銀萊湯對胃腸積熱合并肺炎大鼠 胃腸動力的作用及機制研究

高飛 劉鐵鋼 徐競男 白辰 姜欣 李旖旎 黃羚 梅沉成 于河 谷曉紅

〔摘要〕 目的 制作胃腸積熱合并肺炎模型，觀察銀萊湯對胃腸積熱合并肺炎大鼠胃排空及小腸推進率的影響，通過檢測血清中胃饑餓素（Ghrelin）、NO含量變化，初步探討銀萊湯調節胃腸動力的具體機制。方法 將實驗大鼠分為正常組、胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組和銀萊湯治療組共4組，每組10只。其中胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組和銀萊湯治療組給予高熱量飼料喂養，并結合52%牛奶溶液灌胃的方法制作食積動物模型，且后2組采用0.5 mg/mL LPS吸入霧化處理，并予以生理鹽水或銀萊湯灌胃相應的干預。采集大鼠宏觀表征，行胃排空和小腸推進實驗，并用Elisa法測定各組大鼠血清中Ghrelin、NO含量。結果 與正常組相比，胃腸積熱組大鼠的活動度較差，攝食量減少，體質量顯著降低（P<0.05） ;與胃腸積熱合并肺炎組相比，銀萊湯治療組大鼠胃排空和小腸推進率明顯增加（P<0.05） ;與胃腸積熱合并肺炎組相比，銀萊湯治療組大鼠血清的Ghrelin有所升高，且NO含量明顯降低（P<0.05）。結論 胃腸積熱和肺炎因素會影響胃腸道內相關激素的分泌，從而導致其胃排空和小腸推進率的異常，而銀萊湯能夠通過升高血清中Ghrelin含量，并能抑制NO的激素水平，來達到促進胃腸動力作用。

〔關鍵詞〕 銀萊湯;胃腸積熱;肺炎;胃饑餓素;一氧化氮;肺胃同治

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.03.004

Effect of Yinlai Decoction on Gastrointestinal Motility in Rats with Accumulated Heat

in Stomach and Intestine with Pneumonia and Its Mechanism

GAO Fei， LIU Tiegang*， XU Jingnan， BAI Chen， JIANG Xin， LI Yini， HUANG Ling， MEI Chencheng，

YU He， GU Xiaohong*

（School of Traditional Chinese Medicine， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of Yinlai Decoction on gastric emptying and small intestine propulsion rate in rats with accumulated heat in stomach and intestine （AHSI） with pneumonia by establishing a rat model of AHSI with pneumonia， and to preliminary investigate the specific mechanism of Yinlai Decoction regulating gastrointestinal motility by determining the changes in serum levels of ghrelin and nitric oxide （NO）. Methods A total of 40 experimental rats were equally and randomly divided into four groups： normal group， AHSI group， AHSI with pneumonia group， and Yinlai Decoction treatment group. The rats in the AHSI group， AHSI with pneumonia group， and Yinlai Decoction treatment group were given high-calorie feed and 52% milk solution to establish a rat model of dyspepsia. The rats with pneumonia were given 0.5 mg/ml lipopolysaccharide by aerosol inhalation and Yinlai Decoction or normal saline by gavage. The macroscopic characterization of rats was performed. The gastric emptying and small intestinal propulsion experiments were carried out in the rats， and the serum levels of ghrelin and NO were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results Compared with the normal group， the AHSI group had significantly lower range of motion， food intake， and body weight （P<0.05）. Compared with the AHSI with pneumonia group， the Yinlai Decoction treatment group had significantly higher gastric emptying rate， small intestine propulsion rate， and serum level of ghrelin （P<0.05） and a significantly lower serum level of NO （P<0.05）. Conclusion AHSI and pneumonia may affect the secretion of relevant hormones in the gastrointestinal tract， resulting in abnormal gastric emptying and small intestine propulsion. Yinlai Decoction can increase the serum level of ghrelin and reduce the serum level of NO to promote gastrointestinal motility.

