經陰道彩超聯合血清miRNA系列檢測對宮頸癌的診斷價值ROC曲線分析

匡 涌,王 燕,賈嚴珍

(青島市立醫院西院區,山東 青島266002)

宮頸癌(CC)是婦科臨床上一種常見的惡性腫瘤，嚴重的危害著女性的健康與生命安全，我的發病率目前呈現出逐漸上升趨勢[1,2]。CC的盡早診斷是治療與取得理想預后的關鍵基礎。人類乳頭瘤病毒(HPV)檢測為CC的主要篩查方式，但其診斷效果欠佳[3]。病理學檢驗為本病診斷的金標準，但其屬于有創性檢查，無法作為早期篩查方式應用于臨床[4]。在目前的無創檢查手段中，經陰道彩色多普勒超聲(TVCDS)能夠詳細觀察腫塊的位置、形態、大小等相關信息，并可觀察血流狀態，但其診斷受到人為主觀因素等的影響，而致其準確率有待進一步提高。血清指標檢測為諸多惡性腫瘤診斷的常用參考指標，但不同的惡性腫瘤血清標志物亦不盡相同，而患者間血清腫瘤標志物表達水平亦具有一定差異性。miRNA為存在于真核生物中一組具有調控功能的內源性非編碼RNA。有研究認為，miRNA系列中的18a、92a在CC等諸多種惡性腫瘤患者的血清中可見高表達[5,6]。鑒于血清miRNA系列檢測對于惡性腫瘤的診斷具有較高的靈敏度，而TVCDS的特異性尚良好，我們將兩者聯合應用于CC的臨床診斷中，以期尋找到更為理想的無創檢查手段，提升CC早期篩查的檢出率。為研究TVCDS聯合血清miRNA對CC的診斷價值，本院特開展本次回顧性研究，現將詳細情況作詳盡闡述。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取本院2017年1月-2018年1月間收治的98例宮頸癌患者作為CC組，選取同期本院收治的98例宮頸良性病變患者作為良性組。納入標準：①在本院接受治療且經病理學化驗確診的CC患者；②術前在本院均接受了TVCDS及血清miRNA-18a、miRNA-92a檢查的患者；③本院相關資料完整的患者。排除標準：①合并其他惡性腫瘤的患者；②心腦血管事件急性期、創傷或重大手術后恢復期患者；③合并嚴重感染性疾病的患者；④妊娠期患者；⑤病理特征不明確、本院相關資料不完整的患者。

1.2 研究方法

1.2.1資料統計 收集全部患者的一般資料包括：年齡、體重指數(BMI)、吸煙史、酗酒史、絕經狀態、高危型人類乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染史、其他性傳播疾病史。吸煙史指有每日吸煙1支及以上，連續或累計6個月及以上。酗酒史指每日150 g及以上，連續或累計6年及以上。

1.2.2TVCDS檢查 排空膀胱，患者取截石位，使用彩色多普勒超聲診斷儀檢查，使用經陰道腔內探頭，頻率設置為5-9 MHz，涂抹耦合劑后套2層隔離套，輕緩插入陰道，逐漸推進至陰道穹窿、宮頸部；行縱向、橫向、斜向全方位掃查。仔細觀察宮頸內、外口情況，宮頸整齊程度、宮頸管回聲，詳細觀察宮體、宮旁組織與卵巢情況。隨后以彩色多普勒血流顯像(CDFI)觀察宮頸血流的分布情況，測量縮峰值速度(PSV)、舒張末期最低速度和血流阻力指數(TMDV)，按：(PSV- TMDV)/PSV公式計算血流阻力指數(RI)；均測量3個穩定周期取均值。

1.2.3miRNA檢測 采集患者空腹外周靜脈血樣5 ml，使用離心機于4℃下按3 000 r/min速度離心10 min，離心半徑為10 cm，靜置后再次按12 000 r/min速度離心15 min，取得血清，于-80℃下儲存。取100-200 μl 血清，使用德國 QIAGEN公司出品的miRNeasy Mini Kit試劑盒提取RNA；RNA反轉錄使用美國 Gene Copoeia 公司生產的All-in-One miRNA q RT-PCR Detection Kit試劑盒，按q PCR 法測定血清中miRNA-18a、miRNA-92a水平，內參對照為U6。

1.2.4數據分析方法 對比兩組患者一般資料、相關病史、TVCDS參數PSV、RI與血清miRNA-18a、miRNA-92a檢測結果的差異性，以ROC曲線參數：曲線下面積(AUC)評估TVCDS參數、血清miRNA系列及二者聯合對于宮頸癌的診斷價值，并計算其最佳診斷值。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 一般資料

CC組患者HR-HPV感染率高于良性組，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組患者年齡、BMI、吸煙史、酗酒史與其他性傳播疾病史差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料對比

2.2 TVCDS參數

CC組患者PSV高于良性組，RI低于良性組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患者TVCDS參數對比

