清肺消炎丸對幼齡小鼠急性毒性實驗研究*

吳佳蓉 ，岳曉月 ，王艷秋 ，付蘇凝 ，崔元璐 ，樊官偉

（1.天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津 301617；2.天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津市中醫方證轉化研究重點實驗室，天津 300193）

清肺消炎丸源于漢代醫圣張仲景所著的《傷寒論》中的“麻杏石甘湯”加減，由麻黃、石膏、地龍、牛蒡子、葶藶子、牛黃、苦杏仁和羚羊角等組成，主治清肺化痰，止咳平喘。臨床上主要用于痰熱阻肺，咳嗽氣喘，吐痰黃稠；上呼吸道感染，急性支氣管炎，慢性支氣管炎急性發作及肺部感染見上述癥狀者。現代藥理學研究顯示，清肺消炎丸具有抗炎、止咳、平喘、免疫調節、抗病毒等多種藥理作用[1-4]。清肺消炎丸在兒科臨床上應用廣泛[5-6]，為進一步了解其兒科臨床用藥的安全性，本研究參照經典的急性毒性實驗方法[7]，根據《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》[8]，進行LD50預試和最大給藥量實驗[9-11]，觀察幼齡小鼠對清肺消炎丸的急性毒性反應，評價其用藥安全性，為清肺消炎丸在兒科臨床的安全應用奠定基礎。

1 材料

1.1 實驗動物 實驗動物為健康SPF級昆明小鼠，雌雄各半，體質量16～18 g，3周齡，購于北京維通利華動物實驗中心（動物合格證編號：SCXK（京）2016-0011），并飼養于天津中醫藥大學實驗動物中心。飼養期間，保持自由飲水和進食，環境溫度為（24±1）℃，濕度為55%±5%，每只動物僅使用1次。動物實驗遵循美國國立衛生研究院（NIH）指導原則和天津中醫藥大學的倫理委員會指導原則。

1.2 實驗藥品 清肺消炎丸（批號：T013），由天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂制藥廠提供。

1.3 實驗儀器 萬分之一精密分析天平，AL204，Mettler-Toledo儀器（上海）有限公司。渦旋振蕩器，QL-901，海門市其林貝爾儀器制造有限公司。全自動封閉脫水機，ASP300S，德國Leica儀器公司。生物組織包埋機，BMJ-1，天津航空機電公司。石蠟切片機，RM2135，德國Leica儀器公司。全自動生化分析儀，日本Hitachi公司。

2 方法

參照經典的急性毒性[5]（半數致死量LD50、最大給藥量）實驗方法，進行清肺消炎丸的幼齡小鼠急性毒性實驗研究。

2.1 藥液的配制 取清肺消炎丸適量，用研缽研磨后，稱取一定量的清肺消炎丸，用生理鹽水配制成濃稠混懸液，并稀釋成以灌胃針測試吸取較為順暢的最大藥物濃度為600mg/mL。

2.2 小鼠LD50預試 選取健康的SPF級幼齡昆明小鼠40只，隨機分為5組，每組8只，雌雄各半，分籠飼養。經預試清肺消炎丸以灌胃針吸取較為順暢的最大藥物濃度為600mg/mL，給藥劑量按等比級數1∶0.75設計，組別分別為空白對照組、10.125 g/kg、13.5 g/kg、18 g/kg和24 g/kg清肺消炎丸給藥組，適應性喂養2 d后進行實驗。灌胃前1 d及灌胃當天稱質量，灌胃前12 h禁食，自由飲水，各給藥組小鼠以能夠接受的最大體積給藥（0.8mL/20 g），分別灌胃給予 10.125 g/kg、13.5 g/kg、18 g/kg 和 24 g/kg 清肺消炎丸，空白對照組灌胃給予相同體積的生理鹽水，灌胃給藥2次，間隔8 h。最后1次給藥后2 h恢復進食并常規喂養7 d，于第7天處死小鼠，觀察腦、心、肝、脾、肺、腎等重要臟器有無異常。

