相關信號通路阻斷對子宮內膜癌裸鼠移植瘤生長影響

朱博文　黃煜　鄭晶　顏莉莉　林慧　張清宇

[摘要] 目的 探討阻斷趨化因子通路CXCL12/CXCR4、CXCR7及細胞外調節蛋白激酶（ERK）信號通路，對人子宮內膜癌Ishikawa細胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法 將子宮內膜癌Ishikawa細胞懸液與基質膠按1∶1混合，調整細胞密度為7.5×1010/L，取200 μL注射于裸鼠右側背部肩胛皮下，制備子宮內膜癌動物模型，建模成功后隨機分為AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組和NaCl組（對照組），每組6只。各組裸鼠分別經腹腔給予相應藥物，每3 d給藥1次，共3周。觀察荷瘤裸鼠的狀態及移植瘤的生長情況，繪制腫瘤生長曲線，計算抑瘤率;應用RT-PCR方法檢測各組瘤體組織中凋亡抑制基因Survivin mRNA的表達。結果 治療周期結束后，AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組腫瘤體積及質量均低于對照組，抑瘤率明顯高于對照組，瘤體組織Survivin mRNA的表達低于對照組，差異有統計學意義（F=11.35～72.27，P<0.01）;AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組腫瘤體積、質量、抑瘤率及瘤體組織Survivin mRNA的表達比較差異均無顯著性（P>0.05）。結論 阻斷CXCL12的特異性受體CXCR4、CXCR7以及細胞內ERK信號通路，能夠抑制子宮內膜癌Ishikawa細胞裸鼠移植瘤的生長，其機制可能與瘤體組織凋亡抑制基因Survivin的下調有關。

[關鍵詞] 受體，CXCR4;趨化因子CXCL12;CXCR7;細胞外信號調節MAP激酶類;子宮內膜癌

[中圖分類號] R737.33 ?[文獻標志碼] A ?[文章編號] ?2096-5532（2019）04-0442-05

[ABSTRACT] Objective To investigate the inhibitory effects of blocking the chemokine pathways CXCL12/CXCR4 and CXCR7 and extracellular regulated protein kinase （ERK） signaling pathway on subcutaneous xenografts of human endometrial carcinoma Ishikawa cells in nude mice. ?Methods Endometrial carcinoma Ishikawa cell suspension was mixed with Matrigel at a ratio of 1∶1， and the cell density was adjusted to 7.5×1010/L; 200 μL of the mixture was subcutaneously injected into the right back scapula of nude mice to establish an animal model of endometrial carcinoma. After successful modeling， the animals were randomly divided into AMD3100 group， PD98059 group， anti-CXCR7 group， AMD3100+anti-CXCR7 group， and NaCl group （control group）， with 6 animals in each group. Each group was administered intraperitoneally the corresponding drug， once every 3 d for 3 weeks. The status of tumor-bearing nude mice and the growth of transplanted tumor were observed. The tumor growth curve was plotted， and the tumor inhibition rate was calculated. The mRNA expression of apoptosis-inhibiting gene survivin in tumor tissues of each group was measured by RT-PCR. ?Results At the end of treatment cycle， the AMD3100 group， PD98059 group， anti-CXCR7 group， and AMD3100+anti-CXCR7 group had significantly lower tumor volume and weight， a significantly higher tumor inhibition rate， and significantly lower expression of Survivin mRNA in tumor tissues than the control group （F=11.35-72.27，P<0.01）. There was no significant difference in tumor volume and weight， tumor inhibition rate， and Survivin mRNA expression in tumor tissues between the AMD3100 group， the PD98059 group， the anti-CXR7 group， and the AMD3100+anti-CXCR7 group （P>0.05）. ?Conclusion Blocking CXCL12 specific receptors CXCR4 and CXCR7 and intracellular ERK signaling pathway can inhibit the growth of xenografts of endometrial carcinoma Ishikawa cells in nude mice， which may be related to the down-regulation of apoptosis-inhibiting gene Survivin in tumor tissues.

