革蘭染色法、細菌培養法及PCR法在陰道細菌檢驗中的應用比較

吳斌 楊巧榮

【摘要】目的：探討在陰道細菌檢驗過程中分別采用革蘭染色法、細菌培養法及PCR法所能收獲的效果。方法：本次研究對象為2017年1月～2019年1月期間在本院就診的97例陰道疾病患者，對其陰道分泌物標本均完成革蘭染色法、細菌培養法及PCR法三種檢驗，對比檢出率。結果：革蘭染色法組總檢出率明顯低于細菌培養法組、PCR法組，細菌培養法組總檢出率與PCR法組對比結果顯示，差異無統計學意義。結論：陰道細菌檢驗過程中，細菌培養法及PCR法均能獲得滿意且較高的準確度，在疾病診斷、指導治療方面意義深遠，但考慮時效性、普遍性要求，則PCR法更為適宜，耗時短且適宜基層醫院普遍應用。

【關鍵詞】革蘭染色法;細菌培養法;PCR法;陰道細菌檢驗

個人簡歷：吳斌（1984.5-），男，漢族，甘肅敦煌人，敦煌市中醫醫院檢驗科工作，主管檢驗技師，本科學歷，主要從事醫學檢驗工作。

陰道細菌感染是引起陰道炎等在內多種婦科疾病最為常見的影響因素，陰道內環境遭到破壞，酸堿失衡情況突出，對其生活困擾十分明顯，對其健康危害巨大，隨著陰道細菌感染不斷加劇，甚至會進展成盆腔炎、導致不孕等，臨床認為進行必要的陰道細菌檢查，盡早發現病變跡象可對機體發生細菌性陰道疾病起到預防作用[1]。基于此，本研究在陰道細菌檢驗過程中應用革蘭染色法、細菌培養法及PCR法等三種不同實驗室檢驗方法，現報告如下。

1臨床資料與方法

1.1臨床資料

97例陰道疾病患者均于2017年1月～2019年1月期間在本院就診，經證實均存在不同程度的陰道疾病，伴隨陰道存在明顯瘙癢感、陰道分泌物呈現明顯異常狀態等癥狀。年齡25～45歲，平均年齡（36.72±2.25）歲。97例陰道疾病患者均符合：日常月經正常;納入本次研究前15d并未使用抗生素;納入本次研究前15d并未進行陰道用藥;3周內未進行性生活;均知情本次研究，且自愿參與。排除婦科器質性疾病者;心、腎等重要臟器疾病者;妊娠期、月經期、哺乳期女性患者。

1.2方法

采集全部研究對象的陰道分泌物，對其陰道分泌物標本均完成革蘭染色法、細菌培養法及PCR法三種檢驗。

①陰道分泌物標本采集。取截石位，在無菌陰道鏡的輔助作用下促使患者宮頸部位能夠有效顯露，在此狀態下，取無菌棉簽蘸取陰道分泌物，陰道分泌物標本取好之后應予以良好保存，臨床建議將其放置于預先準備好的無菌試管中，對無菌試管要求提前存放適宜生理鹽水。

②革蘭染色法。用紗布事先完成所用載玻片的擦拭清潔工作，完成后進行浸泡步驟，浸泡要求于乙醇中進行，浸泡步驟完成后，正確手法將其取出、晾干，之后應將陰道分泌物標本涂抹于載玻片上，要求涂抹以均勻為宜，涂抹步驟完成后，取蓋玻片加以固定，固定完成后進行正確革蘭染色，借助醫用顯微鏡作進一步的觀察、分析工作。

③細菌培養法。取陰道分泌物標本，在確保無菌條件下開展檢驗工作，首先利用無菌接種環開展接種，于細菌分離專用培養基上完成接種，其次將其放置于二氧化碳培養箱內，此步驟為的是完成孵育，需要注意的是，培養箱溫度應控制在35℃，在歷時48h后觀察培養物，最后選擇滿足生化檢驗要求之菌落，具體要求有三：一是半透明狀，二是灰色光滑，三是水滴狀。

④PCR法。預先準備好離心機，用其完成陰道分泌物離心工作，離心要求有二：一是12000r/min轉速，二是10min離心時間;之后取上層清液，添加適宜劑量的堿性裂解液完成加熱工作，加熱要求有二：一是溫度98℃，二是加熱時間10min;接下來進行再次離心，離心要求有二：一是12000r/min轉速，二是5min離心時間;取上層清液，按照相關要求將其制成臨床DNA模板，DNA模板制作完成后，如果添加有DNA模板，則其為陽性組，如沒有添加則為陰性組，對比分析陽性組與陰性組，完成PCR產物檢測與擴增步驟，最后完成提取，則需要借助無菌去離子水進行，在其表面用石蠟予以良好規范覆蓋，目的在于完成PCR反應循環，共計32環。