2.3 小鼠最大給藥量實驗 選擇LD50預試中的最大給藥濃度及最大給藥體積進行幼齡小鼠最大給藥量實驗。選取健康的SPF級幼齡昆明小鼠64只，隨機分為2個亞組，分別為清肺消炎丸給藥后7 d（24只）和14天（40只）觀察組。7 d亞組分為兩組，每組12只，雌雄各半，分籠飼養：1）空白對照組；2）清肺消炎丸給藥組。14 d亞組分為兩組，每組20 只，雌雄各半，分籠飼養：1）空白對照組；2）清肺消炎丸給藥組。各組小鼠適應性喂養2 d后進行實驗，灌胃前1 d及灌胃當天稱質量，灌胃前12 h禁食，自由飲水，以最大給藥濃度（600mg/mL），能夠接受的最大給藥體積（0.8mL/20 g）給藥，各清肺消炎丸給藥組給予清肺消炎丸（24 g/kg），空白對照組給予相同體積的生理鹽水，灌胃給藥3次，間隔6 h。最后1次給藥后2 h恢復進食并進行連續觀察。

2.4 小鼠急性毒性實驗觀察方法 各組小鼠每次灌胃給藥后，即刻觀察動物的毒性反應情況。每次給藥0.5、1、2、4 h后觀察各組小鼠的行為活動有無異常，逐日觀察并記錄各小鼠的外觀、行為活動、飲水納食、精神狀態、二便毛色、呼吸及鼻眼口腔等有無異常分泌物。并于灌胃前1 d、灌胃當天、灌胃后第1、3、5、7、9、11、13 天稱取小鼠體質量，記錄飼料消耗量和飲水量，灌胃后第7天或14天處死小鼠。處死并解剖小鼠后，肉眼觀察腦、心、肝、脾、肺、腎等重要臟器有無異常（實驗過程中因瀕死而處死的小鼠應及時進行大體解剖并肉眼觀察各個重要臟器有無異常。各項觀察指標判定詳見中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則[8]）。

各亞組小鼠分別在給藥7 d或14 d后，用異氟烷麻醉，眼球取血，室溫凝血離心，分離血清，并保存于-20℃冰箱，備用。取小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎等組織樣本，用生理鹽水沖洗并用濾紙擦干稱質量，計算臟器系數[臟器系數=臟器質量（mg）/小鼠體質量（g）]。

2.5 病理學分析 為進行組織病理學分析，取小鼠肝、脾、肺、腎組織用10%多聚甲醛固定，進行脫水、浸蠟、包埋、切片和HE染色。

2.6 小鼠肝腎功能的檢測 將保存在-20℃冰箱的血清取出，用全自動生化分析儀檢測幼齡小鼠血清中天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（SCr）的濃度。

3 實驗結果

3.1 LD50預試結果

3.1.1 清肺消炎丸對小鼠健康狀態的影響 每次灌胃給藥后，與空白對照組小鼠比較，清肺消炎丸給藥組小鼠活動行為均無異常。灌胃2 h后各組小鼠恢復進食，均開始正常飲食，并無顯著差異。實驗觀察期間，受試小鼠均未出現死亡，也未表現出明顯的中毒癥狀，并且觀察期間小鼠毛發光澤、活動自如、進食及大小便正常，精神狀態良好。

3.1.2 清肺消炎丸對幼齡小鼠體質量的影響 對所有組小鼠的體質量進行統計，結果如表1所示，灌胃前各組小鼠的體質量差異無顯著性，不同劑量的清肺消炎丸給藥7 d后，各給藥組小鼠的體質量增長與空白對照組基本一致，均呈現上升的趨勢。結果表明，與空白對照組比較，清肺消炎丸的各給藥組在給藥后7 d內，差異均無顯著性。說明不同劑量的清肺消炎丸對幼齡小鼠的生長發育沒有影響。

3.1.3 清肺消炎丸對幼齡小鼠飲食飲水的影響 對各組小鼠的飼料消耗量進行統計，結果如表2所示，與空白對照組進行比較，不同劑量的清肺消炎丸給藥7 d后幼齡小鼠各時間段的飼料消耗量差異均無顯著性。對小鼠的飲水量進行統計，結果如表3所示，與空白對照組比較，除了10.125 g/kg清肺消炎丸組雄性小鼠給藥1 d后飲水量差異有顯著性（P＜0.05），其他各組的各時間段的飲水量差異均無顯著性；各清肺消炎丸雌性小鼠給藥7 d后，與空白對照組比較差異均無顯著性，說明不同濃度的清肺消炎丸不會影響幼齡小鼠的飲食飲水。