[KEY WORDS] receptors， CXCR4; chemokine CXCL12; CXCR7; extracellular signal-regulated MAP kinases; endometrial neoplasms

子宮內膜癌（EC）是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，在某些發達國家其發病呈年輕化的趨勢[1-2]。在中國EC的發病率近年來也呈現出上升趨勢[3]。由于其發病機制尚未明確，對于臨床晚期病人特別是復發轉移者，目前的治療手段仍較為局限。近年來，EC發生中腫瘤細胞內信號通路的異常受到學者們廣泛關注[4-6]。多數研究證實，趨化因子CXCL12及其受體CXCR4、CXCR7在多數腫瘤的發生發展中起重要作用，尤其是其在EC生物學行為中的作用及其機制成為目前研究的熱點[7]。已有研究證實，特異性小分子抑制劑靶向干預腫瘤細胞內信號通路，能夠抑制EC細胞的增殖[8-9]。體外研究顯示，趨化因子通路CXCL12/CXCR4、CXCR7在EC細胞生物學行為中發揮正向調控的重要作用，且CXCL12/CXCR4生物軸通過激活ERK通路上調Survivin蛋白表達，從而引發Ishikawa細胞一系列增殖和侵襲效應，而應用小干擾RNA靶向沉默CXCR4、CXCR7的表達后，Ishikawa細胞的增殖及侵襲能力均降低，并且在細胞周期中出現S期阻滯[10-12]。體內實驗將化學合成的CXCR4-siRNA和（或）CXCR7-siRNA局部注射于荷瘤裸鼠瘤體內，結果顯示靶向沉默CXCR4及CXCR7的表達后，體內腫瘤細胞的增殖能力明顯受限[13]。本研究擬建立EC裸鼠移植瘤動物模型，模擬腫瘤在體內生長的微環境，將CXCR4特異性拮抗劑AMD3100（商品名普樂沙福）、ERK信號通路阻斷劑PD98059、CXCR7中和抗體Anti-CXCR7經腹腔注射于荷瘤裸鼠體內，觀察移植瘤的生長情況并檢測瘤體組織內凋亡抑制基因Survivin的表達，探討AMD3100、PD98059、Anti-CXCR7對EC裸鼠皮下移植瘤生長的影響?，F將結果報告如下。

1 材料和方法

1.1 細胞及實驗動物來源

EC Ishikawa細胞由青島大學附屬醫院中心實驗室提供。SPF級雌性BALB/c裸鼠30只，4～5周齡，體質量14～18 g（購自北京維通利華實驗動物技術有限公司），飼養于青島大學醫學部SPF級動物中心，適應1周后用于實驗。

1.2 主要試劑

DMEM高糖培養基（Hyclone公司，美國），胎牛血清（PAN，德國），青鏈霉素混合液、2.5 g/L胰蛋白酶消化液（北京索萊寶，中國），Matrigel基質膠（B&D，美國）;AMD3100、PD98059（MCE公司，美國），Anti-CXCR7（Abcam，英國），TRIzol（Invitrogen，美國），逆轉錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒（TaKaRa，日本）。Survivin和GAPDH PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.3 實驗方法

1.3.1 Ishikawa細胞培養 將Ishikawa細胞培養于含有體積分數0.10胎牛血清、10 g/L青鏈霉素混合液的DMEM完全培養基中，于恒溫37 ℃、含體積分數0.05的CO2的培養箱中培養，待細胞鋪滿培養瓶底75%～85%時，使用2.5 g/L胰蛋白酶消化傳代培養。

1.3.2 動物模型建立及分組 離心收集Ishikawa細胞后PBS重懸，將細胞懸液與Matrigel基質膠1∶1混勻調整細胞密度為7.5×1010/L。裸鼠置于超凈工作臺內，消毒皮膚后，將細胞懸液200 μL（約1.5×107個細胞）注射于裸鼠右側背部肩胛皮下，于SPF環境中飼養。每天觀察裸鼠狀態、注射部位腫瘤大小及硬度。1周后，觀察所有裸鼠右側肩胛背部皮下移植瘤（直徑>5 mm），將荷瘤裸鼠隨機分為AMD3100組（6 mg/kg）、PD98059組（50 mg/kg）、Anti-CXCR7組（1 μL）、AMD3100+Anti-CXCR7組（6 mg/kg AMD3100+1 μL Anti-CXCR7）、對照組（生理鹽水），每組6只。各組分別經腹腔注射相應藥物，每3 d注射1次，共3周。

