大鼠麻醉后經腹主動脈連續采血的白細胞數值變化

沈鏈鏈 鐘義紅 徐 彬 靳蘇香 王玉邦

(南京醫科大學公共衛生學院,江蘇省醫藥農藥獸藥安全性評價與研究中心,江蘇南京 211166)

血細胞分析儀是對血液中的白細胞、紅細胞、血小板等進行分類計數，同時可以得到血紅蛋白濃度，紅細胞壓積等與血液有關的數據，能有效的幫助篩查異常樣本，提供可靠的診斷依據。對于實驗末期的動物而言，通常對動物麻醉后連續采集幾份血樣做不同的分析，如血細胞分析、生化分析或血凝分析等。而目前暫無研究證明先采的血標本與后采的血標本在血常規指標上有無差異。本實驗用雌雄大鼠各10只，每只大鼠用水合氯醛麻醉后，經腹主動脈采血，用EDTA-抗凝管連續收集5份血液標本用于血液分析，對比血常規的各項指標有無差異。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及飼養

SPF級健康離乳SD大鼠購自上海西普爾-碧凱實驗動物有限公司，飼養于屏障系統，溫度20-26℃，相對濕度40%-70%，飼料購自江蘇省協同醫藥生物工程有限責任公司，自由飲水和飲食。

1.2 儀器

Advia2120i全自動血液分析儀購自西門子。

1.3 材料

EDTA-真空抗凝管購自江蘇康健醫療用品有限公司。

1.4 方法

大鼠正常飼養30d后，隔夜禁食。10%水合氯醛麻醉，經腹主動脈用采血針采血收集至真空采血管，收集血液1ml 左右立即取新的真空采血管收集血液，共連續采血5管。

全自動血液分析儀檢測：用西門子advia 2120i進行血液學分析，種屬選擇大鼠，自動進樣模式檢測。手工計數方法：參考全國臨床檢驗操作規程（第3版）[1]完成。取小試管一支，加入白細胞稀釋液0.38ml（白細胞稀釋液：冰乙酸2ml，蒸餾水98ml，10 g/L 亞甲藍溶液3滴，混勻后過濾），用移液器吸取血液20μl，擦去沾的血，將血液打入白細胞稀釋液混勻，待紅細胞完全破壞，液體變為棕褐色后，再次混勻充池，靜置3分鐘后，待白細胞下沉。用低倍鏡計數四角四個大方格內的細胞數，壓線細胞按數上不數下，數左不數右的原則進行計數，白細胞數/l =（N/4）*10*20*106=（N/20）*109。

用SPSS軟件進行數據統計分析，后一份血標本的均數與前一份血標本的均數用配對T檢驗進行統計學比較。

2 結果

2.1 儀器檢測白細胞數值

雌、雄大鼠各10只，每只大鼠采5份血液標本，共100個數據。隨著采血順序的延后，白細胞的數值呈下降趨勢。紅細胞、血紅蛋白、血小板等其它指標均未觀察到顯著差異。除了2例雌性大鼠，1例雄性大鼠的第4管血樣的白細胞數小于第5管，其余的數據均呈現出隨著采血次序的延后，白細胞呈下降趨勢。各采血順序的血樣的均值和標準差見表1。

表1 儀器檢測白細胞值（均值±標準差）

2.2 手工計數白細胞數值

為了進一步驗證該數據的可靠性，又進一步進行手工計數（手工計數只計數了白細胞總數，未進行分類計算百分比）。除了1例雌性大鼠第4管血樣的白細胞數小于第5管，1例雌性大鼠第3管血樣的白細胞數小于第4管，3例雄性大鼠第4管血樣的白細胞數小于第5管，其余的數據均呈現出隨著采血次序的延后，白細胞呈下降趨勢。各采血順序的血樣的均值和標準差見表2。

表2 手工計數白細胞值（均值±標準差）

2.3 根據儀器檢測白細胞值計算每管血相對于上一管血的變化率

根據儀器自動分析的白細胞值，按公式計算每管血樣相對于上一管血的白細胞值的變化百分比，結果見表3。

表3 由儀器檢測的白細胞值計算的變化率

以此類推。

2.4 根據手工計數白細胞值計算每管血相對于上一管血的變化率

根據手工計數的白細胞值，按公式計算每管血樣相對于上一管血的白細胞值的變化百分比，結果見表4。

表4 由手工計數的白細胞值計算的變化率

3 討論

本次研究發現，隨著采血順序的延后，白細胞的數值呈下降趨勢。儀器計數顯示，這種下降主要由于中性粒細胞和淋巴細胞的數值下降引起，這兩者相加約占白細胞總數的95%以上。其余的單核細胞，嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞由于絕對值和百分比都相對較小，未觀察到明顯的變化。

本次研究中也出現了幾例前一管血標本的白細胞數值小于后一管的現象，但都是順序靠后的血標本（如第3管血相對于第4管血，第4管血相對于第5管血），造成這種現象可能有如下原因：1，靠后的血標本采血過程相對較慢，血液流速降低，可能會產生一些較小的血凝塊，影響檢測的準確性。2，靠后的血標本本身的白細胞數值已經很低，較小的隨機誤差（儀器檢測或者手工檢測）即可產生影響。因此這些結果不足以影響本次研究的結論。

筆者推測白細胞的這種下降趨勢可能與失血造成的體內環境的改變有關。王君等發現失血易引起血漿IL-6、IL-8、TNF-α和NOS水平升高[2]，說明急性失血時體內環境發生急劇變化。另外，不同的血液來源（動脈血、靜脈血、末梢血等）的血液成分也有很大的差別。劉帥[3]等研究發現大鼠斷尾采血和眼內眥采血的白細胞極顯著高于腹主動脈采血的值。劉斌[4]等發現大鼠尾靜脈和眼眶靜脈的白細胞數值高于腹主動脈。這說明不同部位所采集到的血液標本所檢測到白細胞數值可能有很大的差異。本實驗中，隨著總血量的減少，采取到的血液的來源也在發生的變化，這是否是產生白細胞數值差異的原因值得進一步研究。

本研究結果顯示，大鼠在麻醉狀態下經腹主動脈連續采血時，白細胞數值差異顯著，因此動物實驗需要進行動脈連續采血做不同的分析時，如同時采集多管血液分別做血液分析，血生化檢查，凝血指標檢查等，需要按照固定的順序采血（如第一管血做血液分析，第二管血做生化分析，第三管血做血凝分析，并且對于體重相近的動物而言，血液分析的采血量也應大致相同，以避免誤差。