再生障礙性貧血和低增生性骨髓增生異常綜合征外周血中淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)研究

趙立新

（河南省三門峽市澠池縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)中心 澠池472400）

再生障礙性貧血（AA）是一種由多種致病因素單獨(dú)或共同導(dǎo)致的骨髓衰竭性疾病，因骨髓造血功能衰竭，不能提供足夠的血細(xì)胞，從而導(dǎo)致外周血的減少。低增生性骨髓增生異常綜合征（MDS）是一組克隆性、異質(zhì)性疾病，主要由造血干細(xì)胞增殖分化障礙所導(dǎo)致，臨床表現(xiàn)為骨髓增生異常以及外周血全血細(xì)胞數(shù)減少[1]。AA 以及低增生性MDS 雖然發(fā)病機(jī)制完全不同，治療與預(yù)后均存在極大的差異，但是兩者均以全血細(xì)胞減少為主要臨床表現(xiàn)，且臨床尚無特異性的診斷指標(biāo)，給兩者的鑒別診斷帶來較大的困難。現(xiàn)階段，大量的臨床實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)，機(jī)體免疫異常在AA 以及低增生性MDS 發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[2]。本研究對(duì)比淋巴細(xì)胞亞群在AA和低增生性MDS 患者外周血中表達(dá)的差異，以期為AA 和低增生性MDS 的診斷提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017 年3 月～2019 年1月收治的AA 患者和低增生性MDS 患者各48 例為研究對(duì)象，分為AA 組和低增生性MDS 組。AA組中男28 例，女20 例；年齡24～75 歲，平均（45.68±12.37）歲。低增生性MDS 組中男30 例，女18 例；年齡25～77 歲，平均（45.73±12.33）歲。兩組性別、年齡等一般資料比較無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。所有患者均符合相關(guān)血液病診斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情并簽訂知情同意書，排除伴有嚴(yán)重的消耗性疾病或惡性腫瘤患者。本次研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法 以美國(guó)Beckman Coulter 公司生產(chǎn)的Epics XL 型流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群。檢測(cè)方法：肝素抗凝管收集患者外周血3 ml，以全血/髓溶紅細(xì)胞法制備標(biāo)本，加單克隆抗體（FITC/PE/Percp/APC）標(biāo)記細(xì)胞后測(cè)定并計(jì)算外周血T 淋 巴 細(xì) 胞 亞 群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+）、NK 淋巴細(xì)胞（CD3-CDl6+CD56+NK）及B 淋巴細(xì)胞（CDl9+B）比值。

1.3 觀察指標(biāo) （1）觀察兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布情況。（2）根據(jù)CD4+/CD8+參考值范圍（1.02～1.95），分別將兩組劃分為比值超高組（＞1.95）、比值倒置組（≤1.02）以及比值正常組，分析NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布與CD4+/CD8+比值的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。計(jì)量資料用表示，行t 檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞分布情況比較 兩組外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較無顯著性差異（P＞0.05）；AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細(xì)胞比例低于低增生性MDS 組，CDl9+B 淋巴細(xì)胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布情況比較

表1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布情況比較

組別 n CD3（+%） CD3+CD4（+%） CD3+CD8（+%） CD4+/CD8+ CD3-CDl6+CD56+NK（%） CDl9+B（%）AA 組4875.39±8.3743.24±8.4630.13±7.411.49±0.879.23±6.8212.63±5.67低增生性MDS 組4875.45±8.3343.31±8.4030.09±7.461.43±0.8112.44±5.2910.52±7.87

2.2 NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布與CD2+/CD8+比值的關(guān)系分析 在比值正常組中，AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細(xì)胞比例低于低增生性MDS組（P＜0.05），而兩組CDl9+B 細(xì)胞比例對(duì)比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值倒置組中，AA 組CDl9+B細(xì)胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05），而兩組CD3-CDl6+CD56+NK 細(xì)胞比例對(duì)比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值超高組中，AA 組與低增生性MDS 組CD3-CDl6+CD56+NK 細(xì)胞比例及CDl9+B細(xì)胞比例對(duì)比無顯著性差異（P＞0.05）。見表2。

表2 NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布與CD4+／CD8+比值的關(guān)系分析（%