1.4 觀察指標

1.4.1 裸鼠移植瘤生長情況 每次用藥前分別用游標卡尺測量腫瘤的長徑（a）、短徑（b），根據公式（V=ab2/2）計算腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線。治療結束后，脫頸處死所有裸鼠，于超凈工作臺內剝離瘤體，去除脂肪及血污后稱質量，計算抑瘤率。抑瘤率（%）=（對照組瘤質量-治療組瘤質量）/對照組瘤質量×100%。按照金氏公式計算q值以協助驗證聯合用藥是否有疊加抑瘤效應，q<0.85表示聯合用藥有拮抗作用，q>1.15表示有協同作用，q值0.85～1.15表示有相加作用[14]。

1.4.2 實時熒光定量RT-PCR檢測各實驗組瘤體組織Survivin mRNA表達 用TRIzol試劑提取移植瘤組織中的總RNA，使用分光光度計（IMPLEN，德國）檢測樣本中RNA濃度及純度。根據逆轉錄試劑盒說明合成cDNA，按熒光定量PCR說明書加入相應體積引物后，置于LightCycler PCR儀（Roche，瑞士）中進行Real Time PCR反應。應用LightCycler 96分析軟件自動計算出目的基因Survivin及內參GAPDH的Ct值，以2-△△Ct計算目的基因的相對表達量[15]。Survivin及GAPDH的引物序列見表1。實驗重復3次。

1.5 統計學處理

采用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計量資料結果用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 ?果

2.1 各組移植瘤的生長情況比較

治療期間，各組裸鼠生長良好，飲食、大小便、精神狀態可，無皮膚潰爛及意外死亡。各組裸鼠治療前體質量、腫瘤體積比較差異無顯著統計學意義（P>0.05）;治療后AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組的腫瘤體積與對照組相比均顯著降低，差異有統計學意義（F=72.27，P<0.05）;但AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組腫瘤體積差異無顯著性（P>0.05）。見表2、圖1。

2.2 各組移植瘤質量比較

與對照組比較，AMD3100組、PD98059組、An-ti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組的腫瘤質量均明顯減少，差異有統計學意義（F=11.35，P<0.01）;4個組間腫瘤質量比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3 各組抑瘤率比較

AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組、AMD3100+Anti-CXCR7組抑瘤率與對照組相比均明顯升高，差異有顯著性（F=22.94，P<0.01），但4組間的抑瘤率比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表3。應用金氏公式計算得出q=0.60，提示聯合用藥有拮抗作用。2.4 各組移植瘤組織Survivin mRNA表達比較? 本文AMD3100組、PD98059組、Anti-CXCR7組和AMD3100+Anti-CXCR7組移植瘤組織內的Survivin mRNA的相對表達量均較對照組明顯下調，差異有統計學意義（F=17.16，P<0.01），4組間Survivin mRNA相對表達量比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表3。

3 討 ?論

EC好發于圍絕經期和絕經后女性，嚴重影響女性身體健康及生活質量，早期EC經手術治療有明顯改善，但發生遠處轉移及復發病人即使采用聯合放化療和（或）激素治療，也不能明顯改善預后。近年來，隨著對腫瘤分子機制和信號通路研究的深入，越來越多的學者開始關注小分子靶向藥物在EC治療中的應用，并取得了一定的效果。有研究發現，在EC中PI3K/AKT/mTOR通路的改變最為常見，該信號通路的激活與EC發展及不良預后有關，它似乎存在于所有實體瘤中[16]。臨床上，對于復發、要求保留生育功能的EC病人，分子靶向藥物治療成為重要選擇，這些藥物包括酪氨酸激酶（TK）抑制劑[17]、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路抑制劑[18]、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）抑制劑[19]、蛋白激酶B（Akt）抑制劑[20]、PI3K/mTOR雙重抑制劑[21]、血管內皮生長因子（VEGF）抑制劑[22]、表皮生長因子受體（EGFR）抑制劑[23]、人類表皮生長因子受體（HER2/neu）抑制劑[24]。

