王老吉、香薷散對熱應激大鼠HSP70、皮質醇和抗氧化功能的影響

李樺 屈倩 劉翠 郭世寧 石達友

摘要：Wistar雄性大鼠80只，隨機分成4組，每組20只，分為王老吉組、香薷散組、熱應激陽性對照組（簡稱熱應激組）和適溫組，分別給2中藥試驗組大鼠按7 mg/kg·BW灌服中藥復方煎液，試驗期7d。在熱應激后3h、1d、3d、7d時檢測血清熱休克蛋白（ HSP70）及皮質醇（Cor）水平和抗氧化功能。結果顯示，王老吉和香薷散煎液均能抑制大鼠熱應激下血清HSP70和Cor水平升高，并提高機體抗氧化功能，降低丙二醛（MDA）的生成。

關鍵詞：王老吉;香薷散;試驗動物;熱應激

中圖分類號：R285

文獻標識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.17.001

0引言

在熱應激影響下動物機體會產生一系列的損傷，王老吉能改善應激下小鼠免疫機能，提高抗氧化能力;研究還證實香薷中的揮發油類、黃酮類、香豆素類等多種活性成分具有抗病原微生物、消炎、增強免疫等藥理作用。試驗主要觀察王老吉和香薷散分別用于急性熱應激的試驗動物大鼠，并通過測定血清皮質醇及HSP70濃度、抗氧化指標和小腸段病理切片，觀察王老吉和香薷散對熱應激大鼠相關功能的影響，為中藥防治熱應激應用研究工作提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1試驗動物

7周齡的雄性無特異性病原體級（ SPF） Wistar大鼠（ 180±10）g，購自南醫科大學試驗動物中心，質量合格證號：440021000005777），按照SPF級試驗動物常規飼養。

1.2藥品與制備

王老吉由仙草、雞蛋花、布渣葉、菊花、金銀花、夏枯草、甘草7味組成，先將中藥泡20 min，頭煎15 min，二煎10 min，將2次煎煮中藥混合，最終減壓濃縮為1.08 g/mL生藥。香薷散由香薷、黃芩、黃連、甘草等組成，其中香薷加8倍量水泡0.5 h，提取揮發油5h，收集揮發油備用，蒸餾后的水溶液另器收集。藥渣與其余9味藥材加10倍量水煎煮3次，每次2h，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，減壓濃縮至含量為1.12 g/mL生藥，冷卻后，攪拌下加入吐溫-80與香薷揮發油的混合液（揮發油：吐溫-80=1：2），加入0.3%山梨酸鉀，濾過，即得。

1.3試驗分組與處理

80只成年Wistar雄性大鼠，隨機分成4組，每組20只，試驗1、2和3組是熱應激組，用室內加熱器將溫度保持在35 ～38℃，濕度為50% ～ 70%，試驗4組是適溫組，溫度20 ～26 ℃環境下飼養。試驗1組在熱應激下，每天按7mg/kg·BW灌服王老吉，試驗2組灌服與試驗1組等濃度的香薷散，試驗3組和4組分別熱應激下和適溫下灌胃等量生理鹽水，自由飲水、采食，試驗期7d。

1.4樣品采集與保存

在熱應激第3h、1d、3d和7d時，每組隨機取5只大鼠，1%戊巴比妥鈉按50 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血4 mL，于- 20℃冰箱保存用于血清皮質醇及HSP70濃度和抗氧化指標的測定。

1.5數據處理

試驗結果采用“平均數±標準誤”（

±S.E）表示，用SPSS 17.0統計軟件one-way ANOVA分析各組間的差異顯著性，通過Duncan's新復極差檢驗法進行各組間的多重比較。

2結果與分析

2.1 大鼠血清皮質醇Cor濃度影響

試驗3 h，香薷散組血清Cor濃度顯著高于適溫組（P<0.05）;在熱應激1d，王老吉組血清Cor濃度分別顯著和極顯著低于香薷散組（P<0.05）和熱應激組（P<0.01），香薷散組血清Cor濃度與熱應激組相比極顯著降低（P<0.01），且極顯著高于適溫組（P<0.01）;試驗在熱應激3d，各試驗組間血清Cor濃度無顯著差異（P>0.05）;熱應激試驗7d，王老吉組血清Cor濃度極顯著低于熱應激組（P<0.01）和香薷散組（P<0.01），香薷散組和熱應激組血清Cor濃度與適溫組相比均極顯著升高（P<0.01）。表明熱應激導致大鼠血清Cor增加，在飲水中添加王老吉和香薷散中藥復方煎液均能抑制血清Cor的增加，且中藥復方中王老吉效果優于香薷散。見表1。