〔Keywords〕 Yinlai Decoction; accumulated heat in stomach and intestine; pneumonia; ghrelin; nitric oxide; therapy for lung and stomach

隨著食品工業化的發展和現代生活節奏的加快，人們越來越容易攝取高熱量食物，因此胃腸疾病的發生率也愈來愈高。中醫學理論認為胃主通降，大腸主傳導，若飲食積滯、郁而化熱，則會直接導致胃腸的受納、腐熟、通降（傳導）等功能出現異常，從而出現胃腸積熱證。胃腸積熱是指無形熱邪或有形熱結壅于胃腸，而致胃腸氣分熱盛的一種證態。又因肺為嬌臟，與大腸互為表里，故胃腸之熱?？裳浬弦朴诜?，若再感受外邪，則易致肺胃同病之熱證，從而影響胃腸的正常消化和推動功能。

銀萊湯是谷曉紅教授在臨床上通過多年經驗總結，基于“肺胃同治”立法所創制的方劑，并在臨床實際運用中每獲良效[1]。目前，對于銀萊湯調節胃腸積熱合并肺炎動物的免疫功能研究比較多[2-9]，但是對胃腸動力方面的作用研究卻相對不足，對于銀萊湯調節胃腸動力的具體機制也尚未明確。本研究通過制作胃腸積熱合并肺炎動物模型，探討銀萊湯對其胃腸動力的作用機制。

1 材料

1.1? 實驗動物

SPF級SD大鼠，雄性，2周齡，40只，體質量100～110 g。由北京斯貝福生物技術有限公司提供，動物合格證號SCXK（京）20160002。飼養于北京中醫藥大學中醫學院實驗動物潔凈柜，溫度20～25 ℃，濕度50%～70%。自然光照，通風良好。

1.2? 藥品及試劑

內毒素脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），由美國sigma公司所生產，制備方法：取2.5 mg脂多糖溶于5 mL生理鹽水中，震蕩充分溶解后，-20 ℃保存。銀萊湯由金銀花、萊菔子、連翹、魚腥草、黃芩、前胡、瓜蔞按劑量比例6∶2∶3∶4∶2∶2∶3組成，中藥飲片購自于北京中醫藥大學國醫堂藥房，并按傳統煎藥法煎煮。營養性半固體糊制備：取10 g羧甲基纖維素鈉，溶于250 mL蒸餾水中，分別加入16 g奶粉、8 g糖、8 g淀粉和2 g活性炭末，攪拌均勻，配制成300 mL約300 g的黑色半固體糊狀物[10-11]，冰箱冷藏，用時恢復至室溫。大鼠胃饑餓素（Ghrelin）酶聯免疫分析試劑盒（EIAR-GHRELIN-1，規格：96T），大鼠一氧化氮（NO）酶聯免疫分析試劑盒（KGT008，規格：96T），均由北京百諾威生物科技有限公司提供。

1.3? 主要儀器

AB135-S電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）、NE-C900壓縮式霧化器（大連歐姆龍有限公司）、DG20-002電熱恒溫鼓風干燥箱（北京中科環試儀器有限公司）、OLYMPUS-BX53自動化智能型正置顯微鏡（北京瑞科中儀科技有限公司）、Multiskan GO標準規格酶標儀（美國熱電公司）。

1.4? 動物飼料

動物飼料可分為普通大鼠飼料、高熱量飼料及52%牛奶溶液。根據前期臨床研究結果顯示[12]，牛肉、鴨肉以及其他方便食品是小兒胃腸積熱容易產生的危險因素。故本實驗所選用的奶粉為伊利全脂奶粉，購自市場，灌胃前配制。高熱量飼料是由北京斯貝福生物技術有限公司負責統一生產，其具體配制步驟如下：將鍋巴、巧克力、香辣牛肉粒和面粉按照質量1∶2∶2∶1的比例混合，加入適量的水使其攪拌均勻，制成與普通飼料相同的圓柱條狀，再放入電熱恒溫鼓風干燥箱內加熱烘干備用。經檢驗，由高熱量飼養加牛奶制備的模型符合中醫胃腸積熱的臨床表現，具有較好的穩定性和可重復性[13]。

2 方法

2.1? 造模分組及干預

大鼠按體質量隨機分為正常組、胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組和銀萊湯治療組共4組，每組10只。實驗開始第1至第3天，正常組給予普通食料喂養，生理鹽水灌胃;胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組和銀萊湯治療組則給予高熱量飼料喂養，并給予20 mL/kg牛奶灌胃。第4至第6天，將胃腸積熱合并肺炎組和銀萊湯治療組大鼠分別置于密閉環境內，給予0.5 mg/mL LPS5 mL吸入霧化30 min，每天1次;銀萊湯治療組在第4至6天，按成人臨床參考用量的6.17倍折算或大鼠生藥量282.8 mg/mL，給予20 mL/kg銀萊湯灌胃處理，每日早晚各2次。參照前期研究結果及《大鼠/小鼠辨證論治實驗方法學》[14]，造模后胃腸積熱組大鼠較正常組出現有體質量與飲食量的顯著減少、活動度降低、大便黃臭、粘膩不成形等現象，與臨床診斷要點相符，且光鏡下可以觀察到肺炎造模組大鼠出現炎性細胞浸潤，可認定造模成功[5]。