CXCL12/CXCR4、CXCR7生物軸及ERK-1/2信號傳導通路在EC的發生發展中起重要作用，應用相應的抑制劑靶向阻斷該通路，能夠抑制EC細胞的增殖，說明該通路的特異性阻斷劑有望成為治療EC的靶向藥物。早在2006年，REDJA等[25]就報道應用CXCR4特異性阻斷劑AMD3100抑制CXCL12/CXCR4信號傳導，研究其對體內膠質瘤生長的抑制作用，并取得成功。而IERANO等[26]研究結果證實，CXCR4拮抗劑和CXCR7拮抗劑通過干擾CXCL12/CXCR4、CXCR7軸影響腎癌細胞mTOR信號通路的生物學效應而用于腎細胞癌的治療;并且有研究證實，CXCR4和CXCR7可預測腎細胞癌的預后[27-28]。還有研究表明，腫瘤相關成纖維細胞通過分泌基質細胞衍生因子-1α（SDF-1α，又稱趨化因子CXCL12）促進EC細胞的增殖、遷移和侵襲，而這一作用能夠被CXCR4特異性拮抗劑AMD3100顯著抑制[7]。CXCR7為CXCL12的另一種重要受體，與CXCR4相比，其與CXCL12親和力更高。GU等[29]的研究顯示，CXCR7 mRNA和蛋白在EC細胞系Ishikawa及原發性EC組織中均高表達，在體外實驗中siCXCR7能夠沉默EC細胞系及組織中CXCR7的表達，降低CXCR7導致的腫瘤細胞增殖的能力。郭瑞霞等[9]體內實驗的結果也顯示，ERK抑制劑PD98059通過阻斷MAPK/ERK信號傳導通路，增加EC細胞系Ishikawa和HEC-1A細胞裸鼠移植瘤組織中腫瘤細胞的凋亡，抑制腫瘤的生長。我們前期的研究結果也證實，ERK信號通路在EC細胞增殖和侵襲中起重要作用，通過CXCL12/CXCR4生物軸激活ERK信號通路上調Survivin蛋白和MMP-2蛋白表達可引發Ishikawa細胞的增殖和侵襲[10]。研究顯示，Survivin蛋白在83%的EC中表達上調，下調Survivin蛋白表達能夠增加Ishikawa細胞的凋亡[30];CXCL12/CXCR4、CXCR7軸在EC組織及細胞中高表達，采用siRNA靶向沉默CXCR4和（或）CXCR7基因表達后，能夠抑制體內外EC細胞的增殖[10-13]。

然而，目前關于多種小分子靶向抑制劑用于體內EC的研究較少，并且抑制劑在體內發揮作用的機制尚未明確。本文研究通過建立裸鼠EC移植瘤模型，將CXCL12下游通路的4種分子靶向抑制劑AMD3100、PD98059、Anti-CXCR7以及AMD3100+Anti-CXCR7用于體內治療。結果顯示，與對照組比較，靶向抑制劑干預各組瘤體生長速度及體積均明顯減小，瘤體組織Survivin mRNA的表達也明顯下調，說明這些靶向抑制劑的抑瘤作用可能與凋亡抑制基因Survivin的下調有關。此外，本文結果還顯示，AMD3100、Anti-CXCR7聯合應用或者單用都能夠抑制裸鼠皮下移植瘤的生長，下調瘤體組織Survivin的表達，但二者聯合應用并不能產生協同抑瘤作用，這可能與存在不同信號通路的相互拮抗作用有關，與我們之前聯合使用CXCR4-siRNA和（或）CXCR7-siRNA進行體內實驗的結果相一致[13]，說明趨化因子CXCL12與其受體CXCR4、CXCR7形成的信號通路可能相互影響。