表2 NK 淋巴細(xì)胞及B 淋巴細(xì)胞的分布與CD4+／CD8+比值的關(guān)系分析（%

組別 n CD3-CDl6+CD56+NK（%） CDl9+B（%）AA組 比值正常組208.72±6.3211.12±6.31比值倒置組1011.26±6.8912.79±7.38比值超高組188.89±6.7910.69±6.74低增生性MDS組 比值正常組1910.59±6.8710.93±6.74比值倒置組1211.24±6.858.25±5.84比值超高組179.02±6.7310.80±6.26

3 討論

AA 發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，可能有多種病理機(jī)制參與其中，但體外實(shí)驗(yàn)以及免疫抑制治療的療效已證實(shí)免疫介導(dǎo)的造血干細(xì)胞損傷在AA 發(fā)病中發(fā)揮了重要作用[3]。低增生性MDS 是MDS 的一種特殊類型，即骨髓增生程度低下，它的臨床表現(xiàn)與AA 的相似，均以外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)以及骨髓象增生減少為主，且均存在免疫紊亂現(xiàn)象，臨床鑒別診斷較難，極易發(fā)生誤診[4]。鑒于AA 和低增生性MDS 患者均存在免疫系統(tǒng)異常，而流式細(xì)胞術(shù)是現(xiàn)階段在血液病分型診斷中發(fā)揮著重要作用的一種檢測(cè)手段，本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)淋巴細(xì)胞亞群在AA和低增生性MDS 患者外周血中的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。

NK 淋巴細(xì)胞近年來已被廣泛應(yīng)用于惡性血液疾病的治療，它是一類在天然免疫中占據(jù)重要位置的大顆粒淋巴細(xì)胞，能夠有效抑制低增生性MDS骨髓造血祖細(xì)胞。AA 與低增生性MDS 患者由于全血細(xì)胞減少可能導(dǎo)致其相應(yīng)的大顆粒淋巴細(xì)胞低于正常參考值，而低增生性MDS 向惡性白血病轉(zhuǎn)化的風(fēng)險(xiǎn)更高，可能由于大量惡性細(xì)胞的存在，故而反饋性地增加了天然免疫相關(guān)的大顆粒淋巴細(xì)胞。因此在本研究中，AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細(xì)胞比例低于低增生性MDS 組（P＜0.05）。B 淋巴細(xì)胞往往與T 淋巴細(xì)胞緊密相連，AA 組CDl9+B 淋巴細(xì)胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05），這可能是由于低增生性MDS 骨髓存在惡性克隆故而導(dǎo)致B 淋巴細(xì)胞增殖受阻。T 淋巴細(xì)胞在AA 與低增生性MDS 中起著至關(guān)重要的作用，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為T 淋巴細(xì)胞功能異常是AA 患者主要發(fā)病機(jī)制，AA 患者更易檢測(cè)到T 淋巴細(xì)胞亞群比例異常[5]。但是本研究中兩組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比較無顯著性差異（P＞0.05），這可能是由于本研究樣本個(gè)體之間存在一定差異。CD4+/CD8+比值對(duì)AA 與低增生性MDS 都存在重要影響，故本研究根據(jù)其參考值范圍對(duì)兩組患者進(jìn)行分組比較后發(fā)現(xiàn)，在比值正常組中，AA 組CD3-CDl6+CD56+NK 細(xì)胞比例低于低增生性MDS 組（P＜0.05），而兩組CDl9+B 細(xì)胞比例對(duì)比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值倒置組中，AA 組CDl9+B 細(xì)胞比例高于低增生性MDS 組（P＜0.05），而兩組CD3-CDl6+CD56+NK細(xì)胞比例對(duì)比無顯著性差異（P＞0.05）；在比值超高組中，AA 組與低增生性MDS 組CD3-CDl6+CD56+NK細(xì)胞比例及CDl9+B 細(xì)胞比例對(duì)比均無顯著性差異（P＞0.05）。這充分說明了在不同CD4+/CD8+比值條件下，AA 與低增生性MDS 患者NK 淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞的差異有不同的表現(xiàn)。綜上所述，淋巴細(xì)胞亞群可作為AA 和低增生性MDS 鑒別診斷的參考指標(biāo)。