2.2? 觀察指標

2.2.1? 大鼠基本情況? 觀察并記錄大鼠的癥狀、體征指標，包括毛色、活動、便色、便質等基本情況。

2.2.2? 大鼠體質量? 分別在第1、3、5天固定時間內稱量并記錄動物體質量變化。

2.2.3? 胃排空測定? 將大鼠禁食不禁水18 h，在取材前30 min，給予營養性半固體糊灌胃處理（按平時20 mL/kg吸取灌胃物后，記錄數值，以兩者的差值為該大鼠灌胃量）。將大鼠麻醉后，打開腹腔，結扎胃體的上端（賁門）和下端（幽門），用濾紙將表面拭干后，稱胃全重;再以剪刀沿胃大彎剪開，用生理鹽水沖洗，濾紙拭干，以胃全重和胃凈重的差值為胃殘留量，與所給糊重的百分比為胃內殘留率，則胃排空率計算公式為

胃排空率=[1-（胃全重-胃凈重）/灌胃量]×100%。

2.2.4? 小腸推進率測定? 將大鼠禁食不禁水18 h，在取材前30 min，給予營養性半固體糊灌胃處理。將大鼠麻醉，取出全部腸管，鋪直后測量幽門至回盲腸部全長，以及測量幽門至黑色物質前沿的距離，以兩者之間比值為小腸推進百分率。

2.2.5? 胃腸激素水平測定? 將大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取出全血5 mL，真空采血管分裝，4 ℃低溫離心，3 000 r/min，離心15 min，離心后提取上清液置于-20 ℃冰箱保存，按照Ghrelin和NO酶聯免疫分析試劑盒說明書提供的方法進行測定。

2.3? 統計學方法

統計數據分析采用SPSS 20.0軟件處理，計量資料以“x±s”表示，不滿足正態分布用非參數檢驗，滿足正態分布時，根據方差齊性，采用單因素方差分析，并用LSD法進行組間比較，以P<0.05為差異具有統計學意義，以P<0.01為差異具有顯著統計學意義。

3 結果

3.1? 基本情況

正常組大鼠的精神狀態良好，活動靈便，飲食正常，皮毛柔順有光澤，大便色棕黑，呈梭狀，便量多質粗。胃腸積熱組大鼠的精神較差，攝食量明顯較正常組減少，出現蜷縮扎堆現象，活動度降低，皮毛光澤度下降，大便較粘膩不成形，甚則出現稀便。經銀萊湯治療后大鼠的精神好轉，飲食量逐漸恢復正常，活動靈活度明顯改善，蜷縮扎堆現象消失，糞便基本正常。

3.2? 大鼠體質量觀察

正常組大鼠的體質量隨時間逐漸增長，實驗第3天和第5天，與正常組相比，胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組、銀萊湯治療組大鼠的體質量均顯著降低（P<0.01）;第3天與胃腸積熱組相比，銀萊湯治療組大鼠體質量顯著升高（P<0.01），胃腸積熱合并肺炎組的大鼠體質量有所降低，但差異無統計學意義（P>0.05）;第5天，胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組、銀萊湯治療組各組間相比大鼠體質量差異均無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3.3? 銀萊湯對大鼠胃排空率及小腸推進率的影響

與正常組相比，胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組大鼠胃排空率顯著降低（P<0.05）;與胃腸積熱組相比，銀萊湯治療組大鼠胃排空率明顯增加（P<0.05）;與胃腸積熱合并肺炎組相比，銀萊湯治療組大鼠胃排空率明顯增加（P<0.05）。與正常組相比，胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組大鼠小腸推進率顯著降低（P<0.05）;與胃腸積熱合并肺炎組相比，銀萊湯治療組大鼠小腸推進率明顯增加（P<0.05）。結果見表2。

3.4? 銀萊湯對血清中激素水平的影響

與正常組相比，胃腸積熱組大鼠血清Ghrelin含量明顯降低（P<0.05），胃腸積熱合并肺炎組較正常組亦有所降低，但差異無統計學意義（P>0.05）;與胃腸積熱組與胃腸積熱合并肺炎組相比，銀萊湯治療組大鼠血清的Ghrelin明顯升高，差異具有統計學意義（P<0.05或P<0.01）。與正常組相比，胃腸積熱組、胃腸積熱合并肺炎組大鼠血清NO含量明顯升高，差異均具有統計學意義 （P<0.05）;與胃腸積熱組及胃腸積熱合并肺炎組相比，銀萊湯治療組大鼠血清的NO明顯降低，差異具有統計學意義（P<0.05）。結果見表3。

