加味四妙湯對濕熱質高尿酸血癥模型大鼠血清生化指標的影響*

湯雙齊，何希俊

（廣州中醫藥大學附屬中山市中醫院，廣東 中山 528400）

近年來，高尿酸血癥的發病率逐年上升，且發病年齡呈年輕化趨勢，但由于無明顯的臨床癥狀而常被忽視[1]。中醫學認為，高尿酸血癥形成的主因為濕濁、熱毒、血瘀、痰凝，臨床多以祛濕通絡、泄濁解毒為主要治療法則[2]。高尿酸血癥不僅是急性痛風性關節炎、慢性痛風性疾病和尿酸性腎病最重要的生化基礎，而且可能是高血壓、血脂異常、脂肪肝、胰島素抵抗、慢性腎病等多種代謝相關性疾病和心血管疾病發生、發展的獨立危險因素[3]。隨著對高尿酸血癥研究的不斷深入，發現其作為上述疾病的危險因素，與其可造成血管內皮細胞功能障礙相關[4]，血管內皮細胞能合成和釋放有舒張或收縮功能的物質，如一氧化氮（NO）、內皮素 -1（ET-1）和血栓烷素 B2（TXB2），以調控高尿酸血癥，故血管內皮功能的保護不容忽視。本研究中通過建立濕熱質高尿酸血癥大鼠模型，以加味四妙湯進行干預，觀察模型大鼠血清中尿酸(UA)，NO，ET-1，TXB2含量的變化，探討加味四妙湯對模型大鼠UA及血管內皮功能的影響。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、儀器與試藥

動物：健康SPF級SD大鼠80只，雄性，6～8周，體質量80～100 g，購自廣州中醫藥大學動物實驗中心，動物許可證號為SYXK（粵）2017-0179。飼養條件，室溫16～22℃，相對濕度65% ～70%，自由飲水、進食，光照12 h(8：00-20：00)。

儀器：UV-7504型紫外-可見分光光度計（上海精密儀器儀表有限公司）；DNM-9606型酶標分析儀（北京普朗新技術有限公司）。

試藥：加味四妙湯（醫院中藥制劑室自制）；苯溴馬隆片（江蘇昆山龍燈瑞迪制藥有限公司，批號為P20180718，規格為每片50 mg）；鹽酸乙胺丁醇片（上海信誼天平藥業有限公司，批號為P20101214，規格為每片250 mg）；氧嗪酸鉀（美國Sigma公司，純度為97%）；大腸桿菌內毒素、UA測試盒（批號為12-2-1）、NO試劑盒（批號為12-1-2）均購自南京建成生物工程研究所；ET-1酶聯免疫吸附（ELISA）試劑盒（批號為R0925）、血 栓 素 B2（TXB2）ELISA 試 劑 盒 （批 號 為R0707)，均購自北京華英生物技術研究所。

1.2 方法

分組、建模及給藥：80只SD大鼠適應性喂養7 d，按隨機數字表法分為空白（等體積蒸餾水）組(A組)、模型（等體積蒸餾水）組(B組)、苯溴馬隆（10 mg/kg）組(C組)、加味四妙湯（8.3 g/kg，按生藥計）組(D 組)，各 20只。參考文獻[5-6]，各組大鼠予以肥甘飲食（5%豬油、3%雞蛋黃、5%蜂蜜摻入普通飼料）及尾靜脈注射大腸桿菌內毒素（2 μg/kg），每周 2次，連續 6周，以建立濕熱質大鼠模型。除A組外，其余各組大鼠均在建立濕熱質模型的同時皮下注射氧嗪酸鉀（200 mg/kg）及灌胃乙胺丁醇（250 mg/kg），每天1次，連續6周，以建立濕熱質高尿酸血癥大鼠模型。建模成功后，各組大鼠灌胃給予相應藥物，每天1次，連續14 d。

指標檢測：末次給藥2 h后，腹腔注射7%水合氯醛（0.5 mL/100 g），麻醉大鼠，腹主動脈取血，3 000 r/min離心5 min，分離血清，采用比色法測定UA及NO的含量；采用ELISA法測定ET-1及TXB2的含量。

1.3 統計學處理

采用SPSS20.0軟件學軟件分析。計量資料以表示，當數據滿足正態分布且組間方差齊時，以ANOVA分析，如不滿足上述條件則行秩和檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠血清UA及NO含量

與A組比較，B組大鼠UA含量顯著增加，NO含量顯著減少（P<0.05）；與B組比較，C組及D組大鼠UA含量顯著減少，NO含量顯著增加（P<0.05）。詳見表1。

表1 各組大鼠血清UA和NO含量比較（±s，n=20）

表1 各組大鼠血清UA和NO含量比較（±s，n=20）

注：與A組比較，#P<0.05；與B組比較，*P<0.05。

組別 劑量（g/k g）U A(μ m o l/L)N O(μ m o l/L)E T-1(p g/m L)T X B 2(p g/m L)A組B組C組D組0.0 1 8.3 1 4 3.5 6±1 5.3 8 1 9 3.3 4±1 8.3 9#1 0 3.4 6±1 3.5 4*1 1 1.8 9±1 2.9 4*3 3.4 1±1.6 8 2 6.3 2±1.3 9#3 8.4 5±2.5 4*3 6.1 2±2.1 9*1 0 4.3 2±9.5 6 1 3 6.3 4±1 0.3 8#8 2.2 5±6.6 4*8 6.3 8±5.5 6*1 1 6.6 4±1 3.5 6 1 4 3.7 8±1 0.3 6#1 0 3.4 5±9.3 4*9 6.6 7±8.9 4*?