2.2大鼠血清HSP70濃度影響

試驗在熱應激3h，香薷散組血清HSP70含量顯著低于熱應激組（P< 0.05），熱應激組血清HSP70含量顯著高于適溫組（P< 0.05）;熱應激ld和3d，各試驗組血清HSP70含量無顯著差異（P>0.05），但均比熱應激3 h各試驗組血清HSP70含量升高;試驗到熱應激7d，王老吉組血清HSP70含量顯著低于香薷散組（P<0.05），且香薷散組血清HSP70含量與適溫組相比極顯著升高（P<0.01）。見表2。

2.3 大鼠血清抗氧化指標影響

王老吉組T-AOC含量極顯著高于熱應激組（P<0.01），適溫組、香薷散組與熱應激組比較差異不顯著（P>0.05）;適溫組和王老吉組SOD顯著高于熱應激組（P<0.05），香薷散組SOD活性顯著高于熱應激組（P<0.01）;MDA含量在各組間差異均不顯著（P>0.05），熱應激組MDA含量均比其余3個試驗組MDA含量高。表明在熱應激下，大鼠血清抗氧化功能減弱，口服中藥復方王老吉和香薷散煎液對熱應激下機體的抗氧化能力有恢復作用。見表3。

3討論

3.1 大鼠血清皮質醇Cor濃度影響

高溫季節會導致腎上腺皮質和髓質機能亢進，血漿中糖皮質激素水平極大提高而使動物機體分解代謝加強，以抵御外界高溫對機體造成的壓力。試驗中熱應激組血清皮質醇濃度普遍高于適溫組與2中藥組，中藥煎液王老吉和香薷散的添加應用均可以降低熱應激大鼠血清皮質醇濃度，進而增強機體抗熱應激能力。王老吉涼茶依據傳統配方，采用菊花、甘草、仙草、金銀花、夏枯草等7種上等草本材料配制而成，現代科學研究表明，王老吉涼茶內含植物黃酮類等天然成分，具有清熱解毒，預防上火，提高人體免疫力之功效。運用清熱祛濕化瘀的方法能減輕糖皮質激素不良反應，中藥復方煎液中的某些活性物質通過降低熱應激條件下升高的血漿皮質醇含量至正常水平，進而增強機體免疫功能和抗應激能力，這與牛國慶等人的結果報道一致。

3.2大鼠血清HSP70濃度影響

在熱耐受能力形成方面，熱休克蛋白家族群（ HSPs）是可使細胞非特異性抗損傷能力增強的保護性蛋白狀況下HSPs的合成量增加，其中以HSP-70研究最為豐富。具有發表祛暑、利濕行水的香薷為常用中藥，多用于暑濕感冒、惡寒發熱、腹痛、無汗、吐瀉等癥。研究表明香薷散對啤酒酵母菌致熱大鼠的退熱作用，連續3次給藥，能延長其退熱時間，對發熱過程的體溫反應指數有明顯的影響。在治療小兒暑熱外感時，在點滴中加入香薷飲，與對照組相比，香薷飲對小兒外感暑熱有顯著治療效果，并且可減少退燒時間。從增加體內HSP-70的合成，抵御熱應激的損傷。

3.3大鼠血清抗氧化指標影響

T-AOC是機體抗氧化能力的整體表現。SOD能清除動物機體在新陳代謝中產生的有害物質，反映動物機體清除自由基的能力。MDA是動物體內，自由基作用于脂質發生過氧化反應的氧化最終產物，它的高低反映動物機體受自由基攻擊的損傷程度。在熱應激下，大鼠血清抗氧化功能減弱，口服中藥復方王老吉和香薷散煎液對熱應激下機體的抗氧化能力有恢復作用。香薷散中香薷能夠發汗解暑，化濕、利水，黃芩能夠清熱瀉火，燥濕解毒，二者含有的黃酮類具有清除能夠清除自由基，抑制脂質被過氧化，黃連含有黃連苷，具有能抑制細胞內抗氧化酶活性抑制自由基，降低活性氧，阻斷自由基損傷，進而發揮抗氧化損傷作用。王老吉中仙草提取物中含有大量的酚類化合物，具有較強的抗氧化、清除活性氧、保護細胞氧化損傷。雞蛋花、金銀花、布渣葉具有明顯的解熱效果。

4結論

熱應激大鼠飲水中添加王老吉和香薷散中藥復方煎液均能抑制Cor的增加，且中藥復方中王老吉效果優于香薷散。熱應激導致大鼠血清HSP70含量升高，抗氧化功能減弱，王老吉煎液能降低血清HSP70含量。試驗以試驗動物為對象，對王老吉和香薷散抗熱應激的藥效學進行研究，為王老吉和香薷散在畜禽養殖生產上抗熱應激方面提供理論依據。

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作者簡介：李樺（1990-），女，廣東省佛山人，碩士，獸醫師，

專業：臨床獸醫學。

通信作者：石達友（1977-），華南農業大學，郵箱：shidayou@scau.edu.cn。