表1 對幼齡小鼠體質量的影響Tab.1 Effecton bodyweightof youngm iceg

表1 對幼齡小鼠體質量的影響Tab.1 Effecton bodyweightof youngm iceg

組別 給藥前1 d 給藥當天 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d空白組 26.44±0.98 25.84±0.11 29.86±0.31 33.03±0.19 34.86±0.59 36.10±0.85 24.74±0.25 24.23±0.56 26.39±0.44 27.88±0.90 28.24±0.91 29.17±0.82清肺消炎丸組（10.125 g/kg） 26.79±0.74 26.32±0.26 29.64±0.70 33.26±0.54 35.70±0.50 37.23±0.28 24.28±0.51 23.94±0.46 25.11±0.38 27.06±0.69 27.80±0.51 28.17±0.68清肺消炎丸組（13.5 g/kg） 26.07±1.33 25.55±1.67 30.43±1.57 33.70±2.25 34.11±2.61 35.84±2.08 24.76±1.05 23.55±0.57 26.37±0.77 27.73±1.67 28.54±1.47 29.25±1.64清肺消炎丸組（18 g/kg） 26.67±0.84 26.10±0.99 29.69±1.05 32.86±1.36 34.78±1.52 36.01±1.17 24.78±0.30 23.70±0.58 26.90±0.49 30.45±0.59 30.25±1.41 31.11±1.44清肺消炎丸組（24 g/kg） 26.67±1.10 26.19±0.87 29.62±0.21 32.90±1.24 34.66±1.76 36.11±1.92 25.11±0.37 24.00±0.55 25.96±0.52 27.73±1.26 27.60±0.74 28.93±1.46性別雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性動物數8 8 8 8 8

表2 對幼齡小鼠飼料消耗量的影響Tab.2 Effecton feed consum ption of youngm iceg/d

表2 對幼齡小鼠飼料消耗量的影響Tab.2 Effecton feed consum ption of youngm iceg/d

性別 給藥前1 d 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d雄性 5.97±1.03 7.26±0.60 7.46±1.00 7.16±0.66 6.37±0.28雌性 5.10±0.17 6.84±0.24 5.90±0.47 7.27±0.62 5.27±0.84雄性 5.76±0.21 7.54±0.17 7.98±0.44 8.23±0.22 6.90±0.28雌性 4.73±0.36 5.80±0.34 4.87±018 5.40±0.40 5.15±0.45雄性 5.91±0.31 7.52±0.34 7.88±0.79 7.71±0.37 6.62±0.41雌性 5.61±0.40 6.70±0.38 6.08±0.90 6.23±0.50 5.49±0.43雄性 6.26±0.28 7.56±0.78 7.39±0.24 7.32±0.51 6.51±0.34雌性 5.46±0.53 6.34±0.44 6.05±0.70 6.68±0.42 5.57±0.79雄性 6.42±0.39 7.17±0.58 6.96±0.21 7.65±0.34 7.21±0.32雌性 5.60±0.18 7.01±0.38 5.95±0.49 6.29±0.18 5.65±0.27組別空白組清肺消炎丸組（10.125 g/kg）清肺消炎丸組（13.5 g/kg）清肺消炎丸組（18 g/kg）清肺消炎丸組（24 g/kg）動物數8 8 8 8 8

表3 對幼齡小鼠飲水量的影響Tab.3 Effectonwater intakeof youngm icemL/d

表3 對幼齡小鼠飲水量的影響Tab.3 Effectonwater intakeof youngm icemL/d

注：給藥后1 d與空白組比較，*P＜0.05。

性別 給藥前1 d 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d雄性 9.37±0.68 9.34±0.30 9.41±0.66 8.72±0.76 8.58±0.79雌性 8.71±0.73 8.84±0.36 9.02±0.67 8.33±0.72 8.34±0.72雄性 9.30±0.33 8.16±0.17* 8.99±0.35 9.33±0.51 8.12±0.37雌性 9.34±0.85 8.77±0.85 8.11±0.75 7.01±0.57 7.58±0.60雄性 9.10±0.70 8.63±0.89 8.82±0.70 8.58±0.18 8.49±0.18雌性 9.17±1.23 8.48±0.03 8.52±0.28 7.59±0.27 8.40±1.24雄性 8.81±0.81 9.13±0.70 9.17±0.38 7.69±0.28 7.69±0.29雌性 9.43±0.60 7.80±0.48 8.55±1.06 7.18±0.37 8.04±0.45雄性 9.14±0.10 8.40±0.77 8.35±0.33 7.37±0.13 8.06±0.11雌性 9.25±0.62 8.15±0.43 7.25±0.64 8.05±0.25 8.12±0.23組別空白組清肺消炎丸組（10.125 g/kg）清肺消炎丸組（13.5 g/kg）清肺消炎丸組（18 g/kg）清肺消炎丸組（24 g/kg）動物數8 8 8 8 8

