宮頸細胞學液基薄層制片與傳統宮頸涂片巴氏染色的制片效果對比分析

摘要：目的探討宮頸涂片巴氏染色和液基薄層細胞檢測（TCT）制片效果。方法分別對2013年至2015年本院 1000例婦科傳統宮頸涂片和2014年至2016年本院1000例液基薄層檢測標本進行了回顧性分析、對比，比較了2種方法的制片效果和細胞形態及其影響因素。結果本研究所有研究對象中， TCT 細胞學的宮頸癌檢出陽性率為 9.90%（99/1000），傳統巴氏染色法的檢測陽性率為 6.50%（65/1000），兩種檢測方法的檢出陽性率之間的差異顯著，有統計學意義。結論液基薄層細胞檢測技術（TCT）制片效果優于傳統宮頸涂片巴氏染色，明顯提高檢測準確率。

關鍵詞：宮頸細胞液基薄層細胞檢測;宮頸涂片巴氏染色;制片效果對比，分析

閆秀英（1975年），女，漢族，甘肅蘭州人，大學本科，病理學主管技師，主要從事病理學技術方面的工作，擅長免疫組織化學染色和分子病理學技術。

宮頸癌在目前全球女性最常見的惡性腫瘤中位于第二，嚴重危害婦女的身體健康;發展中國家及不發達地區宮頸癌的患病率及死亡率均高于發達國家及地區;發展中國家每年宮頸癌新發病例數約占世界每年宮頸癌新發病例數的80%[1-3];我國宮頸癌的患病率約占世界宮頸癌患病率及死亡率的1/3[4]。宮頸癌的死亡率僅次于乳腺癌，預后較差。宮頸癌是能夠早期預防、早期診斷、早期治愈的，因此對于宮頸的癌前病變進行早期篩查、早期診斷和早期治療是提高宮頸癌生存率和治愈率的主要方法。最基本、最簡單的方法是采用傳統的宮頸涂片巴氏染色檢測技術，目前較發達地區多采用宮頸液基薄層細胞學檢測（TCT）進行對宮頸的癌前病變以及宮頸癌的篩查。

液基薄層制片（ Thin-Cytologic Test，簡稱 TCT） 是近年應用于臨床細胞病理學診斷的一種新技術，從根本上解決了常規脫落細胞制片技術難題，如假陰性率高、涂片質量差和丟失細胞率高等，為脫落細胞學診斷做出了重大貢獻。TCT 可全自動制備均勻的薄層標本，采用機械、氣動和流體動力學原理，大大減少了影響閱片的血液、黏液和炎性細胞[5]。我們分別對2013年至2015年本院 1000例婦科傳統宮頸涂片和2014年至2016年本院1000例液基薄層檢測標本進行了回顧性分析、對比，比較了2種方法的制片效果和細胞形態及其影響因素。

1材料與方法

1.1材料：

由蘭州市第一人民醫院婦科門診、住院部及體檢中心提供宮頸涂片和液基細胞保存液處理過的標本瓶，所有標本均是新鮮采集及時送檢。細胞保存液、細胞提取液、標本收集瓶、一次性使用宮頸采樣拭子刷等由泰普生物科學（中國）有限公司提供。拭子刷A2型號，由刷桿、套管和刷頭（包括刷毛部分和連接部分）組成;刷桿和套管由聚丙烯（PP）制成，刷頭由聚乙烯（PE）制成。

1.2方法：

1.2.1傳統的宮頸涂片

傳統宮頸涂片是由婦科醫生采用婦科木制刮板刮取宮頸及宮頸管內的上皮細胞樣品，均勻地涂在玻片上，隨即送檢病理科，95%的酒精“帶濕固定法”固定20分鐘，巴氏染色法染色，無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結果。

1.2.2液基薄層細胞檢測（thinprep cytologic test），簡稱TCT

由婦科醫生用一次性標本采集刷采集宮頸脫落細胞標本：用大拇指與食指捏住刷柄，將采集刷尖伸入宮頸口內朝順時針方向旋轉3-5周，抽出采集刷，卸下刷頭立即放入裝有保存液的標本瓶，輕輕搖晃、漂洗，以使刷頭上的細胞全部混入保存液中，送檢病理科。我科接受標本后先在標本瓶上編號，然后將標本瓶震蕩混勻，使刷頭上的細胞完全脫落到標本瓶保存液中。用一次性網管通過過濾膜進入過濾器（過濾膜具有3萬—5萬個小孔，濾膜孔直徑為5微米），將標本瓶中的標本過濾。然后在濾后的裝有標本的標本瓶內加入4ml細胞提取液，1080轉/分，離心2分鐘。用吸管抽吸標本瓶上部液體8ml棄去，再2000轉/分，離心10分鐘。取出離心管棄去上清液。將離心管在振蕩器上震蕩25秒，使離心管底部聚集的細胞恢復懸浮狀態。然后按編號順序將離心管放入制片機制片，經設置好的程序運行，自動完成細胞混勻、細胞轉移的制片過程，經程序化處理后制成直徑為2cm的薄層細胞涂片染色。染色試劑有HEMA（蘇木素）、EA/OG染色試劑;H2O（緩沖液）、ALC（沖洗液），蘇木素清潔液用蒸餾水（純化水），EA/OG清潔液用75%乙醇，染色、沖洗均自動完成。手工進行80%乙醇-95%乙醇-100%乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下閱片。

