檢驗 試驗結果表明，甘油三油酸酯、薏苡素的平均回收率分別為100.5%、98.80%，RSD值分別為1.02%、1.23%，說明試驗方法準確、可靠。

2.2 供試樣品的測定結果

由表2可見，24份薏苡種質中，薏苡仁中甘油三油酸酯含量達到0.8%以上的有6份種質，分別為Y107、Y164、Y44、Y184、Y84、Y166，其中含量最高的為Y166，達到0.945%;甘油三油酸酯含量低于0.5%的有7份種質，分別為Y78、Y28、Y83、Y24、Y8、Y216、Y14;根中薏苡素含量達到560 mg/kg以上的有6份種質，分別為Y78、Y14、Y24、Y164、Y166、Y229，其中薏苡素含量最高的為Y229，達到666.7 mg/kg，最低的為Y211，薏苡素含量為300.0 mg/kg。由圖2可知，薏苡仁中甘油三油酸酯含量與薏苡根中薏苡素含量無相關性。

3 結論

《中國藥典》2015年版中規定，薏苡仁中甘油三油酸酯（C57H104O6）含量不得少于0.50%[3]。本試驗測定24份薏苡種質的薏苡仁甘油三油酸酯含量發現，不同種質的薏苡仁中甘油三油酸酯含量存在較大差異，Y78、Y28、Y83、Y24、Y8、Y216、Y14這7份種質的薏苡仁中甘油三油酸酯含量低于 0.5%，其他均高于0.50%，符合藥典標準;甘油三油酸酯含量最高的Y166比最低的Y78高3.82倍;薏苡根中薏苡素量含量相對最高的Y229比最低的Y211高1.22倍;24薏苡種質的薏苡根中薏苡素含量與薏苡仁中甘油三油酸酯含量無相關性。綜合各種質中甘油三油酸酯、薏苡素含量看，種質Y166、Y164二者相對較高，可作為“雙高”藥用薏苡品種的親本材料。

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