綜上所述，趨化因子生物軸CXCL12/CXCR4、CXCR7下游的靶向抑制劑AMD3100、PD98059和Anti-CXCR7均能抑制人EC Ishikawa細胞裸鼠皮下移植瘤的生長，且能下調瘤體組織凋亡抑制基因Survivin的表達。CXCR4、CXCR7趨化因子受體拮抗劑以及ERK通路抑制劑有望成為治療EC的新型小分子靶向抑制劑，為臨床治療EC提供更多選擇。現階段，已經開發出拮抗CXCR4的小分子拮抗劑，其中一些正處于臨床試驗階段。普樂沙福（AMD3100）目前已被批準應用于臨床治療非霍奇金淋巴瘤和多發性骨髓瘤[31]，但其應用于EC的治療還需要進一步的研究。本研究結果為CXCL12/CXCR4、CXCR7通路的靶向抑制劑用于治療EC提供了實驗支持。

[參考文獻]

[1] SZWARC M M， KOMMAGANI R， PUTLURI V A， et al. Steroid receptor coactivator-2 controls the pentose phosphate pathway through RPIA in human endometrial cancer cells[J]. Scientific Reports， 2018，8（1）：13134-13145.

[2] KIM T H， YOO J Y， KIM H I， et al. Mig-6 suppresses endometrial cancer associated with Pten deficiency and ERK activation[J]. Cancer Research， 2014，74（24）：7371-7382.

[3] 陳萬青，張思維，曾紅梅，等. 中國2010年惡性腫瘤發病與死亡[J]. 中國腫瘤， 2014，23（1）：1-10.

[4] 朱奕曉，王艷. Hedgehog信號通路與常見婦科惡性腫瘤的研?究進展[J]. 醫學綜述， 2017，23（12）：2364-2369.

[5] 曹楚楚，黃爐仁，傅芬. PI3K/Akt/mTOR信號通路及其相關基因突變與子宮內膜癌靶向性藥物治療的研究進展[J]. 基礎醫學與臨床， 2017，37（1）：118-122.

[6] 車曉霞，姜潔. PI3K/Akt/mTOR信號通路靶向治療在子宮內膜癌中的研究進展[J]. 現代婦產科進展， 2016，25（1）：74-77.

[7] KRIKUN G. The CXL12/CXCR4/CXCR7 axis in female reproductive tract disease： review[J]. American Journal of Reproductive Immunology， 2018，80（5）： e13028-e13035.

[8] TENG Fei， TIAN Wenyan， WANG Yingmei， et al. Cancer-associated fibroblasts promote the progression of endometrial cancer via the SDF-1/CXCR4 axis[J]. Journal of Hematology & Oncology， 2016，9（8）：1-15.

[9] 郭瑞霞，王新燕，張瑞芳，等. 阻斷絲裂原活化蛋白激酶信號通路對子宮內膜癌生長抑制作用的研究[J]. 現代婦產科進展， 2012，21（2）：105-108.

[10] 馬營營，黃煜，顏莉莉，等. ERK信號轉導通路在CXCL12促進子宮內膜癌細胞增殖和侵襲中的作用[J]. 中國腫瘤生物治療雜志， 2016，23（2）：250-254.

[11] LONG Ping， SUN Fengyi， MA Yingying， et al. Inhibition of CXCR4 and CXCR7 for reduction of cell proliferation and invasion in human endometrial cancer[J]. Tumor Biology， 2016，37（6）：7473-7480.

[12] LIU Pingping， LONG Ping， HUANG Yu， et al. CXCL12/CXCR4 axis induces proliferation and invasion in human endometrial cancer[J]. American Journal of Translational Research， 2016，8（4）：1719-1729.

[13] HUANG Yu， YE Yuanying， LONG Ping， et al. Silencing of CXCR4 and CXCR7 expression by RNA interference suppresses human endometrial carcinoma growth in vivo[J]. American Journal of Translational Research， 2017，9（4）：1896-1904.

[14] 金正鈞. 合并用藥中的相加[J]. 中國藥理學報， 1980，1（1）：70-76.

[15] SCHMITTGEN T D， LIVAK K J. Analyzing real-time PCR data by the comparative C（T） method[J]. Nature Protocols， 2008，3（6）：1101-1108.

[16] LIU Hua， ZHANG Liqin， ZHANG Xuyan， et al. PI3K/AKT/mTOR pathway promotes progestin resistance in endometrial cancer cells by inhibition of autophagy[J]. OncoTargets and Therapy， 2017，10（1）：2865-2871.