2.結果

2.1傳統的宮頸涂片染色：細胞核藍色，鱗狀上皮底層及表層的細胞胞漿均染成藍綠色，表層不全角化細胞胞漿呈粉紅色，完全角化細胞胞漿呈桔黃色，粘液染成淡紅色或淡藍色，紅細胞染呈鮮紅色，涂片色彩豐富。但巴氏染色易陳舊，效果不穩定;涂片過厚，細胞重疊多，厚薄不勻，涂片質量不能保證（圖1）;由于涂片厚薄不均勻，封好的切片放置一段時間后有個別切片出現邊緣有氣泡或密封不全，不利于長時間保存。傳統的手工涂片無法祛除正常宮頸細胞學成分以外的雜質，含有血液、粘液、組織碎片及炎性細胞，遮蓋了正常細胞，致細胞結構不清楚;有的涂片有細胞水腫、有的有細胞退變等容易影響診斷。采用細胞學診斷標準是“巴氏五級分類法”。

2.2液基薄層細胞檢測TCT制片：細胞均勻分布于載玻片上，幾乎無重疊，紅藍分明，結構清晰，背景干凈看不到血液、粘液及炎性細胞的干擾;全部切片蓋玻片密封完好，染色色彩幾乎無褪色、無陳舊現象（圖2）。診斷分析結果采用2001年國際癌癥協會推薦的新TBS（The Bethesda System）分級系統標準診斷，其包含三項內容：標本評估、總分類、描述性命名：判讀/結果。具體包括標本滿意度評估，有無反應性炎性細胞變化，有無微生物病原體如滴蟲、霉菌、皰疹病毒、人乳頭狀瘤（HPV）病毒、白色念珠菌、放線菌感染的改變，細胞量的多少（大于或小于5000個細胞），上皮細胞異常的分類明確、細致。

分別對2013年至2015年本院 1000例婦科傳統宮頸涂片和2014年至2016年本院1000例液基薄層檢測標本進行了回顧性分析、對比，結果表明，巴氏分類檢出陽性結果 （ASC-US 及以上 ）為 65 例，陽性檢出率為 6.50%，TCT 檢出陽性結果為 99例，陽性檢出率為 9.9%，兩種檢測方法的陽性檢出率有顯著差異。見表 1

3.討論

3.1傳統的細胞學制片法由于操作方法簡單，所需設備簡單，制片技術簡捷，價格便宜，醫務人員能節省人力，病患也因減輕經濟負擔而樂于接受檢查，在基層醫院容易推廣應用，對疾病早期發現、早期診斷起到了積極作用，傳統的宮頸涂片巴氏染色對于宮頸的癌前病變通?？梢院Y查出來，對于降低宮頸癌的風險起到積極作用，能檢測出70%--80%的由人乳頭狀瘤（HPV）病毒引起的細胞學異常[6]。因此基層醫療單位在設備不全、經濟有限的情況下可作為宮頸病變的初步篩查。但因其由于細胞采集的量、能否及時固定、固定的時間和制片的技術不穩定等人為因素影響，部分陽性細胞甚至被血細胞或炎性細胞等所覆蓋，難以分辨細胞結構，容易漏診，出現假陰性或假陽性診斷結果，從而影響診斷精確度[7]。傳統手工方法制作的涂片只收集了最多20%的細胞，而80%以上的細胞樣本則殘留在采樣器上并隨采樣器一起被丟棄。另外，40%以上的涂片會因血液、粘液和炎癥組織的影響而變得混濁不清，以及固定不及時、涂片太厚造成掉片、細胞重疊等人為因素所致細胞結構不清，使閱片困難，存在假陰性或假陽性。

3.2液基薄層細胞檢測TCT 技術因可全自動制片，幾乎使采集器上所有細胞得以保存，細胞采量增加，使血液，粘液，上皮細胞和炎性細胞經過處理后得以分離，細胞集中，涂片質量穩定，薄而均勻，保存了細胞的完整性，去除了紅細胞、黏液等的涂片，染色背景清晰，容易觀察到病變，陽性檢出率有所提高，同時也減輕了細胞學工作者的視力疲勞。TCT技術報告采用TBS（The Bethesda System）分級系統標準診斷報告系統，明顯提高了標本的滿意度及宮頸異常細胞檢出率，對宮頸癌細胞的檢出率明顯提高，同時還能發現癌前病變、微生物感染如霉菌、滴蟲、衣原體等。 TCT 技術不僅避免了漏診，而且是有規范程序的制片，減少了人為因素造成的影響，提高了工作效率，經過規范化培訓的人員都可制備標準化的細胞學涂片，實現了標準化管理。從而提升了診斷價值，是一種更為敏感的方法。TCT技術能檢測85%--95%的由人乳頭狀瘤（HPV）病毒引起的細胞學異常，降低了假陰性率，對促進臨床細胞病理工作具有積極的作用[6]-[8]。潘秦鏡[9]等報道TCT 技術具有高度敏感性和特異性，假陰性率僅為 2.3%，大大低于傳統巴氏涂片的 15%～40%。

綜上所述，目前大量研究論證了液基薄層細胞檢測TCT與傳統宮頸涂片巴氏染色檢測相比較，TCT技術具有高度的敏感性和特異性，檢出率優于傳統宮頸涂片巴氏染色，液基薄層細胞檢測TCT 技術對宮頸的癌前病變的檢出率比傳統的巴氏涂片提高 233%[10]，大大降低了誤診率和漏診率，在實際工作中對TCT檢測陽性的病人進一步做其他檢查（如HPV檢測、陰道鏡檢查、宮頸組織學活檢等），跟蹤隨訪，進行有效的治療，可預防和治愈宮頸癌疾病，值得在臨床診療和基層醫療單位推廣應用。

參考文獻

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[9] ?潘秦鏡， 李凌. 液基細胞學篩查宮頸癌的研究 [J]. 中華腫瘤雜志，2001， 23 （4）： 309-311.

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