4 討論

銀萊湯由金銀花、連翹、魚腥草、前胡、黃芩、萊菔子和全瓜蔞七味藥組成。方用金銀花、連翹、前胡等清輕之品來疏泄腠理，逐邪外出，又有萊菔子、瓜蔞來寬中下氣、潤燥通便。諸藥配伍，既能透解肺經外受之邪，又能清泄陽明胃腸里熱，肺、胃、腸上下同治，是臨床上辨證治療胃腸積熱合并肺熱證的一個 有效經驗方。前期實驗研究表明，胃腸積熱因素可通過影響肺中SIgA、IgM、IgG和血清中IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ等免疫球蛋白、細胞因子及腫瘤壞死因子水平，導致機體免疫功能出現異常，從而影響了肺熱證的發生和發展過程[7，8，15]。而肺與大腸又互為表里關系，二者生理相合，病理相關，因此，肺熱證在影響機體免疫的同時，也會導致胃腸動力出現相應的變化。本實驗結果顯示，胃腸積熱大鼠在1～5天造模時間內出現有攝食量減少、體質量下降、大便黃臭、活動度較差等表現，胃排空和小腸推進率較正常組也明顯降低，造成這一結果的原因可能是熱邪阻滯，氣機不通，影響了大鼠正常的受納、運化和排泄功能，從而造成胃腸動力下降。而銀萊湯能夠明顯改善胃腸積熱合并肺炎大鼠的癥狀、表征，促進胃腸蠕動，其調節過程可能是通過影響胃腸道的激素含量水平，來達到加速胃排空及小腸推進率作用的。

在人體整個的消化過程中，機械性消化和化學性消化兩功能是同時進行的。胃腸道的基本生理功能是攝取、轉運、消化食物和吸收營養、排泄廢物，同時胃腸道還可以產生多種腦腸肽類激素，是人體最大的內分泌器官。其中Ghrelin是1999年日本學者Kojima等在小鼠胃組織中發現的一種生長激素促分泌素受體的內源性配體[16]，它包含有28個氨基酸，主要由胃基底部泌酸腺的X/A樣細胞所分泌[17]。而X/A樣細胞能接受基底部的化學刺激及胃腔的物理刺激，通過血液循環，將Ghrelin以內分泌的方式運送到表達其受體GHSR的遠端組織，從而發揮其相關作用。Ghrelin的生物學作用十分廣泛，能夠參與能量代謝，促進攝食，體質量增加和增強心肌收縮力，對胃腸道系統的主要作用包括調節胃腸動力和促進消化液分泌，保護胃黏膜等[18]。它與胃動素表現出許多相同的作用，包括刺激食欲，刺激生長激素釋放，促進胃排空，增強胃動力，對胃腸動力主要起促進作用[19-21]。此外，也有研究表明Ghrelin作為一個與生長和能量代謝密切相關的激素，可能與糖尿病、肥胖、生長遲緩等疾病因素具有相關性[22-23]。NO是胃腸道中的一種非腎上腺素能非膽堿能神經的神經遞質，是由一氧化氮合酶所產生，對胃腸道的消化運動起著主要的抑制作用，如蔡東霞、黃月紅等人[24]在臨床上通過硝酸還原酶法對20例正常人，60例功能性消化不良患者血清進行NO水平檢測，結果發現FD患者血清NO水平明顯高于正常對照組，這表明NO可能會參與FD的發病。而從本實驗結果來看，銀萊湯一方面能夠通過刺激X/A樣細胞來促進Ghrelin激素的分泌，此外還可下調所造模型大鼠血清中NO的水平，來增強胃排空和小腸推進率，進而達到促進胃腸動力的作用的。

本研究通過觀察銀萊湯對胃腸積熱合并肺炎大鼠血清Ghrelin、NO激素水平含量的影響，并測定胃排空及小腸推進率的變化，進一步探討銀萊湯調節胃腸動力的具體機制，這不僅豐富了胃腸積熱證的內涵，同時也對臨床上防治消化道和肺系疾病具有一定的指導意義。

參考文獻

[1] 呂國凱，于? 河，谷曉紅.銀萊湯加減治療小兒肺胃積熱型感冒40例病例系列研究[J].浙江中醫藥大學學報，2014，38（8）：973-975.

