微柱凝膠免疫反應(yīng)技術(shù)在檢測IgG抗A(B)效價中的應(yīng)用

孫長杰,王曉寧,劉 冰,趙 霞，李凌波

(吉林大學第一醫(yī)院，吉林 長春130021)

ABO新生兒溶血病(HDN)由IgG抗A(B)引起，且母親為O型的最常見，檢測母親血清中有無IgG性質(zhì)的抗體并測定其效價，可預測ABO HDN發(fā)生的可能性。傳統(tǒng)檢測方法常用間接抗球蛋白試驗(即間接Coombs試驗)，是一種可靠的檢測IgG抗體的方法，但操作很繁瑣且費時。微柱凝膠免疫反應(yīng)技術(shù)是綜合了分子篩技術(shù)、離心技術(shù)和免疫反應(yīng)技術(shù)的一種新的檢汕方法，且簡便、時間短，結(jié)果明顯，可較長時間保存。為了更好地研究和應(yīng)用這一新技術(shù)，我們作檢測結(jié)果準確性的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

我院產(chǎn)科及生殖中心門診懷孕的“O”型孕婦血清標本60份，(其中測IgG抗A 29例，IgG抗B 23例，抗AB 8例)。

(1)DianaGel Coombs 卡：由北京斑珀斯技術(shù)有限責任公司提供。(2)Diana稀釋液2：含有穩(wěn)定劑的低離子強度緩沖液，由北京斑珀斯技貿(mào)有限責任公司提供。(3)抗人球蛋白試劑(間接抗球蛋白法用)、2-Me(二巰基乙醇)由上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司生產(chǎn)。(4)1%“A”型或“B”型紅細胞懸液，長春博德生物技術(shù)有限責任公司生產(chǎn)的4%標準細胞用9%Nacl注射液稀釋成1%的紅細胞。(5)儀器：專用的Diana血型檢測儀和Diana孵育器北京斑珀斯有限責任公司提供。

1.2 方法

(1)標本處理：破壞血清中IgG球蛋白，受檢血清100 ml加2-Me應(yīng)用液100 ml混勻，將試管口塞緊置37℃水浴1 h后取出。另取6支試管，用pH7.4PBS作倍比稀釋，即每份標本血清分別稀釋成1∶8，1∶16…1∶2048。(2)微柱凝膠技術(shù)方法：取DianaGel Coombs卡一張，加50 μl 1%“A”型或“B”型紅細胞懸液于卡上各微孔管中，再加各個倍比稀釋濃度的血清50 μl，置Diana孵育器15分鐘，后置DianaFuge離心機離心。判讀：“-”100%的紅血球沉在微管的底部“+”80%人紅血球沉在微管上端1/3之內(nèi)。紅細胞凝聚“+”的最高稀釋度的例數(shù)即為IgG抗A(B)效價。(3)間接抗球蛋白法：按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[1]操作。

1.3 統(tǒng)計學處理

所得數(shù)據(jù)采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

60份“O”型孕婦血清標本同時用上述兩種方法檢測，測得的IgG抗A效價(n=60)、IgG抗B效價(n=60)分布分別見表1和表2。將效價分為正常(4-64)、升高(128-512)和極高(1024-2048)3個效價范圍，經(jīng)χ2檢驗分析，兩種方法檢測結(jié)果無顯著性差異，結(jié)果見表3、表4。

表1 兩種方法IgG抗A效價分布(n=60)

表2 兩種方法IgG抗B效價分布(n=60)

表3 兩種方法IgG抗A效價χ2檢驗分析

表4 兩種方法IgG抗B效價χ2檢驗分析

3 討論

微柱凝膠技術(shù)把免疫反應(yīng)技術(shù)同凝膠技術(shù)很好地結(jié)合起來，用微粒過濾器來分離游離紅細胞和凝聚紅細胞。用已知抗原的紅細胞與多價抗人球試劑反應(yīng)來檢測血清中的不完全抗體。即IgG致敏紅細胞和微柱內(nèi)的抗人球蛋白結(jié)合而使之被凝膠微粒間隙所阻隔，離心后紅細胞不能到達微柱底部，而未被IgG所致敏的紅細胞不與抗人球蛋白結(jié)合而從凝膠微粒間過，最后被離心到柱底。過量抗體如正常的血清免疫球蛋白，因滲透入凝膠的速度太慢而不發(fā)揮作用，因此，紅細胞無需洗滌[2]。

臨床上發(fā)生新生兒溶血病(HDN)的病因很多。在我國。ABO血型系統(tǒng)引起的HDN最為常見，但引起中等程度和嚴重的HDN最常見的原因是Rh血型系統(tǒng)的D、E抗原，其次是A和B抗原，特別是在ABO系統(tǒng)抗原所致HDN中母親為O型最常見。近年來，母子血型不合引起的HDN已受到臨床醫(yī)師們的重視。

IgG抗A(B)由于分子量小，可由母體經(jīng)胎盤進入胎兒。因此，ABO HDN的發(fā)病程度與母體內(nèi)IgG抗A(B)的效價有一定的相關(guān)性。尤其O型人的IgG抗A(B)效價較A型人的IgG抗B或B型人的IgG抗A效價高[3]。據(jù)趙桐茂、張工梁的報導，初步認為當母體IgG抗A(B)效價大于64時，有可能使其ABO不配合的嬰兒受害，且以IgG抗A(B)效價以128為引起HDN的最低界限[4]。由于正常的“O”型人的血清IgG抗A(B)也有一定的效價，在16-256之間[5]。連續(xù)測定對評價臨床效果有重要意義[6]。因此筆者認為對“O”型孕婦只作一次IgG抗A(B)效價測定無臨床意義，需作最少兩次檢測，才有參考價值。如果母體內(nèi)IgG抗A(B)效價隨著孕期增加而增長，則提示胎兒受害的可能性增大。