3.2 最大給藥量實驗結果

3.2.1 清肺消炎丸對幼齡小鼠健康狀態的影響每次灌胃給藥后，與空白對照組小鼠比較，清肺消炎丸給藥組小鼠活動行為均無異常。灌胃2 h后各組小鼠恢復進食，均開始正常飲食，并無顯著差異。實驗觀察14 d期間，受試小鼠均未出現死亡，也未表現出明顯的中毒癥狀，并且觀察期間小鼠毛發光澤、活動自如、進食及大小便正常，精神狀態良好。

3.2.2 清肺消炎丸對幼齡小鼠體質量的影響 由于實驗小鼠為幼齡小鼠，正處于生長發育階段，因此小鼠的體質量是評價清肺消炎丸毒性的一個指標。對各組小鼠的體質量進行統計，實驗結果如表4所示，清肺消炎丸給藥后14 d內，給藥組小鼠的體質量增長與空白對照組基本一致，均呈現上升的趨勢。結果表明，與空白對照組比較，清肺消炎丸組雄性小鼠除了灌胃后第1天和第3天差異有顯著性（P＜0.05），其他時段差異均無顯著性；清肺消炎丸組雌性小鼠在給藥后14 d內，與空白對照組比較差異均無顯著性，說明在小鼠的急性毒性最大給藥量實驗中，清肺消炎丸不會影響幼齡小鼠的生長發育。

3.2.3 清肺消炎丸對幼齡小鼠臟器系數的影響（7、14 d） 正常小鼠各臟器與體質量的比值比較恒定，小鼠中毒后，受損臟器質量會發生改變，臟器系數也會隨之發生變化，臟器系數增大，表示臟器可能發生了充血、水腫或增生肥大等；臟器系數減小，表示臟器可能發生了萎縮及其他退行性改變，因此臟器系數是毒理實驗中常用的指標[12-14]。表5、表6為清肺消炎丸給藥7 d和14 d后對幼齡小鼠臟器系數的影響。結果表明，清肺消炎丸給藥7 d或14 d后，與空白對照組比較，各給藥組小鼠的臟器系數（肝、腎、腦、心、肺、脾）差異均無顯著性。

3.2.4 清肺消炎丸對幼齡小鼠肝功能的影響（7、14 d） AST、ALT、ALP和A/G是臨床上常用的評價肝功能的指標[15]，ALT和AST主要分布在肝細胞內，如果肝臟受損，肝細胞中的轉氨酶便進入血液，使血液中的ALT和AST水平升高，因此AST和ALT是評判肝損傷的重要指標[16-17]。因此本實驗通過定期檢測小鼠血清中AST、ALT、ALP、TP和ALB等指標評價清肺消炎丸對幼齡小鼠肝功能的影響。如圖1所示，清肺消炎丸給藥7 d或14 d后，雄性小鼠血清中的AST、ALT、ALP濃度以及A/G沒有發生顯著變化，說明在小鼠急性毒性最大給藥量實驗中清肺消炎丸對雄性小鼠的肝功能無顯著影響。如圖2所示，清肺消炎丸給藥7 d和14 d后，雌性小鼠血清中的AST、ALT濃度以及A/G沒有發生顯著變化，說明極高劑量的清肺消炎丸沒有造成急性肝損傷；清肺消炎丸給藥7 d后，與空白對照組比較，雌性小鼠的ALP濃度顯著升高，但是給藥14 d后，ALP濃度又恢復正常，與空白對照組比較差異無顯著性，說明給藥后小鼠可能出現一過性肝功能異常，之后藥物經過肝臟代謝，肝功能恢復正常。