[17] SUN Niankang， HUANG Shanglang， CHANG Tingchang， et al. Sorafenib induces endometrial carcinoma apoptosis by inhi-biting Elk-1-dependent Mcl-1 transcription and inducing Akt/GSK3 beta-dependent protein degradation[J]. Journal of Cellular Biochemistry， 2013，114（8）：1819-1831.

[18] SLOMOVITZ B M， JIANG Y Y， YATES M S， et al. Phase Ⅱ study of everolimus and letrozole in patients with recurrent endometrial carcinoma[J]. Journal of Clinical Oncology， 2015，33（8）：930-935.

[19] PACKER L M， GENG X Y， BONAZZI V F， et al. PI3K inhibitors synergize with FGFR inhibitors to enhance antitumor responses in FGFR2（mutant） endometrial cancers[J]. Molecular Cancer Therapeutics， 2017，16（4）：637-648.

[20] HASEGAWA K， KAGABU M， MIZUNO M， et al. Phase Ⅱ basket trial of perifosine monotherapy for recurrent gynecolo-gic cancer with or without PIK3CA mutations[J]. Investigatio-nal New Drugs， 2017，35（6）：800-812.

[21] DEL C J， BIRRER M， DAVIS C， et al. A randomized phase Ⅱ non-comparative study of PF-04691502 and gedatolisib （PF-05212384） in patients with recurrent endometrial cancer[J]. Gynecologic Oncology， 2016，142（1）：62-69.

[22] AGHAJANIAN C， SILL M W， DARCY K M， et al. Phase Ⅱ trial of bevacizumab in recurrent or persistent endometrial cancer： a gynecologic oncology group study[J]. Journal of Cli-nical Oncology， 2011，29（16）：2259-2265.

[23] YANG Yuan， ZHOU Jingyi， LI Xiaoping， et al. Gefitinib enhances sensitivity of endometrial cancer cells to progestin the-rapy via dual-specificity phosphatase 1[J]. Oncotarget， 2017，8（70）：115360-115369.

[24] FADER A N， ROQUE D M， SIEGEL E， et al. Randomized phase Ⅱ trial of Carboplatin-Paclitaxel versus Carboplatin-Paclitaxel-Trastuzumab in uterine serous carcinomas that overexpress human epidermal growth factor receptor 2/neu[J]. Journal of Clinical Oncology， 2018，36（20）：2044-2050.

[25] REDJAL N， CHAN J A， SEGAL R A， et al. CXCR4 inhibition synergizes with cytotoxic chemotherapy in gliomas[J]. Clinical Cancer Research， 2006，12（22）：6765-6771.

[26] IERANO C， SANTAGATA S， NAPOLITANO M， et al. CXCR4 and CXCR7 transduce through mTOR in human renal cancer cells[J]. Cell Death & Disease， 2014，5（7）： e1310-e1321.

[27] D’ALTERIO C， CONSALES C， POLIMENO M， et al. Concomitant CXCR4 and CXCR7 expression predicts poor prognosis in renal cancer[J]. Current Cancer Drug Targets， 2010，10（7）：772-781.

[28] GOSSAGE L， EISEN T. Alterations in VHL as potential biomarkers in renal-cell carcinoma[J]. Nature Reviews Clinical Oncology， 2010，7（5）：277-288.

[29] GU Hongqin， ZHANG Zhenbo， ZHANG Jiawen， et al. The role of the SDF-1/CXCR7 axis on the growth and invasion ability of endometrial cancer cells[J]. Archives of Gynecology and Obstetrics， 2017，295（4）：987-995.

[30] KUMAR A， SIROHI V K， ANUM F， et al. Enhanced apoptosis， survivin down-regulation and assisted immunochemotherapy by curcumin loaded amphiphilic mixed micelles for subjugating endometrial cancer[J]. Nanomedicine： Nanotech-nology， Biology， and Medicine， 2017，13（6）：1953-1963.

[31] YOGO T， TSUKADA N， NASHIMOTO J， et al. Efficacy of plerixafor in autologous peripheral blood stem cell collection[J]. Rinsho Ketsueki， 2019，60（3）：165-170.

（本文編輯 黃建鄉）