叉頭狀螺旋轉錄因子3在結直腸癌組織中的表達及與臨床病理的關系

孫艷麗,陳 武,陳 飛

(吉林省腫瘤醫院 1.內二科；2.核醫學科,吉林 長春130012)

結直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤，手術、放療、化療、分子靶向治療，使結直腸癌患者的預后有所改善，但仍有轉移和復發的危險。近年來靶向腫瘤微環境成為腫瘤治療的新途徑。叉頭狀螺旋轉錄因子(Foxp3)是叉頭狀螺旋轉錄因子家族的重要成員，對調節性T細胞(Tregs)免疫抑制功能起到至關重要的作用。本課題通過免疫組化方法研究結直腸癌患者組織Foxp3的表達情況，探討其表達水平與結直腸癌患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集我院2014年1月至2014年11月行手術切除的結直腸癌組織標本45例，癌旁組織45例(距離腫瘤組織6 cm)。所有結直腸癌患者術前均未行放、化療或免疫靶向治療，其中男性28例，女性17例；年齡40-74歲(中位57歲)；術后病理診斷分期：T1+T2期21例，T3+T4期24例；Ⅰ+Ⅱ患者20例，Ⅲ+Ⅳ期患者25例；腫瘤分化程度：高中分化27例，低分化18例。有淋巴結轉移24例，無淋巴結轉移21例。

1.2 免疫組化染色結直腸癌組織，癌旁組織石蠟切片，脫蠟，蒸餾水沖洗，0.3%H2O2液封閉，室溫下孵育10 min，滴加5%BSA封閉液，室溫20 min。滴加適當的一抗，滴加生物素化二抗，滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶溶液，27-37度20 min.DAB顯色，蘇木精輕度復染，脫水，透明，封片。主要抗體包括：鼠抗人Foxp3單克隆抗體(Life Span Bioscience公司，美國)。

1.3 結果判斷標準免疫組化染色結果所有病理染色切片均有兩名病理科醫師參照相關免疫組化反應結果的判斷標準對免疫組化結果進行判定，陽性細胞胞漿或胞核染成棕黃色。采用半定量法依照染色強度及染色細胞百分比進行判定。染色強度計分方法：無陽性染色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性染色細胞構成比計分方法：無陽性染色細胞0分，陽性細胞百分比≤10%為1分，陽性細胞百分比11%-50%為2分，陽性細胞百分比51%-75%為3分，陽性細胞百分比>75%為4分。最終評分為染色強度分數與陽性細胞百分比分數的乘積。≥4分，則代表陽性表達。

1.4 統計學分析應用SPSS17.0統計軟件進行處理，采用卡方檢驗及Spearman等級相關分析兩種統計方法對數據進行處理，以P<0.05表示異常具有統計學意義。

2 結果

2.1 Foxp3在結直腸癌組織和癌旁組織中的表達結直腸癌組織中Foxp3的陽性表達率71.1%(32/45)，癌旁組織的陽性表達率22.2%(10/45)，結直腸癌組織中Foxp3的陽性表達率顯著高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.01)，見表 1，圖1。

表1 45例Foxp3在結直腸癌組織和癌旁組織中的表達[例(%)]

A：癌組織Foxp3表達 B：癌旁組織Foxp3表達

圖1 免疫組化技術檢測Foxp3在結、直腸癌組織及癌旁組織中的表達

2.2 結直腸癌患者組織中Foxp3表達與臨床病理因素的關系結直腸癌組織中Foxp3的陽性表達率與腫瘤的分期和淋巴結轉移有關，腫瘤分期為Ⅲ期/Ⅳ期，以及淋巴結轉移的結直腸癌組織中的Foxp3陽性表達率高于腫瘤分期Ⅰ期/Ⅱ期，以及淋巴結未轉移的結直腸癌組織，差異有統計學意義(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度、腫瘤浸潤深度無關，見表2。

3 討論

結直腸癌是全球男性第三高發，女性第二高發的腫瘤[1]，其發病率逐年增高。傳統的癌癥治療方法是以直接殺死腫瘤細胞為基礎，近年來，多種針對結直腸癌特定分子靶點和信號通路的靶向藥物進一步提高了結直腸癌的療效。目前基于分子水平和靶向腫瘤微環境治療成為結直腸癌研究的熱點。

調節性T 細胞( regulatory T cells，Tregs) 是一類具有免疫抑制功能的T 細胞亞群，發現其在多種惡性腫瘤組織內浸潤，被認為可促使腫瘤發生免疫逃逸，與腫瘤進展及預后密切相關。2001 年[2]Brunkow 等首次報道Foxp3。最近研究表明Foxp3 在人類調節性T 細胞上特異性表達( 主要在CD4+ CD25+ Treg 細胞上表達,CD8+ CD25+Treg 細胞少量表達),因此,Foxp3 是CD4+CD25+Treg 細胞的特異性標志。惡性腫瘤的發生、發展與機體的細胞免疫狀態密切相關,其中 CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg 細胞為主的抑制性T 細胞在腫瘤免疫中起著重要作用。目前Fox p3 是參與腫瘤微環境中抑制免疫應答的重要調節基因,是腫瘤免疫學研究的熱點。

表2 45例結直腸癌組織中Foxp3的表達與臨床病理因素的關系[例(%)]

Foxp3被認為是在調節性T細胞中作用最為突出的一種表面標記蛋白，研究表明，其在人類不少的惡性腫瘤細胞中都有表達。本研究結果表明Foxp3在結直腸癌組織中的表達顯著高于癌旁組織(P<0.01)，Foxp3陽性表達率71.1%。與臨床報道大致相符[3]。國內學者邱磊[4]報道，Foxp3在結直腸癌組織中高表達，其過度表達可能是結直腸癌患者預后的一個獨立危險因素。與正常組織相比，結腸癌細胞中Foxp3表達增加，且高表達與患者的不良預后相關[5，6]。

本研究證實隨著結直腸癌淋巴結轉移和腫瘤分期增加，Foxp3表達進一步增加，腫瘤分期為Ⅲ期/Ⅳ期，以及淋巴結轉移的結直腸癌組織中的Foxp3陽性表達率高于腫瘤分期Ⅰ期/Ⅱ期，以及淋巴結未轉移的結直腸癌組織，差異有統計學意義(P<0.05)，而與性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度無關。關于本研究表明Foxp3表達水平與結直腸癌腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度無相關性，是否與本研究樣本量較少有關，要得到更為準確的結論本研究尙需要納入更多的臨床病例。

本研究分析表明，Foxp3在結直腸癌組織中高表達，有助于判斷結直腸癌轉移潛能，有望成為結直腸癌評估診斷的新靶點。