表4 對幼齡小鼠體質量的影響Tab.4 Influenceon bodyweightof youngm iceg

表4 對幼齡小鼠體質量的影響Tab.4 Influenceon bodyweightof youngm iceg

注：與空白組比較，*P＜0.05。

給藥前1 d 給藥當天 給藥后1 d 給藥后3 d 給藥后5 d 給藥后7 d 給藥后9 d給藥后11 d給藥后13 d給藥后14 d 22.74±0.34 20.55±028 24.00±0.25 28.60±0.41 31.72±0.37 33.40±0.34 34.67±0.35 37.28±0.37 38.52±0.53 39.13±0.60 22.67±0.41 20.51±0.29 23.07±0.39 25.90±0.73 28.06±0.82 29.12±0.63 30.60±0.57 30.91±0.67 31.97±0.62 32.63±0.62 22.28±0.25 19.92±0.22 22.86±0.27*27.41±0.40*30.13±0.55 33.15±0.61 35.87±0.64 37.42±0.53 38.20±0.56 38.77±0.82 23.00±0.39 20.29±0.32 22.96±0.45 25.77±0.42 26.82±0.44 27.90±0.52 29.21±0.49 29.89±0.63 30.73±0.77 30.78±0.79性別雄性雌性雄性雌性組別空白組清肺消炎丸動物數8 8 8 8

表5 給藥7 d后對小鼠臟器系數的影響Tab.5 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

表5 給藥7 d后對小鼠臟器系數的影響Tab.5 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

肝臟指數 腎臟指數 腦指數 心臟指數 肺指數 脾臟指數57.64±1.33 14.76±0.29 12.51±0.32 6.69±0.38 6.40±0.27 5.17±0.47 50.66±2.65 11.78±0.60 14.84±0.26 5.89±0.37 6.98±0.44 3.66±0.39 49.13±1.38 11.98±0.39 15.65±0.34 6.23±0.34 7.13±0.50 3.45±0.22 58.51±2.86 15.14±0.47 12.62±0.33 5.65±0.25 6.17±0.26 4.29±0.29性別雄性雌性雄性雌性組別空白組清肺消炎丸組動物數6 6 6 6

表6 給藥14 d后對小鼠臟器系數的影響Tab.6 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

表6 給藥14 d后對小鼠臟器系數的影響Tab.6 Effectof 7 daysafter adm inistration on organ coefficient inm icemg/g

肝臟指數 腎臟指數 腦指數 心臟指數 肺指數 脾臟指數56.04±1.10 15.95±0.26 11.21±0.15 5.56±0.16 5.79±0.21 2.72±0.15 49.08±1.19 12.16±0.38 14.42±0.30 5.97±0.16 7.03±0.14 3.73±0.20 49.77±1.15 11.68±0.33 13.67±0.25 5.54±0.16 6.53±0.23 3.24±0.16 55.15±1.00 16.19±0.35 11.32±0.19 6.05±0.17 6.27±0.12 2.92±0.11性別雄性雌性雄性雌性組別空白組清肺消炎丸組動物數10 10 10 10

圖 1 對雄性小鼠血清 AST（A）、ALT（B）、ALP（C）和 A/G（D）含量的影響Fig.1 Effectof serum AST（A），ALT（B），ALP（C）and A/G（D）inmalem ice

圖 2 對雌性小鼠血清 AST（A）、ALT（B）、ALP（C）和 A/G（D）含量的影響Fig.2 Effectof serum AST（A），ALT（B），ALP（C）and A/G（D）in femalem ice

3.3.5 清肺消炎丸對幼齡小鼠腎功能的影響（7、14 d） BUN和SCr是臨床上常用的評價腎功能的指標[18-19]。因此本實驗通過定期檢測小鼠血清中BUN和SCr等指標評價清肺消炎丸對小鼠腎功能的影響。如圖3、圖4所示，清肺消炎丸給藥7 d或14 d后，與空白對照組比較，幼齡小鼠血清中的BUN和SCr濃度均沒有發生顯著變化，說明在小鼠急性毒性最大給藥量實驗中清肺消炎丸對幼齡小鼠的腎功能無顯著影響。

圖3 對雄性小鼠血清BUN（A）和SCr（B）含量的影響Fig.3 Effectof serum BUN（A）和 SCr（B）inmalem ice

圖4 對雌性小鼠血清BUN（A）和SCr（B）含量的影響Fig.4 Effectof serum BUN（A）和 SCr（B）in femalem ice

3.2.6 清肺消炎丸對幼齡小鼠各臟器組織顯微結構的影響（7、14 d） 清肺消炎丸給藥7 d和14 d后，分別處死各組小鼠并解剖，肉眼觀察小鼠的各主要臟器有無異常。結果表明，與空白對照組比較，7 d和14 d各給藥組小鼠的肝、腎、腦、心、肺、脾等重要臟器均無異常。