1.3觀察指標

陰道細菌陽性檢出率比較。

1.4統計學處理

對本研究所得數據均采用統計學軟件SPSS21.0進行分析，計數資料采用百分數表示，并行卡方檢驗，以α=0.05為檢驗水準，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果 ?革蘭染色法組總檢出率明顯低于細菌培養法組、PCR法組（P<0.05），細菌培養法組總檢出率與PCR法組對比結果顯示，差異無統計學意義（P>0.05）。詳見表1。

3討論

陰道細菌感染引起的婦科疾病，多速度緩慢且無癥狀表現，在感染初期多不能及時被發現，隨著感染加劇，治療困難程度隨之增大，缺乏恰當、有效的治療，則易進展成盆腔炎、出現腹腔感染等一系列病癥，甚至造成生育能力喪失[2]。正常生理狀態下，在女性陰道部位會存在許多上皮細胞，與之并存的是革蘭陽性球菌等，上述諸多物質的存在有其合理性，但當機體自身抵抗力下降或者機體因遭受其它環境因素的影響造成感染事件迅速蔓延，短時間內打破陰道內寄生菌群平衡之狀態，其陰道功能受到影響，自凈能力明顯降低甚至出現消失跡象，隨之不利于系統穩定性保持，在此過程中，益生菌易受到不利影響，開始出現大量死亡情況，進而更為適宜致病菌生存、使其得以快速繁殖，陰道酸堿不平衡，紊亂情況尤為嚴重，隨之而來的是一系列臨床癥狀。由此可見，對女性患者來說，其健康的陰道內環境依賴于陰道菌群的變化，只有準確、有效的了解復雜陰道菌群變化情況，方能為陰道內環境之健康、穩定狀態提供強力有效保證，所以檢測陰道細菌感染情況在恰當科學治療細菌性陰道疾病中所起到的作用不容小覷[3]。

細菌性陰道疾病臨床治療強調早期診斷，而陰道分泌物檢查所發揮的作用不容忽視，據此能夠更為清晰全面了解陰道菌群失調情況、感染情況等，故而其應用范圍甚是廣泛，其檢測結果準確性與細菌性陰道疾病的診斷、恰當科學的治療、良好的預后之間的關系不言而喻。但此項輔助檢查因具體檢測方法具有多樣化之突出特點，臨床迫切尋求一種兼具準確度可靠、便捷易操作、時效性理想之多重特點的檢測方法，旨在通過此檢測手段獲得有利依據以制定恰當適宜的治療方案，更為良好維護女性健康。其中革蘭染色法因操作簡便故而在臨床上有著較為良好的認可度，應用范圍也比較廣，但其在檢驗操作過程中易受諸多因素的影響，比如染色時間把握情況、觀察誤差程度等，這些因素的影響導致準確度不甚理想，并不適宜陰道細菌感染的檢驗[4]。細菌培養法與PCR法均能獲得滿意的準確度，但考慮到細菌培養法在保證取得成效的同時，執行過于繁瑣，步驟繁多，其凸顯出過程復雜、耗時長等諸多特征，使其無法普遍推廣，尤其是對于基層醫院來說并不適宜，但PCR法與之不同，臨床研究證實其體現出“高特異性、強靈敏度、便捷快速”之優勢，其整個檢驗過程耗時多控制在2～4h，用時較短，易被接受，更重要的是，其對檢驗標本的純度并未作特別要求，一方面融合DNA雜交特異性之優點，另一方面融合RCP敏感性性之優點，使得其測定結果準確度甚佳[5]。

本研究結果顯示，革蘭染色法組總檢出率明顯低于細菌培養法組、PCR法組，細菌培養法組總檢出率與PCR法組對比結果顯示，差異并不顯著。提示臨床在開展陰道細菌檢驗過程中，細菌培養法及PCR法準確性更令人滿意，若檢驗更強調時效性、普遍性時，PCR法更容易滿足需求。

參考文獻

[1] 陳瑞軒. 革蘭染色檢驗法、PCR檢驗法與細菌培養法在陰道細菌檢查中的應用比較[J]. 中醫臨床研究， 2016， 8（34）：126-127.

[2] 寧詠梅. 細菌培養法、PCR檢驗法及革蘭染色法檢驗陰道細菌的對比研究[J]. 醫學檢驗與臨床， 2016， 27（1）：35-37.

[3] 蔡萍. 3種檢驗方案在陰道細菌檢驗中的應用對比研究[J]. 國外醫藥抗生素分冊， 2016， 37（2）：87-89.

[4] 代雨榮. 3種方法檢測陰道細菌的結果對比研究[J]. 國際檢驗醫學雜志， 2017， 38（3）：386-387.

[5] 翁昌橋. 3種檢驗方案在陰道細菌檢驗中的應用對比研究[J]. 醫藥前沿， 2016， 6（1）：86-87.