2.2 大鼠血清ET-1及TXB2含量

與A組比較，B組大鼠ET-1和TXB2含量均顯著增加（P<0.05）；與B組比較，C組及D組大鼠ET-1和TXB2含量均顯著減少（P<0.05）。詳見表1。

3 討論

中醫學認為，中醫體質與健康狀態密切相關，體質類型決定對某些致病因子的易感性及所產生疾病類型的傾向性。多數中醫學者認同高尿酸血癥的病機為肝腎不足，脾胃損傷，濕熱痰濁內蘊、痰瘀互阻，久之形成濕熱痰濁內蘊（血中UA生成過多）或痰濁濕熱排泄減緩減少（血中UA排泄減少），以致濕熱痰濁內蘊加重[7]。既往研究發現，濕熱體質類型人群是該病的多發人群。隨著對高UA血癥研究的深入，發現高UA引起的病理生理變化并不完全由尿酸鹽結晶引起，UA還可通過其他途徑影響內皮細胞功能，從而參與心血管疾病及腎臟病的發生[8]。KARBOWSKA等[9]對腎移植術后患者的研究發現，與正常UA水平人群相比，高UA患者血清中血管內皮功能標志物（血漿抵抗素和可溶性血漿黏附分子1）濃度顯著升高。STAKHOVA等[10]研究發現，和正常血UA水平人群相比，血管內皮功能障礙標記物（尿蛋白、血漿內皮素原及頸動脈內中膜厚度等）在高UA患者血清中呈現高表達。高UA可通過影響血管內皮功能障礙和炎性反應的發生，參與心血管疾病及腎臟病發生。因此，深入研究濕熱質高尿酸血癥發病機制及防治方案具有重要臨床意義。

四妙方源于清代張秉成《成方便讀》，該方以黃柏為君藥，蒼術為臣藥，薏苡仁、牛膝為佐藥，有清熱除濕、宣痹通絡功效，為臨床治療高尿酸血癥的基礎方。四妙方雖有清熱利濕之功效，但活血化瘀作用稍弱。本試驗中加味四妙湯（蒼術、黃柏、薏苡仁、牛膝、地龍、丹參）以現代中醫理論為基礎，結合現代中藥藥理研究組方。現代藥理研究證明，黃柏具有抗氧化、保護腎臟、抗炎、細胞免疫調節等藥理作用，蒼術酮可強烈抑制Na+，K+-ATP酶活性，利尿同時降低了UA水平；牛膝能減少脂質吸收，阻止類脂質在血清滯留或滲透到動脈內膜，從而改變脂質及嘌呤的代謝，最終達到調脂、降血UA、消除尿蛋白的目的。丹參能抗血栓形成，提高纖溶酶活性；延長出血、凝血時間；抑制血小板聚集，改善血液流變學特性。地龍提取物可提高小鼠紅細胞變形能力，從而改善血液流變學特性和微循環障礙。研究表明，UA生成增多，氧自由基同時生成增多，NO濃度降低，損害了血管內皮依賴的舒張功能；ET-l可客觀反映血管功能，靜脈注射ET-1后模型狗的外周血管阻力、肺血管阻力和冠狀血管阻力增加，肺毛細血管楔壓上升；TXB2是由TXA2在體內轉變而來，后者是主要由血小板微粒體合成并釋放的具有強烈收縮血管和促進血小板聚集作用的生物活性物質，通過檢測血漿TXB2可間接判斷體內TXA2的水平[11]。四妙湯具有降低高尿酸血癥患者血清UA水平的作用。程新等[12]的研究表明，桃紅四物湯合四妙丸可明顯降低高尿酸血癥患者血清中UA水平；其在改善血管內皮細胞功能方面，能顯著增加NO和NOS含量，減少ET和TXB2含量；在抗氧化應激和炎性反應方面，可明顯增強血清中SOD活性及減少腫瘤壞死因子-α、白細胞介素18的含量。劉文毅等[13]研究發現，活血四妙湯可減少高尿酸血癥模型大鼠血UA含量，其作用機制與調節黃嘌呤氧化酶活性有關。

綜上所述，加味四妙湯能減少濕熱質高尿酸血癥模型大鼠血清UA，ET-1，TXB2的含量，增加NO的含量。