幼齡小鼠肝、腎、肺和脾組織的HE染色顯微照片如圖5所示。空白對照組和清肺消炎丸組無顯著差異，各組肝組織細胞均排列緊密，細胞形態良好，肝小葉結構完整；腎組織結構清晰，腎小球正常；肺組織肺泡結構清晰，間隔正常，管壁結構良好；脾組織淋巴細胞排列緊密，無淤血和點狀壞死；各組各個臟器無明顯炎性細胞浸出、纖維化和壞死等病理變化。說明在小鼠急性毒性最大給藥量實驗中清肺消炎丸對幼齡小鼠的各臟器無顯著影響。

4 討論

圖5 幼齡小鼠肝、腎、肺和脾組織切片HE染色照片（×100，左下角為×400）Fig.5 HE staining of liver，kidney，lung and spleen in youngm ice（×100，lower left corner ×400）

清肺消炎丸是在中醫藥理論指導下，按照“君臣佐使”的組方原則，選擇適宜的藥味與劑量配伍而成的一種中成藥，是目前兒科臨床的常用藥。從中醫角度來講，清肺消炎丸主治清肺化痰，止咳平喘，主方為漢代醫圣張仲景《傷寒論》“麻杏石甘湯”加減，方中麻黃宣肺平喘，為君藥；杏仁、牛蒡子、葶藶子降氣平喘，一升一降，調暢氣機；石膏清瀉肺火，地龍化痰平喘，共為臣藥；人工牛黃，羚羊角清熱解毒[20]。小兒純陽體質，肺脾不足，肝常有余，故容易外感六淫邪氣；加之喂養不當，容易形成食積；外感邪氣，郁閉肺氣，日久化熱，肺氣失宣，故而出現發熱、咳嗽、咳黃白黏痰、喘息、鼻翼煽動，即所謂小兒喘嗽，熱盛至極，肝風內動，則會抽搐。清肺消炎丸解小兒肺氣郁閉，加地龍化痰平喘，葶藶子和牛蒡子降肺止咳，牛黃、羚羊角為寒涼之物，歸肝經，最善解肝熱動風，所以清肺消炎丸可用于治療小兒高熱引起的肺炎喘嗽且伴有高熱抽搐等熱盛動風之癥。

現代藥理學研究已經顯示，清肺消炎丸具有多種抗炎成分，包括牛蒡子苷、牛蒡子苷元、綠原酸、麻黃堿、膽酸、介子酸等[21-23]。如牛蒡子苷在人體內分解為牛蒡子苷元發揮抗炎作用，而牛蒡子苷元可能是通過調節免疫應答起到抗炎作用；綠原酸是通過抑制COX-2、NF-κBp65發揮抗炎作用[24]。研究表明清肺消炎丸可以有效減少枸櫞酸誘發的豚鼠咳嗽次數，顯著延長咳嗽潛伏期；有效緩解乙酰膽堿引起的豚鼠離體氣管平滑肌收縮；有效延長組胺致喘的豚鼠哮喘潛伏期[25]。此外，清肺消炎丸可以有效緩解肺心病患者的咳嗽、喘息等癥狀，改善患者肺功能，降低并發癥發生率且安全性較高，還能提高肺心病患者急性感染后CD4+、CD4+/CD8+比值，具有一定免疫調節作用[26-27]。因此，清肺消炎丸具有鎮咳，祛痰，平端，抗炎等多種藥理作用，值得臨床廣泛應用。

為了更好地評價清肺消炎丸的用藥安全性，本文研究了其對幼齡小鼠的LD50預試和最大給藥量實驗。LD50預試中，受試小鼠均未出現死亡，也未表現出明顯的中毒癥狀，其毒性較小，無法測出LD50。而LD50預試中幼齡小鼠1 d的最高給藥劑量為48 g/kg，相當于6～12歲兒童（體質量按35 kg計算，用量為40丸/次，3次/日，5 g/60丸）臨床用藥量的168倍，其毒性反應對其他安全性實驗及臨床的提示意義已不大，故直接進行最大給藥量實驗。在最大給藥量實驗中，幼齡小鼠1 d的給藥劑量為72 g/kg，相當于6歲至12歲兒童臨床用藥量的252倍，但是清肺消炎丸不會影響幼齡小鼠的生長發育、肝腎功能以及各臟器的組織形態學。本研究表明清肺消炎丸的毒性極低，在兒科應用具有較高的臨床安全性。