2.3 血清miRNA系列表達

CC組miRNA-18a、miRNA-92a均高于良性組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者血清miRNA系列表達對比值)

2.4 ROC曲線分析

四項參數聯合診斷宮頸癌具有最高診斷價值(AUC=0.981)，其與TVCDS參數RI、血清miRNA-18a及對宮頸癌均具有較高診斷價值(AUC>0.9，P<0.05)，TVCDS參數PSV、血清miRNA-92a對宮頸癌具有中等診斷價值(AUC>0.7，P<0.05)；TVCDS參數PSV診斷宮頸癌的最佳診斷值為7.455cm/s、此時敏感度為80.612%、特異度為81.633%，TVCDS參數RI診斷宮頸癌的最佳診斷值為0.605、此時敏感度為82.653%、特異度為90.898%；血清miRNA-18a診斷宮頸癌的最佳診斷值為2.040、此時敏感度為89.796%、特異度為92.857%，血清miRNA-92a診斷宮頸癌的最佳診斷值為2.040、此時敏感度為60.204%、特異度為90.816%，上述四項指標聯合診斷宮頸癌的敏感度為97.959%，特異度為80.427%,見表4。

表4 各項參數診斷宮頸癌ROC曲線統計值明細

圖1 各項參數及聯合診斷ROC曲線

3 討論

我國CC的發病率與病死率均位居女性惡性腫瘤的第二位，成為嚴重威脅女性健康與生命安全的生殖系統惡性病變[7-9]。CC早期多無顯著、典型表現，其早期癥狀表現不典型，部分患者檢出時病情已進展至中晚期，而失去最佳治療時機。因此，尋找理想的無創篩查手段是CC臨床診斷、治療的重要基礎。TVCDS屬于醫學影像學無創檢查手段，能夠對宮頸、管腔內血流、血管等情況進行詳細觀察，并可通過后處理軟件減少人為主觀因素的干擾，提高其診斷客觀[10-12]。TVCDS具有操作便捷、無需充盈膀胱、重復性好等優勢，適用于CC的臨床篩查、診斷及療效評估等諸多領域[13]。miRNA系列中miRNA-18a通過下調靶基因中表達，發揮促進腫瘤細胞生長的作用。miRNA-92a則具有促進腫瘤血管異常增殖的作用。miRNA系列在人體外周血液中的表達較穩定，有望成為腫瘤血清學的新型標志物。有諸多研究表明，其與諸多惡性腫瘤、疾病的形成、演進及不良預后具有相關性[14,15]。

本次研究結果表明，CC組患者中HR-HPV感染率高于良性組，這與既往臨床認知一致，也是目前HR-HPV作為CC臨床篩查手段的理論基礎。兩組患者其他一般資料無統計學差異，但這一結論有待于進一步大數據驗證。

本次研究顯示，CC的瘤體內部可見高速低阻血流狀態，且血管豐富、走向復雜紛亂，彩色血流可見“火球”形、網狀等表現。而良性組患者宮頸內部僅見極少或未見血流信號。雖然TVCDS能夠獲取腫瘤內部的典型血流信號表現，但仍需經驗豐富的專科醫師進行評估，從一定程度上限制了其臨床應用。采用血流動力學數據進行判斷則可有效提高檢查的客觀性。本次研究結果表明，CC組患者PSV高于良性組，而血流RI則低于良性組；CC組患者血清miRNA-18a、miRNA-92a表達均高于良性組；這種明確的差異性為PSV、RI與血清miRNA檢測成為宮頸癌診斷數據參考提供了理論支持。這一結論與李旭霞等研究結論相符[16]。經ROC曲線分析TVCDS參數RI、血清miRNA-18a及對宮頸癌均具有較高診斷價值，TVCDS參數PSV、血清miRNA-92a對宮頸癌具有中等診斷價值，四項參數聯合診斷具有最高的診斷價值；提示，四項參數聯合應用時優勢互補，可有效診斷的準確性、敏感度與特異度。TVCDS參數PSV診斷宮頸癌的最佳診斷值為7.455 cm/s、RI診斷宮頸癌的最佳診斷值為0.605，血清miRNA-18a與miRNA-92a診斷宮頸癌的最佳診斷值均為2.040；提示，患者TVCDS參數PSV高于7.455 cm/s、RI低于0.605，且血清miRNA-18a與miRNA-92a均高于2.040時，可作出宮頸癌診斷，如患者有HR-HPV感染史則可進一步提高宮頸癌的可能性，應盡快通過針吸活檢等病理學化驗明確診斷，盡早給予治療。

綜上所述，經陰道彩超聯合血清miRNA檢測對于宮頸癌診斷具有較高診斷價值，且具有無創、操作便捷、重復性好等優勢，更加適用于宮頸癌的臨床篩查、療效評估及臨床療效等領域。