不同pH值的PDA培養(yǎng)基和不同培養(yǎng)基對辣椒炭疽菌生長和產(chǎn)孢的影響

張 杰,易 蘭，文 靜,劉鄭琦，徐冬梅，李煥秀，黃海濤

(1.四川省綿陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，四川 綿陽 621023；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，成都 溫江 611130)

辣椒炭疽病是辣椒生產(chǎn)中一種常發(fā)病害，主要為害果實(shí)，引起采前和采后的果實(shí)腐爛，也為害葉片，引起落葉，嚴(yán)重時可造成 30% 以上的減產(chǎn)[1]，“七五”期間曾被列為國家辣椒種質(zhì)資源抗病性鑒定的主要病害之一。在南美洲、歐洲、澳洲和亞洲均有嚴(yán)重發(fā)生的報道[2-8]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基(PDA)：300g馬鈴薯，20g葡萄糖，15g瓊脂粉，氯霉素0.1g，加水配至1L。

V8培養(yǎng)基：200gV8(100%蔬菜汁飲料，美國金寶)，2g CaCO3，16g瓊脂粉，加水配至1L。

胡蘿卜固體培養(yǎng)基(CA):200g胡蘿卜，20g瓊脂粉，加水配至1L。

利馬豆固體培養(yǎng)基(LA):60g利馬豆，20g瓊脂粉，加水配至1L。

燕麥固體培養(yǎng)基(OA):90g燕麥，20g瓊脂粉，加水配至1L。

大豆固體培養(yǎng)基(BA):90g大豆，20g瓊脂粉，加水配至1L。

黑麥固體培養(yǎng)基(RA):60g黑麥，20g瓊脂粉，加水配至1L。

表1 不同pH值的PDA培養(yǎng)基對炭疽菌菌絲生長的影響及其菌落特征

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌分離 炭病原菌，在無菌的條件下，將病原菌接種到PDA平板上，28℃、12h光照條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時間后，再次接到PDA平板上進(jìn)行多次分離純化，直至菌落生長整齊一致沒有雜菌出現(xiàn)。

1.2.2 不同pH對炭疽菌菌絲生長和產(chǎn)孢數(shù)量的影響 用接種環(huán)挑取適量病原菌的菌絲于pH為5、6、7、8、9 、10、11的PDA 平板中央，黑暗條件下置于28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，從第2天開始測量菌落直徑。測量10d后，收集游動孢子懸浮液，血球計數(shù)板計數(shù)。

1.2.3 不同培養(yǎng)基對炭疽菌菌絲生長和產(chǎn)孢數(shù)量的影響 用接種環(huán)挑取適量病原菌的菌絲分別置于PDA平板、V8平板、CA平板、LA平板、OA平板、BA平板、RA平板中央，黑暗條件下置于28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，從第2天開始測量菌落直徑。測量10d后，收集游動孢子懸浮液，血球計數(shù)板計數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同pH對炭疽菌菌絲生長和產(chǎn)孢數(shù)量的影響

從表1可知，炭疽菌在pH值范圍為5～11時均可生長，pH值低于5時，PDA培養(yǎng)基不凝固。pH值為6和7時，菌絲生長率最大，分別達(dá)到0.8075cm/d和0.8083cm/d，顯著高于其他pH值。其次是pH值為8時，菌絲生長率為0.7758cm/d。長得最慢的是pH值為5、9、10、11，生長速度顯著低于pH值為6、7、8時。因此，炭疽菌最適宜生長的PDA培養(yǎng)基pH值為6、7、8。

結(jié)果表明(圖1)，炭疽菌在pH值范圍為5～11時均可產(chǎn)孢。pH值為7時，產(chǎn)孢數(shù)量最多，明顯高于其他pH值，為13.9000×106個/mL，其次是pH值為6、8、9時，pH值為5、10、11時，產(chǎn)孢數(shù)量最少。

圖1 不同pH值的PDA培養(yǎng)基對炭疽菌產(chǎn)孢數(shù)量的影響

2.2 不同培養(yǎng)基對炭疽菌菌絲生長和產(chǎn)孢數(shù)量的影響

研究結(jié)果表明(表2)，炭疽菌在不同培養(yǎng)上均可生長，但在不同培養(yǎng)基上菌絲生長率仍存在極顯著差異。供試的7種培養(yǎng)基中，CA、RA、V8、BA培養(yǎng)基菌絲生長率最快，生長率分別為0.72025、0.71725、0.7005、0.6990cm/d。其次是PDA和LA培養(yǎng)基，它們的菌絲生長率分別為0.65275和0.6335cm/d。長得最慢的是OA培養(yǎng)基，它的菌絲生長率為0.5035cm/d。

表2 不同培養(yǎng)基對炭疽菌菌絲生長的影響及其菌落形態(tài)特征

圖2 不同培養(yǎng)基對炭疽菌產(chǎn)孢數(shù)量的影響

從圖2可知，不同培養(yǎng)基對病原菌的產(chǎn)孢和對菌絲生長影響有較大差異，即在培養(yǎng)基營養(yǎng)條件不具備的情況下，菌絲雖然能夠生長，但產(chǎn)孢能力大幅下降。RA培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最多，為49.9500×106個/mL；其次是BA培養(yǎng)基產(chǎn)孢量，為43.4250×106個/mL；OA培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最少，為3.1750×106個/mL。

3 討論

不同pH值的PDA培養(yǎng)基對炭疽菌的生長和產(chǎn)孢數(shù)量影響不大，由試驗(yàn)可知，pH值7時，菌絲生長率和產(chǎn)孢數(shù)量皆為最高，pH值越低或越高，其菌絲生長率和產(chǎn)孢數(shù)量也越低，但是菌絲生長率和產(chǎn)孢量的下降幅度不一樣。炭疽菌最適宜在中性環(huán)境生長。

不同培養(yǎng)基對炭疽菌的生長和產(chǎn)孢數(shù)量的影響是不一致的。從菌絲生長率來看，從高到低依次是RA、CA、V8、BA、PDA、LA、OA。從產(chǎn)孢量來，從高到低，依次是RA、BA、V8、PDA、LA、CA、OA。菌絲生長率和產(chǎn)孢量的變化規(guī)律并不相同。CA培養(yǎng)基的生長率高，但是其產(chǎn)孢量低。RA培養(yǎng)基的生長率和產(chǎn)孢量都是最高的，OA培養(yǎng)基的生長率和產(chǎn)孢量都是最低的。