[2] 谷曉紅，于? 河.銀萊湯對肺胃積熱證小鼠血清TNF-α和IL-2的影響[J].北京中醫藥大學學報，2008，31（1）：54-57.

[3] 劉鐵鋼，于? 河，張? 望，等.銀萊湯對食積復合流感病毒感染小鼠腸黏膜sIgA、TNF-α、IL-10的作用[J].北京中醫藥大學學報，2014，37（2）：86-89.

[4] LIU T G， WAN Y X， ZHENGZA， et al. Study on mechanism of YINLAI decoction's anti-inflammatory effects with the method of network pharmacology[J]. Acta Medica Mediterranea， 2016， 32（4）：877-882.

[5] 王云輝.銀萊湯對食積肺炎小鼠結腸超微結構及血清中DLA、DAO影響的研究[D].北京：北京中醫藥大學，2017.

[6] 李曉菲.銀萊湯對食積復合流感病毒感染小鼠免疫球蛋白及細胞因子水平影響的實驗研究[D].北京：北京中醫藥大學，2015.

[7] 張? 望.銀萊湯對食積復合流感病毒感染小鼠免疫機制的研究[D].北京：北京中醫藥大學，2013.

[8] 施金鳳，于? 河，王? 上，等.食積因素對FM1流感病毒感染小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].世界中醫藥，2013，8（9）：1085-1090.

[9] LIU T， YU H， ZHANG W， et al. Efficacy and mechanism of action of yin lai tang （lung-stomach treatment） in dyspepsia mouse infected by FM1 virus[J]. Acta Poloniae Pharmaceutica， 2013， 70（6）：1107-1115.

[10] FRANCIS J， CRITCHLEY D， DOURISHCT， et al. Comparisons between the effects of 5-TH and dl-fenfluramine on food intake and gas-tric emptying in the rat[J]. Pharmacol Biochem Behav， 1995， 50（4）：581-585.

[11] 汪? 謙.現代醫學實驗方法[M].北京：人民衛生出版社，2009：926-928.

[12] 董? 斐.胃腸積熱與小兒肺炎喘嗽的相關性研究[D].北京：北京中醫藥大學，2016.

[13] 白? 辰，鄭子安，徐競男，等.食積胃腸積熱動物模型的探索與評價[J].湖南中醫藥大學學報，2018，38（2）：125-129.

[14] 方肇勤.大鼠/小鼠辨證論治實驗方法學[M].北京： 科學出版社，2009：141-145.

[15] 王云輝，李曉菲，甄建華，等.銀萊湯對食積復合FM1流感病毒感染小鼠血清免疫球蛋白及細胞因子含量的影響[J].環球中醫藥，2016，9（10）：1180-1184.

[16] KOGIMA M. HOSODA H， NALAZATO M， et al. Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach[J]. Nature， 1999，402（6762）：656-660.

[17] INUI A， ASAKAWA A， BOWERS C Y， et al. Ghrelin， appetite， and gastric motility： the emering role of the stomach as an endocrine organ[J]. The FASEB Journal， 2004，18（3）：439-456.

[18] 張思超.腦腸相通病機研究[D].濟南：山東中醫藥大學，2002.

[19] BROWN L M， BENOIT S C， WOODS S C， et al. Intraventricular（i3vt） ghrelin increases food intake in fatty Zucker rats[J].Peptides， 2007，28（3）：612-616.

[20] NAHATA M， MUTO S， ORIDATE N， et al. Impaired ghrelin signaling is associated with gastrointestinal dysmotility in rats with gastroesophageal reflux disease[J]. American Journal of Physiology-Gastrointestinal And Liver Physiology， 2012， 303（1）：G42-G53.

[21] FUKUDA H， MIZUTA Y， ISOMOTO H， et al. Ghrelin enhances gastric motility through direct stimulation of intrinsic neural pathways and capsaicin-sensitive afferent neurons in rats[J]. Scandinavian Journal of Gastroenterology， 2004，39：1209-1214.

[22] SAM A H，TROKE R C， TAN T M， et al. The role of the gut-brain axis in modulating food intake[J]. Neuropharmacology， 2012，63（1）：46-56.

[23] SANGER G J，LEE K. Hormones of the gut-brain axis as targets for the treatment of upper gastrointestinal disorders[J]. Nature Reviews Drug Discovery， 2008，7（3）： 241-254.

[24] 蔡東霞，黃月紅，盧賢立，等.一氧化氮在功能性消化不良發病機制中的作用[J].中國現代醫學雜志，2003，13（1）：81.